中药复方缓溃乐混悬剂对UC大鼠结肠黏膜中MyD88-mTOR轴的调控作用.pdf

论 著 d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 1-8 3 4 8.2 0 2 3.1 2.0 0 2网络首发 h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/5 0.1 0 9 7.R.2 0 2 3 0 2 1 4.1 0 2 1.0 0 6.h t m l(2 0 2 3-0 2-1 4)中药复方缓溃乐混悬剂对U C大鼠结肠黏膜中M y D 8 8-mTOR 轴的调控作用*卡思木江阿西木江1,穆凯代斯艾合买提2,赵健锋2,马泽宇2,赵成宇2,郭雅莉2,阿依加玛力沙依提3,库热西玉努斯4(1.新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 7;2.新疆医科大学,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 7;3.新疆生产建设兵团总医院检验科,乌鲁木齐 8 3 0 0 0 2;4.新疆医科大学维吾尔医学院,乌鲁木齐 8 3 0 0 1 7)摘要 目的 研究中药复方缓溃乐混悬剂(HK L)对T N B S诱导的溃疡性结肠炎(U C)模型大鼠结肠组织中T o l l样受体4髓样分化因子(M y D 8 8)-雷帕霉素靶蛋白(m T O R)信号通路相关蛋白表达的影响。方法 将S P F级W i s t a r大鼠分为对照组和模型组,其中模型组用T N B S/乙醇复合法干预建立大鼠U C模型。造模成功后,将该组大鼠分为U C组、HK L干预组(HK L组)及5-氨基水杨酸干预组(5-A S A组)。HK L组大鼠灌胃1.8 g/k g HK L,5-A S A组灌胃1 0 0 m g/k g的5-A S A,U C组大鼠给予与 HK L 等体积的生理盐水,每天2次。干预1 4 d后,采集大鼠结肠组织标本,用E L I S A法检测炎症因子干扰素(I F N-)、白细胞介素-1 2(I L-1 2)、肿瘤坏死因子-(T N F-)的蛋白表达水平;用免疫组化法检测M y D 8 8、核因子-B(N F-B)的蛋白表达水平;用W e s t e r n b l o t 法检测mTO R、p 7 0 S 6 K、4-E B P 1蛋白表达水平及mTO R磷酸化水平。结果 与对照组相比,U C组大鼠结肠组织中I F N-、I L-1 2、M y D 8 8、N F-B、p 7 0 S 6 K蛋白表达量及mTO R磷酸化水平上调,T N F-蛋白表达水平下调,差异有统计学意义(P0.0 5);与U C组相比,HK L组大鼠结肠组织中I F N-、I L-1 2、M y D 8 8、p 7 0 S 6 K和4-E B P 1蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.0 5)。结论 中药复方缓溃乐混悬剂对U C大鼠结肠组织中mTO R/p 7 0 S 6 K通路相关蛋白p 7 0 S 6 K、4-E B P 1与M y D 8 8,N F-B蛋白的异常表达和mTO R的过度磷酸化具有一定的调节作用,干预M y D 8 8-mTO R信号通路在U C的治疗中具有一定的意义。关键词 溃疡性结肠炎;复方缓溃乐混悬剂;T o l l样受体4髓样分化因子;核因子-B;雷帕霉素靶蛋白 中图法分类号 R 2 8 5.5 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 1-8 3 4 8(2 0 2 3)1 2-1 7 6 9-0 7R e g u l a t o r y e f f e c t o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e c o m p o u n d HK L s u s p e n s i o n o n M y D 8 8-m T O R a x i s d i s o r d e r i n c o l o n i c m u c o s a o f U C r a t s*KA S I MU J I ANG A x i m u j i a n g1,MUKA I DA I S I A i h e m a i t i2,ZHA O J i a n f e n g2,MA Z e y u2,ZHA O C h e n g y u2,G U O Y a l i2,A Y I J I AMA L I S h a y i t i3,KU R EX I Y u n u s i4(1.D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y,S c h o o l o f B a s i c M e d i c a l S c i e n c e s,X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m c h i,X i n j i a n g 8 3 0 0 1 7,C h i n a;2.X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m c h i,X i n j i a n g 8 3 0 0 1 7,C h i n a;3.C l i n i c a l L a b o r a t o r y,X i n j i a n g P r o d u c t i o n a n d C o n s t r u c t i o n C o r p s G e n e r a l H o s p i t a l,U r u m c h i,X i n j i a n g 8 3 0 0 0 2,C h i n a;4.U y g h u r M e d i c i n e I n s t i t u t e o f X i n j i a n g M e d i c a l U n i v e r s i t y,U r u m c h i,X i n j i a n g 8 3 0 0 1 7,C h i n a)A b s t r a c t O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e(T CM)c o m p o u n d H u a-n K u i L e s u s p e n s i o n(HK L)o n t h e e x p r e s s i o n o f M y D 8 8-mTO R s i g n a l p a t h w a y r e l a t e d p r o t e i n s i n t h e c o l o n i c t i s s u e s o f T N B S i n d u c e d u l c e r a t i v e c o l i t i s(U C)m o d e l r a t s.M e t h o d s S P F W i s t a r r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o t h e n o r m a l g r o u p a n d t h e m o d e l g r o u p.T h e r a t s i n t h e m o d e l g r o u p w e r e i n t e r v e n e d w i t h T N B S/e t h a n o l c o m p o u n d m e t h o d t o e s t a b l i s h r a t U C m o d e l.A f t e r s u c c e s s f u l m o d e l i n g,t h e r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o t h e U C g r o u p,t h e HK L i n t e r v e n t i o n g r o u p(t h e HK L g r o u p)a n d t h e 5-a m i n o s a l i c y l i c a c i d i n t e r v e n t i o n g r o u p(t h e 5-A S A g r o u p).R a t s i n t h e HK L g r o u p w e r e g a v a g e d w i t h 1.8 g/k g HK L,r a t s i n t h e 5-A S A g r o u p w e r e g a v a g e d w i t h 1 0 0 m g/k g 5-A S A,a n d r a t s i n t h e U C g r o u p w e r e g i v e n t h e s a m e v o l u m e o f n o r m a l s a l i n e a s 9671重庆医学2 0 2 3年6月第5 2卷第1 2期*基金项目:国家自然 科学基金项目(8 1 7 6 0 7 5 4);新疆医 科大学大学生创 新项目(C X 2 0 2 0 0 1 2)。作 者 简 介:卡 思 木 江 阿 西 木 江(1 9 8 3-),副教授,博士,主要从事溃疡性结肠炎的发病及其干预机制的研究。通信作者,E-m a i l:k u r a x 8 8 2 4s i n a.c o m。HK L t w i c e a d a y.A f t e r 1 4 d a y s o f i n t e r v e n t i o n,c o l o n i c t i s s u e s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d.T h e p r o t e i n e x p r e s s i o n s l e v e l s o f I F N-,I L-1 2,T N F-w e r e d e t e c t e d b y E L I S A,a n d M y D 8 8,N F-B w e r e d e t e c t e d b y i mm u n o h i s t o-c h e m i s t r y,a n d t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n s o f mTO R,p 7 0 S 6 K a n d 4-E B P 1 a n d t h e p h o s p h o r y l a t i o n l e v e l o f mTO R w e r e d e t e c t e d b y W e s t e r n b l o t.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h t h e n o r m a l g r o u p,t h e e x p r e s s i o n o f I F N-,I L-1 2,M y D 8 8,N F-B a n d p 7 0 S 6 K p r o t e i n s a n d t h e p h o s p h o r y l a t i o n l e v e l o f m T O R i n t h e c o l o n i c t i s s u e s o f t h e U C g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y u p-r e g u l a t e d,a n d l e v e l s o f T N F-w a s d o w n r e g u l a t e d,t h e d i f f e r e n c e w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t(P 0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e U C g r o u p,t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n s o f I F N-,I L-1 2,M y D 8 8,N F-B,p 7 0 S 6 K a n d 4-E B P 1 i n c o l o n i c t i s s u e s o f t h e HK L g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n T h e T CM c o m p o u n d HK L s u s p e n s i o n c a n r e g u l a t e t h e a b n o r m a l e x p r e s s i o n o f mTO R/p 7 0 S 6 K p a t h w a y r e l a t e d p r o t e i n s p 7 0 S 6 K,4-E B P 1,M y D 8 8,N F-B p r o t e i n a n d t h e o v e r p h o s p h o r y l a t i o n o f mTO R i n t h e c o l o n i c t i s s u e s o f U C r a t s.I n t e r v e n t i o n o f M y D 8 8-mTO R s i g n a l i n g p a t h w a y h a s c e r t a i n s i g n i f i c a n c e i n t h e t r e a t m e n t o f U C.K e y w o r d s u l c e r a t i v e c o l i t i s;HK L;M y D 8 8;N F-B;mTO R 溃疡性结肠炎(u l c e r a t i v e c o l i t i s,U C)是免疫介导的胃肠道炎症性疾病,是炎症性肠病(i n f l a mm a t o r y b o w e l d i s e a s e s,I B D)的一个类型,目前已成为一种全球性的疾病1-3。U C病因和发病机制尚未明确,现有的治疗药物并不能完全控制U C的进展和复发,并且许多药物有一定的副作用4。因此,深入了解U C发病机制的同时,开发新的治疗药物或治疗方法十分必要。目前的研究普遍认为U C是感染因素、免疫因素、肠道菌群、遗传因素、环境因素、精神因素等多种因素相互作用的结果5-7,其中宿主的免疫应答在U C的发生、发展过程中起着重要作用。核因子-B(n u-c l e a r f a c t o r-k a p p a B,N F-B)是一种多功能的核转录因子,参与调控基因转录,影响感染性疾病和免疫性疾病的病理演变过程,是U C发病的关键因子8。在机制上,脂多糖(l i p o p o l y s a c c h a r i d e,L P S)和肽聚糖通过上游T o l l样受体4(T L R 4)信号通路和T L R 2信号通路激活雷帕霉素靶蛋白(m a mm a l i a n t a r g e t o f r a p a m y c i n,mTO R)并抑制实验性结肠炎中的自噬,mTO R依赖性自噬调控其下游N F-B的激活,从而导致促炎细胞因子和氧化应激的产生9-1 0。在活动性U C(A-U C)患者的炎症结直肠组织中mTO R磷酸化相关蛋白失调,而T L R 4髓样分化因子(m y e l o i d d i f-f e r e n t i a t i o n f a c t o r 8 8,M y D 8 8)-MA P K信号和N F-B通路也参与此过程的调节。说明M y D 8 8/N F-B 信号通路和mTO R信号通路共同调控U C的发病,干预此信号通路相关蛋白可能在U C治疗中具有重要意义。本研究团队在U C发病机制和中药干预研究工作的基础上研发的中药复方缓溃乐混悬剂(HK L)对大鼠U C具有很好的治疗效果1 1-1 3,具有一定的研发意义,但发病机制尚未完全明确。本研究在分析U C发病过程中M y D 8 8、N F-B和mTO R等信号分子的表达水平差异的基础上,研究HK L对U C大鼠结肠黏膜中N F-B/M y D 8 8及mTO R/p 7 0 S 6 K通路相关蛋白表达的影响,为药物作用机制的明确和药物成分的优化奠定基础。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物S P F 级雄性W i s t a r大鼠,重量(2 0 02 0)g,由新疆医科大学实验动物中心提供,每笼5只大鼠,昼夜节律1 2 h/1 2 h,适应性喂养1周。整个实验过程中所有大鼠的饲养条件保持一致,保持室内温度(2 53),相对湿度6 0%8 0%,大鼠自由进食、饮水。1.1.2 实验药物HK L按 照 处 方 要 求 制 备1 4(专 利 号:2 0 1 8 1 0 7 9 0 4 2 1.7),给药剂量1.8 g/k g(此剂量为高剂量,前期实验基础上确定高剂量组最为有效)。5-氨基水杨酸(5-A S A):将5 g的5-A S A 粉末溶解在2 5 0 m L 0.9%的生理盐水中,浓度2 0 m g/m L,大鼠给药剂量为1 0 0 m g/k g。1.1.3 仪器与试剂高效R I P A裂解液(S a l a r b i o,北京)、蛋白裂解液PM S F(S a l a r b i o,北京)、蛋白磷酸酶抑制剂(S a l a r b i o,北京)、4上样缓冲液(S a l a r b i o,北京)、B C A蛋白定量试剂盒(T h e r m o,美国)、T w e e n(S a l a r b i o,北京)、B S A粉(B i o f r o x x,德国)、脱脂奶粉(S a l a r b i o,北京)、S D S-P AG E 凝胶试剂盒(S a l a r b i o,北京)、N F-B抗体、M y D 8 8抗体(博士德,武汉)、酶标山羊抗兔I g G聚合物(中杉金桥,北京)、mTO R抗体(C S T,美国)、P-mTO R抗体(S e r 2 4 8 1)、4 E-B P 1、p 7 0 S 6 K抗体等。凝胶成像分析仪、4 离心机、超声粉碎匀浆机、5%C O2 培养箱、电泳仪、微波炉、3 7 孵育箱、酶标仪、-8 0 超低温冰箱、4 低温冰箱。1.2 方法1.2.1 大鼠分组、U C模型的建立及 HK L、5-A S A灌胃干预将 5 0只 W i s t a r 雄性大鼠按完全随机法分为对0771重庆医学2 0 2 3年6月第5 2卷第1 2期照组和模型组。模型组大鼠用T N B S/乙醇灌肠建立大鼠U C模型1 5,将5%的T N B S溶入等体积 5 0%的无水乙醇中,缓慢注入U C组大鼠结肠(约8 c m处)。对照组注入相应体积的0.9%氯化钠溶液灌肠,造模结束后将大鼠放入清洁笼内,待其自行清醒,自由进食、饮水。各组随机选取2只大鼠鉴定造模成功后,将模型组大鼠按完全随机法分为U C组、HK L组和 5-A S A组。建立 U C 模型后正常饲养,随机饮水;正常组和U C组给予等量的蒸馏水,5-A S A组灌胃1 m L/2 0 0 g 的5-A S A,HK L组灌胃1.8 g/k g HK L,U C组大鼠给予与 HK L 等体积的生理盐水。各组均从造模第3天开始连续使用相应药物干预1 4 d,每天2次,干预结束后处死大鼠,取出结肠组织进行相关分子生物学实验。1.2.2 免疫组化法检测T L R 2、M y D 8 8和N F-B的蛋白表达量(1)组织石蜡烤片12 h;(2)在二甲苯和二甲苯溶液中各浸泡2 0 m i n,无水乙醇、无水乙醇、9 5%无水乙醇、9 5%无水乙醇和8 0%无水乙醇各浸泡1 m i n,自来水冲洗5 m i n,再用蒸馏水浸泡3 m i n;(3)滴加内源性过氧化物酶阻断剂,在室温中放置1 0 m i n,再用P B S清洗3次,每次5 m i n;(4)适量柠檬酸修复液在微波炉中预热,之后将切片放入预热好的修复液中继续加热,再在室温放置2 3 m i n,蒸馏水冲洗2次,每次2 m i n,P B S清洗2次,每次5 m i n;(5)滴加5%B S A封闭液,在3 7 孵箱放置3 0 m i n;(6)滴加一抗过夜;(7)P B S清洗3次,每次5 m i n,滴加山羊抗小鼠I g G聚合物,在3 7 孵箱放置3 0 m i n,再用P B S清洗3次,每次5 m i n;(8)显色,用自来水冲洗;(9)苏木素复染,用自来水冲洗,在分化液中甩数秒,再用自来水冲洗;(1 0)无水乙醇、无水乙醇、二甲苯和二甲苯溶液中各浸泡3 m i n,滴加树胶,盖玻片封片、固片。1.2.3 W e s t e r n b l o t法检测mTO R蛋白表达量(1)组织总蛋白的提取;(2)B C A法蛋白定量;(3)蛋白变性;(4)S D S-P AG E电泳;(5)转膜;(6)封闭;(7)孵育抗体;(8)E C L化学发光法检测;(9)凝胶图像分析及数据处理。1.3 统计学处理采用 S P S S 2 1.0进行统计分析。符合正态分布的计量资料以xs表示,多组比较采用单因素方差分析(O n e-W a y ANOVA),两组间比较采用L S D-t检验,以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结 果2.1 各组大鼠结肠组织中I L-1 2、I F N-和T N F-的蛋白表达水平与对照组相比,U C组大鼠结肠组织中T N F-蛋白表达水平明显下调,I L-1 2、I F N-蛋白表达水平均明显上调(P0.0 5)。与U C组相比,HK L组大鼠结肠组 织 中T N F-蛋 白 表 达 水 平 明 显 上 调,I L-1 2、I F N-蛋白的表达水平明显下调(P0.0 5),见图1。2.2 各组大鼠结肠组织M y D 8 8和N F-B蛋白表达水平免疫组 化 结 果 显 示,对 照 组 大 鼠 结 肠 组 织 中M y D 8 8和N F-B蛋白表达水平均比较低,主要集中在结肠组织黏膜层;U C组大鼠结肠组织黏膜层和黏膜下层细胞质和胞膜中出现弥漫性黄色颗粒,蛋白表达水平明显高于对照组,用HK L干预后,黏膜层和黏膜下层的黄色颗粒明显减少,M y D 8 8和N F-B蛋白表达水平明显降低。统计结果显示,与对照组相比,U C组大鼠结肠组织中M y D 8 8和N F-B的蛋白表达水平均明显升高(P0.0 1)。与U C组相比,HK L组大鼠结肠组织中M y D 8 8和N F-B的蛋白表达水平均明显下降(P0.0 5或P0.0 5),见图2、3。*:P0.0 5,*:P0.0 1。图1 各组大鼠结肠组织细胞因子蛋白表达水平2.3 各组大鼠结肠组织mTO R及P-mTO R蛋白表达水平的变化与对照组相比,U C组大鼠结肠组织mTO R蛋白的磷酸化水平明显 上调,差异有 统计学意义(P0.0 5)。HK L干预后mTO R蛋白的磷酸化水平有下降趋势,但差异无统计学意义(P0.0 5),见图4。与对照组相比,U C组p 7 0 S 6 K蛋白表达水平明显上升,差异有统计学意义(P0.0 5)。与U C组相比,5-A S A和HK L组大鼠结肠组织p 7 0 S 6 K、4-E B P 1蛋白表达水平明显下降,差异有统计学意义(P0.0 5),见图5。A:对照组;B:U C组;C:HK L组;D:5-A S A组;*:P0.0 5,*:P0.0 1。图2 各组大鼠结肠组织M y D 8 8蛋白表达水平 A:对照组;B:U C组;C:HK L组;D:5-A S A组;*:P0.0 5。图4 各组大鼠结肠组织mT OR及磷酸化的mTO R蛋白表达水平2771重庆医学2 0 2 3年6月第5 2卷第1 2期 *:P0.0 5。图5 各组大鼠结肠组织p 7 0 S 6 K和4-E B P 1蛋白质表达水平3 讨 论近年来,随着人们生活方式及饮食结构的逐渐改变,我国U C的发病率正呈逐年增加的趋势1 6,但迄今为止,U C的特异性致病因素和发病机制仍未明确。哺乳类动物mTO R信号通路是近年来发现的一个重要的信号传导枢纽、代谢调控的主要中枢1 7,其在肠道炎性反应和氧化应激损伤中起关键作用1 8。mTO R过度激活会影响上皮组织细胞的分化,进而通过炎症因子促进U C的发生,即它的异常激活是促炎和促癌的关键因素1 9-2 0。p 7 0 S 6 K是mTO R下游因子,在蛋白质翻译的过程中起重要作用,其在磷酸化激活后可加快mTO R蛋白合成,进一步促进了U C的发生2 1。本研究中与对照组相比,U C组大鼠结肠组织mTO R蛋 白 的 磷 酸 化 水 平 明 显 上 调,说 明mTO R蛋白的磷酸化水平与U C有直接的关系,而HK L组的mTO R水平与U C组相比有明显的下降趋势,接近对照组的mTO R水平。此外,HK L组大鼠结肠组织中p 7 0 S 6 K、4-E B P 1蛋白表达水平均下降,说明mTO R/p 7 0 S 6 K信号通路参与了U C的发生发展,HK L对U C大鼠所出现的mTO R/p 7 0 S 6 K通路相关蛋白p 7 0 S 6 K、4-E B P 1的异常表达和mTO R的过度磷酸化具有一定的调节作用。mTO R信号通路与N F-B通路存在着多水平、多途径的关联。相关研究证明,N F-B是通过各种炎性基因转录的核转录因子,可以引发炎症的瀑布式反应2 2。mTO R和N F-B通路之间存在类似上下游关系,一条通路可直接或间接地抑制、活化另一条通路2 3。研究发 现,依赖mTO R的自 噬调控其下 游N F-B的激活,从而导致促炎细胞因子的产生和氧化应激2 4。另外,U C患者的肠道菌群失调在抗原刺激下激活了免疫系统,这类免疫反应是经过T L R家族刺激下游分子M y D 8 8形成复合物的过程,随后激活下游的N F-B,再进一步引导促炎症因子的转化和分泌,形成“瀑布效应”2 5-2 7。因此,在U C患者的肠黏膜中T L R/M y D 8 8/N F-B信号通路异常激活2 8。本研究发现U C组大鼠的结肠组织中M y D 8 8与N F-B异常高表达,通过中药HK L对U C大鼠进行干预后结肠组织中M y D 8 8和N F-B的表达下调,提示HK L具有抑制异常激活的M y D 8 8/N F-B信号通路的作用。细胞 内M y D 8 8的 募 集、MA P K s的 激 活 诱 导mTO R的磷酸化和典型N F-B通路的激活。活化的核因子N F-B进一步抑制了mTO R依赖性自噬,这使得N F-B p 6 5转移到细胞核并诱导促炎细胞因子的表达,而依赖mTO R的自噬通过其上游的T L R 4-M y D 8 8-MA P K信号和下游的N F-B途径调节肠道炎性反应,抑制mTO R和激活自噬通过抑制炎症和氧化应激而明显改善肠炎2 9。本研究显示,U C组大鼠结肠组织中p 7 0 S 6 K、M y D 8 8和N F-B的蛋白表达水平均明显升高,且mTO R蛋白的磷酸化水平明显上调,同时I F N-、I L-1 2蛋白表达水平明显升高,说明U C发生、发展过程中M y D 8 8/N F-B和mTO R/p 7 0 S 6 K信号通路均发生异常,促炎因子表达量上调,导致炎性反应加重。本研究发现HK L组大鼠结肠组织中p 7 0 S 6 K、4-E B P 1、M y D 8 8和N F-B的蛋白表达3771重庆医学2 0 2 3年6月第5 2卷第1 2期水平下降的同时I F N-、I L-1 2等促炎因子的表达量均下调,说明HK L的治疗作用与M y D 8 8/N F-B和mTO R/p 7 0 S 6 K双信号通路的调节有关,HK L作为复方药物可能通过多靶点发挥作用。综上所述,U C发生是M y D 8 8/N F-B和mTO R/p 7 0 S 6 K异常激活的共同结果,因此治疗过程中多靶点发挥作用的中药复合物可能发挥较好的调控作用。参考文献1NAT A L I A S N,P A RWATHY C,MAG G I E S,e t a l.T h e r a p e u t i c u l t r a s o u n d a t t e n u a t e s D S S-i n d u c e d c o l i t i s t h r o u g h t h e c h o l i n e r g i c a n t i-i n-f l a mm a t o r y p a t h w a yJ.E B i o M e d,2 0 1 9,4 5(6):4 9 5-5 1 0.2I NG R I D O,L A R S E,MA R K T,e t a l.U l c e r a-t i v e c o l i t i sJ.L a n c e t,2 0 1 7,1 0 0 8 0(3 8 9):1 7 5 6-1 7 7 0.3D AN E S E S,R O D A G,P E Y R I N-B I R OU L E T L.E v o l v i n g t h e r a p e u t i c g o a l s i n u l c e r a t i v e c o l i-t i s:t o w a r d s d i s e a s e c l e a r a n c eJ.N a t R e v G a s-t r o e n t e r o l H e p a t o l,2 0 2,1 7(1):1-2.4C O S T E L L O S P,HUGHE S P A,WAT E R S O,e t a l.E f f e c t o f f e c a l m i c r o b i o t a t r a n s p l a n t a t i o n o n 8-w e e k r e m i s s i o n i n p a t i e n t s w i t h u l c e r a t i v e c o l i t i s:a r a n d o m i z e d c l i n i c a l t r i a lJ.J AMA,2 0 1 9,3 2 1:1 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