血清长基因间非编码RNA0...与临床病理特征及预后的关系_王丽娟.pdf

安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）mellitus patients J/OL.PLoS One，2018，13（1）：e0191134.DOI：10.1371/journal.pone.0191134.8 龚莹莹，刘青，邱威，等.糖尿病患者视网膜病变危险因素分析及其对眼前段生物学结构的影响 J.国际眼科杂志，2020，20（7）：1216-1221.9 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南（2017年版）J.中华糖尿病杂志，2018，10（1）：4-67.10YOU S，LIANG Z，YANG K，et al.Novel discoveries of anterior segment parameters in fellow eyes of acute primary angle closure and chronic primary angle closure glaucoma J.Invest Ophthalmol Vis Sci，2021，62（14）：6.11吴梦楠，吴仁毅.眼球生物学测量参数与原发性闭角型青光眼的研究进展 J.国际眼科杂志，2020，20（10）：1752-1755.12KOCAK ALTINTAS AG，GULPAMUK B，CANKURTARAN V，et al.The correlation between changes in biochemical parameters and central macular thickness in patients with non-proliferative diabetic retinopathy J.Med Hypothesis Discov Innov Ophthalmol，2018，7（1）：10-16.135 BAIN SC，KLUFAS MA，HO A，et al.Worsening of diabetic retinopathy with rapid improvement in systemic glucose control：a review J.Diabetes Obes 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收集2017年3月至2019年2月海南医学院第二附属医院子宫内膜癌病人（子宫内膜癌组）82例；同时收集子宫内膜不典型增生病人（不典型增生组）67例及健康体检者（对照组）79例。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清LINC00511、miR-515-5p表达水平；采用Pearson相关分析子宫内膜癌病人血清LINC00511与miR-515-5p表达水平的相关性；采用Kaplan-Meier法分析子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与预后的关系；多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌病人预后的因素。结果 对照组、不典型增生组、子宫内膜癌组血清LINC00511表达水平（1.020.21、1.820.31、2.600.45）依次升高，miR-515-5p表达水平（1.010.20、0.700.18、0.420.16）依次降低（P0.05）。肌层浸润深度1/2、有淋巴结转移、临床分期期的子宫内膜癌病人血清LINC00511表达水平高于肌层浸润深度1/2、无淋巴结转移、临床分期I期病人，miR-515-5p表达水平低于肌层浸润深度1/2、无淋巴结转移、临床分期期病人（P0.05）。子宫内膜癌病人血清 LINC00511 与 miR-515-5p 表达水平呈负相关（r=0.48，P0.05）。子宫内膜癌病人血清LINC00511高表达病人3年生存率低于LINC00511低表达病人（P0.05）；miR-515-5p高表达病人3年生存率高于miR-515-5p低表达病人（P0.05）。LINC00511、临床分期是子宫内膜癌病人3年内死亡的独立危险因素（P0.05），miR-515-5p是子宫内膜癌病人3年内死亡的保护因素（P0.05）。结论 子宫内膜癌病人血清LINC00511表达上调，miR-515-5p表达下调，二者均与肌层浸润深度、淋巴结转移、临床分期及预后有关。关键词：子宫内膜肿瘤；长基因间非编码RNA00511；微RNA-515-5p；临床病理特征；预后临床医学1590网络首发时间：2023-07-06 13:11:16网络首发地址：https:/ 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）Relationship between serum LINC00511 and miR-515-5p expression with clinicopathological features and prognosis of endometrial carcinomaWANG Lijuan1,WU Wen1,LIN Xiufen2Author Affiliations:1Gynaecology and Obstetrics,The Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou,Hainan 571100,China;2Gynaecology and Obstetrics,Wenchang Peoples Hospital,Wenchang,Hainan 570000,ChinaAbstract：Objective To investigate the relationship between the expression levels of serum long intergenic non-coding RNA 00511(LINC00511)and microRNA-515-5p(miR-515-5p)with clinicopathological features and prognosis of patients with endometrial cancer.Methods Eighty-two patients with endometrial cancer(endometrial cancer group)in the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University from March 2017 to February 2019 were collected.Meanwhile,67 patients with atypical endometrial hyperplasia(atypical hyperplasia group)and 79 healthy people(control group)were collected.QRT-PCR method was performed to detect the expression levels of serum LINC00511 and miR-515-5p;Pearson correlation was performed to analyze the correlation between serum LINC00511 and miR-515-5p expression levels in patients with endometrial cancer;Kaplan-Meier method was performed to analyze the relationship between the expression levels of serum LINC00511 and miR-515-5p and prognosis in patients with endometrial cancer;multivariate Cox regression was performed to analyze the prognostic factors in patients with endometrial cancer.Results The expression level of serum LINC00511(1.020.21,1.820.31,2.600.45)in the control group,the dysplasia group and the endometrial cancer group was increased sequentially,and the expression level of miR-515-5p(1.010.20,0.700.18,0.420.16)was decreased sequentially(P0.05).The expression level of serum LINC00511 in endometrial cancer patients with myometrial invasion depth 1/2,lymph node metastasis and clinical stage-was higher than that in patients with myometrial invasion depth1/2,no lymph node metastasis and clinical stage-,and the expression level of miR-515-5p was lower than that in patients with myometrial invasion depth1/2,no lymph node metastasis and clinical stage-(P0.05).Serum LINC00511 in patients with endometrial cancer was negatively correlated with the expression level of miR-515-5p(r=0.48,P0.05).The 3-year survival rate of patients with high serum LINC00511 expression in patients with endometrial cancer was lower than that in patients with low LINC00511 expression(P0.05);the 3-year survival rate of patients with high miR-515-5p expression was higher than that of patients with low miR-515-5p expression(P0.05).LINC00511 and clinical stage were independent risk factors for death within 3 years in patients with endometrial cancer(P0.05),and miR-515-5p was a protective factor for death within 3 years in patients with endometrial cancer(P18周岁，资料完整且配合度高；首次确诊，所有病人术前未进行放化疗及其他抗肿瘤治1591安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）疗；病人或其近亲属知情同意，符合 世界医学协会赫尔辛基宣言 相关要求。排除标准：有肝肾等脏器实质性病变者；伴有呼吸系统疾病、急慢性感染性疾病及自身免疫系统缺陷性疾病者；伴有除子宫内膜外的第二原发恶性肿瘤者。1.2方法1.2.1实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测血清 LINC00511、miR-515-5p 表达水平采集研究对象确诊后24 h内肘静脉血样，静置后离心15 min（离心转速为3 000 r/min）收集血清，保存至80 冰箱。取出冻存的血清按照Trizol试剂盒（上海研谨生物科技有限公司）说明书操作分离提取血清总RNA，并采用反转录试剂盒（北京伊塔生物科技有限公司）反转录合成cDNA，于qRT-PCR仪上 进 行 反 应，并 进 行 CT 值（循 环 阈 值）分 析，LINC00511、miR-515-5p 相对表达量计算公式为2Ct，内参分别为 GAPDH、U6，引物经软件设计后由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列见表1。qRT-PCR 反应总体系为 20 L，反应程序设置为：95、5 min；95、15 s，60、60 s，40个循环。1.2.2随访自术后起开始随访82例子宫内膜癌病人，病人均未失访，随访率为 100%，随访内容包括了解病人疾病复发及生存情况。随访截止日期为2022年2月，终点为随访结束（3年）或病人死亡。1.3统计学方法数据采用 SPSS 25.0 软件包分析。计量资料服从正态分布以x s表示，组间比较采用独立样本t检验，三组比较采用单因素方差分析，进一步组间两两比较采用 SNK-q 检验；采用Pearson 相关分析子宫内膜癌病人血清 LINC00511与miR-515-5p表达水平的相关性；采用Kaplan-Meier 法分析子宫内膜癌病人血清 LINC00511、miR-515-5p 表达水平与预后的关系，生存率比较采用log-rank检验；多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌病人预后的因素。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组血清 LINC00511、miR-515-5p 表达水平比较子宫内膜癌组血清LINC00511表达水平明显高于不典型增生组、对照组，miR-515-5p表达水平明显低于不典型增生组、对照组（P0.05）。不典型增生组血清LINC00511表达水平明显高于对照组，miR-515-5p 表达水平明显低于对照组（P0.05）。肌层浸润深度1/2、有淋巴结转移、临床分期期的子宫内膜癌病人血清LINC00511表达水平明显较高，miR-515-5p表达水平明显较低（P0.05）。见表3。2.3子宫内膜癌病人血清LINC00511与miR-515-5p表达水平的相关性Pearson相关分析结果显示，子宫内膜癌病人血清 LINC00511 与 miR-515-5p 表达水平呈负相关（r=0.48，P0.05）。见图1。2.4子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与预后的关系以子宫内膜癌病人血清LINC00511（2.59）、miR-515-5p（0.43）表达水平的中位数为临界值，将子宫内膜癌病人分为LINC00511高表达 42 例，LINC00511 低表达 40 例；miR-515-5p高表达 41 例，miR-515-5p 低表达 41 例。采用 Ka表2各组血清LINC00511、miR-515-5p表达水平比较/x s组别对照组不典型增生组子宫内膜癌组F值P值例数796782LINC005111.020.211.820.312.600.45431.550.001miR-515-5p1.010.200.700.180.420.16214.970.001注：与对照组比较，P0.05。与不典型增生组比较，P0.05。表1qRT-PCR引物序列基因LINC00511GAPDHmiR-515-5pU6正向引物5-3ACGAGCGTCGCTGAAGCAGGGCATCCAGGTGCGCATCAGGCAGTACCAAGTATGCGTGGACCGTTGTAGGCGCATAGT反向引物5-3TGCGCCTGAGCTATGCGAGCAACAGTCAGGACTGCTGAAACAGTAAGTCGACGGCATGATCACCAAGTCTGAGCAGGGTAGTAG1LINC00511miR-515-5pABAB2340.00501.00567501000123456712345相对丰度?/min2.003.004.000.200.400.600.801.00图1子宫内膜癌病人血清LINC00511与miR-515-5p表达水平的相关性1592安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）plan-Meier法分析子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与预后的关系，结果显示，子宫内膜癌病人血清LINC00511高表达病人3年生存率（29/42，69.05%）低于LINC00511低表达病人（37/40，92.50%）（2=7.16，P0.05）；miR-515-5p 高表达病人3年生存率（39/41，95.12%）高于miR-515-5p低表达病人（27/41，65.85%）（2=11.18，P0.05）。2.5子宫内膜癌病人预后的影响因素分析将子宫内膜癌病人 3 年内是否死亡作为因变量，将LINC00511、miR-515-5p、年龄、肌层浸润深度、淋巴结转移、临床分期、手术方式、术后辅助放化疗作为自 变 量 进 行 多 因 素 Cox 回 归 分 析，结 果 显 示，LINC00511、临床分期是子宫内膜癌病人3年内死亡的独立危险因素（P0.05），miR-515-5p是子宫内膜癌病人3年内死亡的保护因素（P0.05）。见表4。3讨论子宫内膜癌多数为腺癌，且最常见的为子宫内膜样腺癌，其主要影响绝经后妇女，低于45岁以下的女性中并不常见8-9。本研究确诊的82例子宫内膜癌病人中，子宫内膜样腺癌占74.39%（61/82），绝经后女性占73.17%（60/82），与既往文献基本一致。尽管目前外科治疗使许多早期子宫内膜癌病人预后良好，但晚期或出现转移病人的5年生存率仍呈降低趋势10-11。寻找子宫内膜癌发生发展中关键基表4子宫内膜癌病人预后的多因素Cox回归分析影响因素LINC00511miR-515-5p年龄肌层浸润深度淋巴结转移临床分期手术方式术后辅助放化疗值0.990.150.180.110.050.900.120.12SE值0.370.050.170.270.070.270.220.11Wald2值7.048.221.090.160.4711.040.331.21P值0.0080.0040.2960.6930.4930.0010.5660.271HR值2.700.861.201.111.052.471.131.1395%CI（1.30，5.62）（0.78，0.86）（0.85，1.68）（0.65，1.90）（0.91，1.22）（1.45，4.21）（0.74，1.73）（0.91，1.39）表3子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与临床病理特征的关系/x s临床病理特征年龄 60岁 60岁绝经状态 未绝经 绝经病理类型 子宫内膜样腺癌 黏液/浆液性腺癌肌层浸润深度 1/2 1/2淋巴结转移 无 有组织分化程度 高/中分化 低分化临床分期 期 期肿瘤长径 5 cm 5 cm手术方式 开腹 腹腔镜术后辅助放化疗 无 有例数3349226061215428562647355428592362204240LINC005112.570.462.620.482.550.482.610.492.610.502.560.452.500.402.780.482.500.422.810.462.590.452.620.432.490.462.800.422.600.482.610.462.590.472.630.462.610.492.590.47t值0.470.490.402.803.020.302.980.090.330.19P值0.6390.6230.6870.0060.0030.7620.0040.9320.7400.850miR-515-5p0.460.190.390.140.400.160.430.180.430.180.390.140.480.180.300.140.470.160.320.140.440.190.390.160.480.160.310.130.420.150.410.180.430.160.390.170.420.160.410.18t值1.920.690.924.614.101.264.850.260.960.27P值0.0580.4930.3580.0010.0010.2120.0010.7980.3410.7911593安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2023 Aug，27（8）因的表达异常，是近些年来子宫内膜癌研究的热点。LINC00511被广泛证实为一种促癌基因，可通过高表达诱导癌细胞增殖、迁移及侵袭等许多恶性生物学行为，且与癌症预后有关12-15。但对于LINC00511 在子宫内膜癌中的研究仍未见相关报道。本研究结果显示，LINC00511在子宫内膜癌中显著高表达，且肌层浸润较深、发生淋巴结转移、临床分期越高的病人LINC00511表达上升越明显。提示LINC00511在子宫内膜癌中发挥促癌基因作用，其可能通过高表达参与子宫内膜癌的发生发展，但目前具体机制尚不明确，推测可能与其促进肿瘤细胞恶性增殖有关。此外，本研究中子宫内膜癌病人血清miR-515-5p低表达，且与LINC00511呈显著负相关。Qiao等16研究结果显示，LINC00673可充当miR-515-5p的海绵来上调微管亲和调控蛋白激酶4表达，进而在乳腺癌中发挥促癌作用。基于既往研究结果，推测LINC00511在子宫内膜癌中发挥促癌作用可能是通过调控 miR-515-5p及相关蛋白表达而实现的，有待今后基础研究证实。部分研究17-18显示，治疗方式、临床分期、淋巴结转移、肌层浸润深度等均有可能是影响子宫内膜癌病人预后的因素，而本研究结果中仅 LINC00511、miR-515-5p、临床分期与3年生存率有关，且是影响子宫内膜癌病人预后的独立因素。表明 LINC00511、miR-515-5p的检测水平异常可提示子宫内膜癌病人不良预后，二者有可能成为评估病人预后的生物标志物。与既往研究的差异可能与研究纳入样本量、地域、纳入样本时因纳入排除标准而产生的选择偏倚等因素有关，今后将仅进一步纳入更多样本量进行验证。综上，子宫内膜癌病人血清LINC00511高表达，miR-515-5p低表达，二者与肌层浸润深度、淋巴结转移、临床分期及预后有关。LINC00511、miR-515-5p可能成为新的子宫内膜癌肿瘤标志物，但在子宫内膜癌诊断、治疗及预后评估中的具体临床应用价值仍有待大样本研究验证。且本研究随访时间相对较短，需深入研究得出更为准确的结论。参考文献1 董阳阳，王建六.子宫内膜癌与代谢综合征的关系及内分泌治疗 J.实用妇产科杂志，2020，36（6）：405-408.2 RUZ-CARACUEL I，LPEZ-JANEIRO，HEREDIA-SOTO V，et al.Clinicopathological features and prognostic significance of CTNNB1 mutation in low-grade，early-stage 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