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微生物学检验复习题
名词解释：
凝固酶：金黄色葡萄球菌可产生游离凝固酶和结合凝固酶两种，前者分泌至菌体外，被血浆中的协同因子激活为凝血酶，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，导致血浆凝固。后者结合于菌体表面不释放，能与纤维蛋白原结合，使纤维蛋白原变为纤维蛋白而引起细菌凝聚，故又称为凝聚因子。
Vi抗原：伤寒、希氏沙门菌的表面抗原，是覆盖在LPS外的荚膜多糖抗原。抗吞噬、抗体、补体，与毒力有关。能阻止O抗原与相应抗体凝集，可进行噬菌体分型。
肥达试验：用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H抗原，检测受检血清中有无相应的抗体的半定量凝集试验，称为肥大反应。
卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较小，这种现象称为卫星现象。
抗O试验：抗链球菌溶素O抗体检测，是一种体外毒素抗毒素中和试验。抗溶血素O抗体ASO可中和溶血素O的活性，常用于风湿热的辅助诊断，活动性风湿热患者抗体效价一般超过400个单位。
MRSA:1ug苯唑西林纸片的抑菌圈直径<10mm或其 MIC>4ug/ml的金黄色片葡萄球菌称为MRSA.
对1ug的苯唑西林抑菌圈<10mm或其MIC>0.5ug/ml的凝固酶阴性葡萄球菌称MRCNS.
统称为耐甲氧西林葡萄球菌MRS.
HLARE:氨基糖苷类高水平耐药，
D试验：克林霉素诱导耐药试验，
外-裴反应:变形杆菌属中的某些特殊菌株如X19、X2、XK、的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，能出现交叉凝集，临床上用这些变形杆菌代替立克次体与患者血清做凝集反应，可作为立克次体病的辅助诊断试验，称为外-裴反应（Weil-Felix reaction）。

迁徙生长现象：奇异变形杆菌和普通变形杆菌的大多数菌株在普通琼脂平板上可蔓延成菌接种部位为中心的厚薄交替的波纹状薄膜布满整个培养基表面的现象，称为迁徙生长现象

神奈川试验：副溶血性弧菌在普通血平板（含羊、兔或马等血液）上不溶血或只产生α-溶血；但在在特定条件下,副溶血性弧菌中某些菌株在含高盐(70g/LNacl)的人O型血或兔血及以D-甘露醇为炭源的我妻(Wagatsuma)血琼脂平板上可产生β溶血,该现象作为鉴定致病性与非致病性菌株的一项重要指标.
结核菌素试验：　结核菌素是结核杆菌的菌体成分，有两种，旧结核菌素（OT）和纯蛋白衍生物（PPD），取5U（0.1ug）PPD或OT 0.1mL注射于前臂掌侧皮下，注射后48~72小时后观察，以是否出现红肿、硬结，以及其大小判断结果。

卡介苗：有毒力的牛型结核分支杆菌在含甘油、马铃薯和胆汁的培养基中经13年230次传代而获得的减毒变异株。

抗酸杆菌：分支杆菌属中大多数细菌，菌体内含有分支菌酸，具有抗酸性，一般不易着色，能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用，这类细菌又称为抗酸杆菌

有菌免疫：是指细菌进入机体后对细菌再次入侵有免疫力，而当细菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也随之消失。
细菌外膜：革兰阴性菌的特有成分，有脂质双层、脂蛋白、脂多糖三部分组成，作为保护屏障可阻止或减缓胆汁盐、抗体及其他可能杀死或损害细菌的有毒物质的进入，也可阻止周质酶等一些细胞成分的损失。
脂多糖：由脂质双层向细胞外表伸出的是脂多糖，包括磷脂A、核心多糖和O-侧链三个组成部分。
R质粒：又称耐药质粒，具有编码能够破坏或修饰抗生素的酶基因。
毒性噬菌体：能在宿主菌细胞内复制增殖,产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌，称为毒性噬菌体。
温和噬菌体：又称溶原性噬菌体，噬菌体基因与宿主菌染色体整合，不产生子代噬菌体，但噬菌体DNA能随细菌DNA复制，并随细菌的分裂而传代。
接合：细菌通过性菌毛相互连接沟通，将遗传物质（质粒）从供体菌转移给受体菌。
溶原性转换：是侵入细菌的噬菌体在溶原期以前噬菌体形式在细菌内与细菌的染色体发生重组，导致细菌的基因型发生改变，溶原性细菌可以获得新的性状。
转导：以温和噬菌体为载体，将供体菌的遗传物质转移到受体菌中，使后者获得新的性状。
Hfr：高频重组株，F质粒基因经接合传递后,与染色体重组,整合后的细菌能以高效率转移染色体上的基因，这种染色体被整合进F质粒基因的受体菌称Hfr。
毒血症：致病菌进入机体后，只能在机体局部生长繁殖不进入血循环，但其产生的外毒素入血。
内素毒：是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，当菌体死亡崩解后游离出来。耐热，有毒性作用（发热、白细胞反应、内毒素血症、DIC），抗原性弱，不可脱毒为类毒素。
外毒素：是多数革兰阳性菌和少数革兰阴性菌在生长繁殖过程中，释放到菌体外的蛋白质。不耐热，毒性强，对组织有选择性作用，抗原性强，可脱毒为类毒素。
中度敏感：常规用药时，达到平均血药浓度，一般相当于或略高于某种细菌的MIC。对细菌引起的感染仅在应用高剂量该药物时有效，或细菌处于体内抗菌药物浓集的部位或体液(尿、胆汁、肠腔）中时才被抑制。对毒性较小药物，可适当加大剂量仍可获得临床疗效。
中介：不是敏感习性的度量，作为“缓冲碱”，以防止因微小技术因素失控导致的结果偏差，临床意义不确定。
MIC：最低抑菌浓度（μg/ml)，指在体外实验中抗菌药物抑制培养基中某种细菌的生长的最低药物浓度，是药物抗菌活性的指标，提示药物的抑菌能力。
汹涌发酵现象：在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，使酪蛋白胨凝固，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白胨冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵“ ，是产气荚膜梭菌的特征。
无芽胞厌氧菌：是指一大群咋爱有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的无芽孢的革兰阳性及革兰阴性的球菌与杆菌。
二相性真菌：有些真菌可因环境条件（如营养、温度。氧气等）改变，可由一种形态转变为另一种形态，此真菌称为二相性真菌。
假菌丝：又称无隔菌丝，是指酵母菌进行出芽生殖时，子母细胞不立即分离而以狭小的面积相连，则称这种藕节状的细胞串为假菌丝。
病毒：是由一个核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。
病毒体：完整的成熟病毒颗粒，由核酸和蛋白质构成，其核心只有一种核酸（DNA或RNA），外被蛋白质衣壳构成核衣壳，有些病毒的核衣壳外还被有包膜。
病毒衣壳:包围在病毒核酸外的一层蛋白质，由一定数量壳粒聚合而成。病毒衣壳的排列呈3种对称型（20面立体对称、螺旋对称、复合对称）可作为病毒鉴定和分类的依据。
包膜：是病毒以出芽方式从细胞内释放时穿过核膜、胞质膜、空泡膜等，在核衣壳外获得了宿主细胞的膜成分。
血凝素：又称红细胞凝集素，为包膜上的柱状突起糖蛋白，与病毒吸附和穿入宿主细胞有关，能与人、鸡、豚鼠等多种红细胞表面的N-乙酰神经氨酸受体结合引起红细胞凝集。
反转录病毒：反转录病毒是带有反转录酶（依赖RNA的DNA聚合酶）的RNA病毒，此病毒在反转录酶的作用下以病毒RNA为模板转录出互补DNA链，单链DNA进入细胞核内互补另一条DNA，形成双链DNA并以前病毒的形式整合于宿主DNA中。
问答题：
1、试述微生物的种类及主要特点
1 试述微生物的种类及主要特点
答：微生物的种类有：非细胞型微生物，原核细胞型微生物，真核细胞型微生物。
主要特点
非细胞型微生物：无细胞结构，无产生能量酶，一种核酸，专性胞内寄生
原核细胞型微生物：拟核，无核仁、核膜，只有核糖体，兼性寄生
真核细胞型微生物：细胞核，有核仁、核膜，细胞器完整，腐生为主
种类：非细胞型微生物、原核细胞型微生物、真核细胞型微生物
特点：1个体小（um/nm)
2结构简单：单细胞或简单多细胞结构，无分化。
3代谢能力强、繁殖迅速
4容易变异、种类多、分布广泛
2、简述正常菌群及生理功能
正常菌群：正常人体的体表及与外界相通的腔道中，都存在着不同种类和数量的微生物。在正常情况下，这些微生物对人类无害，成为正常菌群。
生理作用* 拮抗作用：正常菌群在生物体的特定部位生长后，对其他的菌群有生物拮抗的作用。产生这种生物屏障的往往是一些厌氧菌。正常菌群通过紧密与黏膜上皮细胞结出来占领位置，由于在这些部位数量很大，在营养竞争中处于优势，并通过自身代谢来改变环境的pH值或释放抗生素，来抑制外来菌的生长。
* 营养作用：正常菌群的存在影响着生物体的物质代谢与转化。如蛋白质、碳水化合物、脂肪及维生素的合成，胆汁的代谢、胆固醇的代谢及激素转化都有正常菌群的参与。
* 免疫作用：正常菌群的抗源刺激可以使宿主产生免疫，从而减少了本身的危害。已有实验表明，某些诱发的自身免疫过程具有抑癌作用。
* 抗衰老作用：

3、简述条件致病菌及致病条件
条件致病菌：在正常情况下不致病，在特殊情况下能引起疾病的细菌。
致病条件：1.机体免疫功能低下；2.寄居部位改变；3.菌群失调。

4、比较革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁
细胞壁
革兰阳性菌
革兰阴性菌
强度
较坚韧
较疏松
厚度
20-80nm
10-15nm
肽聚糖层数
可多达50层
1-2层
肽聚糖含量
占细胞壁干重50%-80%
占细胞壁干重5%-20%
磷壁酸
+
—
外膜
—
+
脂蛋白
—
+
脂多糖
—
+

5、革兰染色的步骤及影响因素
（1）步骤：
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）制片：涂片、干燥、固定。
2）初染：草酸铵结晶紫染1分钟。用细流水水冲洗，甩去积水。
3）媒染：加卢戈碘液覆盖涂面染1分钟。用细流水水冲洗，甩去积水。
4）脱色：加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，数秒后水洗，然后斜持玻片，再加酒精，直到流下的酒精无色为止（约30秒），用细流水水冲洗，甩去积水。
5）复染：加稀释石炭酸复红染30秒。用细流水水冲洗，甩去积水。
标本干后，置油镜下镜检。
（2）影响因素
操作因素：涂图片太厚或太薄，固定时菌体过分受热以及脱色时间长短，均会影响结果
染液因素：所有染液应防止染液蒸发而改变浓度，特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用；涂片积水过多会改变染液浓度，影响染色效果。
细菌因素：细菌菌龄不同，革兰染色结果也有差异，一般以18~24小时的培养物染色效果最好，菌龄过长影响细菌染色性。

6、抗酸染色步骤、结果
步骤
1）用接种环挑取约0.01ml脓性或呈干酪样部分痰液做成25mm×20mm大小的均匀薄涂片，待自然干燥后用酒精灯火焰固定。
2）初染 用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
3）脱色3%盐酸酒精脱色至无红色染液脱下为止，用水冲洗。
4）复染 用碱性美兰溶液复染1分钟，用水冲洗后用吸水纸吸干。用油镜检查并记录结果。结果：油镜观察涂片，在淡蓝色背景下可见染成红色细长或略带弯曲的杆菌，并有分枝生长趋向，此为抗酸染色阳性菌。其他细菌或者细胞染成蓝色。
--：仔细观察至少300个视野未发现抗酸菌。
±：100到300个视野内发现1-2条抗酸菌（全部涂膜镜检3遍）;
+：100个视野内发现3-9条抗酸菌（全部涂膜镜检1遍）；
++：10个视野内发现1-9条抗酸菌；
+++：每个视野内发现1-9个抗酸菌；
++++：每个视野内发现9条以上抗酸菌。

7、细菌常用生化试验的培养基、底物、指示剂、结果判断
A 碳水化合物代谢试验
一 . 糖(醇.苷)类发酵试验
底物：糖．醇．苷 产物：酸／酸和气（Ａ／ＡＧ）
指示剂：溴甲酚紫（黄←紫）培养基：肉膏汤Ｐh７.４（含相应
糖．醇．苷） 结果：紫→黄（+） 紫（-） 　
二.　葡萄糖的氧化／发酵试验
底物：葡萄糖 产物：有机酸
指示剂：溴色香草酚蓝（黄←绿→蓝）培养基：ＨＬ葡萄糖培养管　（开放 封闭） 　　　　　　　　　　　　
结果： 氧化管（开 ） 发酵管（封）
绿→黄 绿→黄 发酵型（F）
绿→黄 绿 氧化型（O）
绿/绿→蓝 绿 不利用/产碱型（-）
三 β-半乳糖苷酶试验
底物：邻硝基酚β-半乳糖苷（ONPG）产物：邻硝基酚（黄色） 培养基：ONPG培养基
结果：黄（+） 不变（-）
四 七叶甘水解试验
底物：七叶甘 产物：七叶素 指示剂：Fe2+ 培养基：七叶甘培养基
结果：黑色（+） 不变（-）
五．甲基红试验（ＭＲ试验）
底物：葡萄糖
产物：酸
　 指示剂：甲基红（红　Ｐh＜４.５
　　　　　　　　　　　　↑　
　　　　　　　　　　　　黄　Ｐh＞５.４）
培养基：葡萄糖蛋白胨水
结果： 无色→红（+） 不变（-）
六 VP试验
底物：葡萄糖 产物：乙酰甲基甲醇
指示剂：10%KoH а-萘酚（VP甲乙液）
培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：红色（+） 不变（-）
B　蛋白质和氨基酸代谢试验　
一．吲哚试验（靛基质试验）　　　
底物：色氨酸 产物：吲哚 指示剂：对二氨基苯甲醛（靛基质试剂）
培养基：蛋白胨水 结果：玫瑰色（+） 不变（-）
二.　硫化氢试验（H2S）
底物：含硫氨基酸 产物：硫化氢
指示剂：醋酸铅／硫酸亚铁（Fe2+）　培养基：含铁琼脂
结果：黑色（+） 不变（-）
三．　尿素酶试验
底物：尿素 产物：氨 指示剂：酚红（黄→红）
培养基：尿素肉汤／尿素琼脂培养基
结果：黄→红（+）黄 （-）
四．　苯丙氨酸脱氨酶试验
底物：苯丙氨酸 产物：苯丙酮酸 指示剂：10%三氯化铁
培养基：苯丙氨酸琼脂斜面 结果：绿色化合物（+）
不变 （-）
五． 氨基酸脱羧酶试验
底物：氨基酸 产物：胺和二氧化碳
指示剂：溴甲酚紫（黄→紫）培养基：Ｍoeller脱羧培养基
（含葡萄糖和氨基酸）
结果： 对照管 不变
试验管 黄→紫（+）黄 （-）
此试验需做对照（不含氨基酸的培养基）
C 碳源利用试验
一 枸橼酸盐利用试验　　　　
底物：枸橼酸盐 产物：碳酸盐
指示剂：溴色香草酚蓝（绿→蓝）培养基：枸橼酸盐培养基
结果：绿→蓝（+）绿 （-）
D 呼吸酶试验
一 细胞色素氧化酶试验（OX试验）
OX
原理：细胞色素C → 氧化型细胞色素C+苯二胺→醌类化合物（红色）
指示剂：1%盐酸四甲基对苯二胺/盐酸二甲基对苯二胺
产物：醌类化合物（红色）
结果：10s内红色（+） 不变（-）
二 过氧化氢酶试验/触媒（H2O2试验）
原理： 触媒
H2O2 → H2O+O2 ↑
指示剂：3% H2O2 底物： 3% H2O2 产物：O2
结果：大量气泡O2产生（+） 无（-）
注意：做对照
血细胞中有H2O2 ，可产生假阳性
三 硝酸盐还原试验
原理：
酶系
硝酸盐→亚硝酸盐+ а-萘胺+对氨基苯磺酸→N -а-萘胺偶氮苯磺酸（红色）
底物：硝酸盐产物：亚硝酸盐
指示剂：对氨基苯磺酸/ а-萘胺（甲液/乙液）培养基：硝酸盐培养基
结果：红色（+） 不变（-）
注意：不变色，加入锌粉→红色 真阴性 不变 假阴性
E 其他生化试验
一 凝固酶试验
原理：
方法；结合型血浆凝固酶 → 玻片法 凝集（+）/不凝集（-）
游离型血浆凝固酶 → 试管法 凝固（+）/不凝固（-）
结果：金黄色葡萄球菌（+） 其他（-）
注意：做对照试验
二 卵磷脂酶试验
原理： 酶+Ca2+
卵磷脂 → 甘油脂（混浊）
底物：卵磷脂 产物：甘油脂
培养基：卵黄琼脂平板 结果：混浊（+） 不变（-）
三 DNA酶试验
原理： DNA酶
长链DNA → 寡核苷酸链
（被酸沉淀） （溶于酸）
底物：长链DNA 产物；寡核苷酸链
培养基：DNA琼脂平板 结果：菌落周围透明环（+）
无透明环（-）
四 胆汁溶菌试验
原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，而其他细菌则能耐受。
指示剂：10%去氧胆酸钠
结果：加胆盐的培养基变透明，而对照管仍混浊（+）
加胆盐的培养基仍混浊，而对照管仍混浊（-）
五 CAMP试验
原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，而其他细菌则能耐受。
指示剂：10%去氧胆酸钠
结果：加胆盐的培养基变透明，而对照管仍混浊（+）
加胆盐的培养基仍混浊，而对照管仍混浊（-）
F复合生化试验
一 克氏双糖铁琼脂培养基试验（KIA试验）
培养基：克氏双糖铁琼脂培养基 底物：乳糖和葡萄糖
指示剂：酚红 产物：酸
结果：乳糖 葡萄糖 产气 硫化氢
二 动力-靛基质-尿素酶试验（MIU试验）
培养基：培养基为含尿素、蛋白胨成分的半固体培养基
指示剂：酚红 底物：蛋白胨中的色氨酸、尿素
结果：动力 吲哚 尿素
8、何为细菌的质粒，质粒的主要特点及种类
质粒：质粒为细菌染色体外的遗传物质，环状双股DNA。质粒携带有遗传信息，控制某些特定的遗传性状，可独立复制，与细菌的遗传变异有关。
特点：1）自我复制
2）独立控制特定的性状（F质粒、R质粒、Col质粒、Vi质粒）
3）可在细菌间转移、可丢失、一个细菌体内可带有多个质粒
种类：致育质粒（F质粒）、耐药质粒（R质粒）、细菌素质粒(Col质粒)、毒力质粒
(Vi质粒)、代谢质粒
9、构成细菌侵袭力的物质基础有哪些？
（1）菌体表面结构：主要包括荚膜及其他表面物质。如微荚膜、Vi抗原、K抗原等，都具有抗吞噬、抵抗抗体和补体的作用。 （2）菌毛：通过与宿主细胞表面的相应受体结合而粘附定居在黏膜表面，有助于细菌侵入。 （3）侵袭性酶：是某些细菌代谢过程中产生的与致病性有关的胞外酶，分泌到菌体周围，协助细菌抗吞噬或有利于细菌在体内扩散。主要的侵袭性酶有： 　　1）血浆凝固酶：使血浆发生凝固。凝固物沉积在菌体表面或病灶周围，保护细菌不被吞噬细胞吞噬和杀灭。 　　2）透明质酸酶：又称扩散因子，因而有利于细菌及其毒素向周围及深层扩散。 　　3）链激酶：使细菌易于扩散。 　　4）胶原酶：促使细菌在组织间扩散。 　　5）脱氧核糖核酸酶：有利于细菌扩散。 6）其他可溶性物质：杀白细胞素，溶血素。 (4)芽孢 增强细菌的侵袭力

10、高压灭菌的温度、时间、适用范围，如何对高压灭菌效果进行监测
答：134℃，13~20min，适用于耐高温耐湿的物品，如普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。 监测：高压蒸汽灭菌效果的监测：有以下三种方法。
　　第一种是物理监测。根据安装在灭菌器上的量器（B-D试验，排气、抽真空，反应压力、温度，时间）、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行.。
　　第二种是化学指示监测。化学指示卡或化学指示胶带100%变色来指示灭菌效果。利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数。
　　第三种是生物指示剂监测。嗜热脂肪芽孢菌菌片，121℃≦19分钟-溴甲酚紫葡糖蛋白胨培养基-7天培养-显紫色无嗜热脂肪芽孢菌生长，灭菌合格。

11、简述医院感染及其病原学特征。
,简述医院感染及其病原学特征。医院感染:指住院病人在医院内获得的感染，包括在住院期间发生的感染和在医院内获得出院后发生的感染，但不包括入院前已开始或者入院时已处于潜伏期的感染。医院工作人员在医院内获得的感染也属医院感染。
病原学特征:流行基本环节包括三个基本要素，感染源，感染途径，感染者
分外源性医院感染，内源性医院感染
传播途径：接触传播;空气传播;共同媒介传播（水，食物，医源性（血液）诊疗器械和设备，一次性用品）;生物媒介传播。
流行形式：散发性，爆发性。
易感人群：机体免疫功能严重受损者；婴幼儿及老年患者；营养不良者；接受各种免疫抑制剂治疗者；接受各种侵入性操作者；长期应用光谱抗菌药物者；住院时间长着；手术时间长者。
以革阴为主，也有革阳和真菌感染。

12、L型菌及特点
概念：某些药物作用于细菌，可抑制的肽聚糖的合成或破坏细胞壁的结构，在高渗环境下，细菌仍可存活，成为细胞壁缺陷型
L型细菌的生物学特性：
1、细菌L型的形态和染色性：细菌L型呈高度多形性，大小不一。着色不匀，无论其原为革兰阳性或阴性菌，形成L型大多染成革兰阴性。
2、细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通营养基上不能生长，培养时必须用高渗的含血清的培养基。（3-5%Nacl，10-20%蔗糖，10-20%人或马血清），细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。
3、L型细菌的其他特征：生化反应和抗原结构不典型，无法进行常规的菌种鉴定；人工传代后可回复为野生型；常引起慢性及反复发作的感染，对作用于细胞壁的常规药物不敏感。

13、K-B法药敏试验的影响因素及质量控制
1.药敏纸片的药量和pH值。
2.纸片的规格 药敏纸片的厚度要求在1mm左右，这样适合药物的扩散速度和细菌的生长。药敏纸片的直径为6.00～6.35mm。如果纸片的厚度过厚或过薄，药敏纸片直径过大或过小将影响药敏试验的结果。
3.含药纸片保存和含药纸片片间差。
4.药敏纸片应用标准菌株定期监测是否失效。
5试验操作过程中的影响因素
6细菌的纯度
7 菌液浓度
8 菌液在培养基上的分布
9 贴药敏纸片时，每取一种药敏纸片必须烧一下镊子口，避免药敏纸片之间相互混淆，以提高药敏的准确性。
10培养基种类，在大多数情况下，采用WHO组织统一要求的M-H培养基进行的药敏试验效果较好
11孵育的温度和时间

14、液体稀释法的原理
答：原理：以水解酪蛋白（M-H）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待检菌，定量测定抗菌药物对该菌的MIC 。以外观清晰，肉眼看无细菌生长的最低药物浓度（最高抗生素稀释度）作为MIC 。

15、联合抑菌试验可能出现的结果、及判断标准
联合抑菌试验可能出现的结果、及判断标准可能出现的结果有：1，拮抗作用，2，无关作用 3累加作用 4 协同作用
FIC指数=A药联合时的MIC/A药单测MIC+B药联合时的MIC/B药单测MIC.
判断标准：FIC指数<0.5为协同作用；0.5~1为相加作用;1~2为无关作用；>2为拮抗作用。
16、细菌产生耐药性的生化机制
答：1、产生一种或多种水解酶，钝化酶和修饰酶； 2、抗生素作用的靶位改变，包括青霉素结合蛋白位点和DNA解旋酶的改变； 3、细菌膜的通透性下降，包括细菌生物被摸的形成和通道蛋白丢失； 4、细菌主动外排系统的过度表达。

17、β-内酰胺酶的种类及目前临床最常用的检测方法，常规需做直接β-内酰胺酶检测的细菌有哪些？
答：B-内酰胺酶的种类：按结构（功能）分为丝氨酸（A、C、D）和 金属酶（B）；按分子生物学分类（Bush分类）：1(C)、2a(A)、2b(A)、2bc（A）、2br(A)、2c(A)、2d(D)、2c(A)、2f(A)、3(B)、4.(其它)。
临床检测方法：1、纸片法（头孢硝噻吩纸片），10分内观察结果纸片由黄变红为阳性，表示有B-内酰胺酶产生。2、碘淀粉法，10分后蓝色消失为阳性。
常规需进行B-内酰胺酶的检测的细菌有：肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌、嗜血杆菌属、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌葡萄球菌、肠球菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌、产酸克雷伯菌等。

18、何为ESBL，临床意义及CLSI推荐的检测方法，哪些细菌应常规检测ESBL？
● ESBL为超广谱β内酰胺酶
●临床意义：①临床上以革兰阴性杆菌产生的超广谱β内酰胺酶（ESBLs）最受重视，一旦ESBLs阳性，不管体外药敏如何，均应视为对青霉素和所有头孢菌素类耐药，应改用其它抗菌药物。②产ESBLs菌在体外对多种抗生素敏感而在感染者体内却表达临床意义耐药。③检出ESBL菌株可对症下药，缩短病人住院时间，减少病人痛苦，还可以大大减少院内感染且为患者节省开支。
●CLSI推荐的检测方法：双纸片协同法。
●哪些细菌应常规检测ESBL：肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌等革兰阴性杆菌。

19、何为MRSA？临床意义及检测方法
  MRSA是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的缩写，是金黄色葡萄球菌家族中的一种

检测方法
  1、纸片扩散法（K-B法）2、肉汤稀释法3、琼脂稀释法4、琼脂筛选法5、浓度梯度法6、自动化药敏检测7、DNA探针杂交8、PCR技术

20、淋病的确诊应如何进行微生物学检查
答：先培养:即疑为淋病奈瑟菌感染的标本接种于选择培养基如NYC、MTM、ML，立即置于5％CO2气体条件下35~37℃孵育，培养基需观察72小时后无菌生长可报告为阴性，每隔24小时观察，淋病奈瑟菌的菌落呈灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落。
然后进行革兰染色镜检:将菌落涂片，革兰染色后显微镜下见革兰阴性双球菌，再进行氧化酶和触酶试验，葡萄糖发酵试验阳性，其他糖类试验阴性于是可确诊为淋病奈瑟菌。

21、链球菌是如何分类和鉴定的？
链球菌的分类：根据溶血现象分类：甲型溶血性链球菌、乙型、不出现溶血的丙型。
根据Lancefield抗血清分型将分为ABCD…..等20个群。对人类治病主要是A群。
鉴定：羊血脂平板识别溶血特性，涂片格兰染色，镜检，如果为G+，进一步做触酶试验，6.5%的NaCL不生长着，可确定为链球菌细菌。

22、肺炎链球菌致病因素及鉴定要点，如何区分肺炎链球菌与草绿色链球菌？
肺炎链球菌的致病因素：肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起着重要作用；肺炎链球菌的溶血素、神经氨酸酶也是其主要致病物质
鉴定要点：发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性，胆汁溶菌试验和Optochin阳性。a溶血性链球菌。荚膜多糖使菌落呈粘液状；可产生自溶酶，培养48h后出现“脐窝状”菌落。对青霉素耐药甚至多重耐药。
如何区分肺炎链球菌和草绿色链球菌：肺炎链球菌：Optochin为S，胆汁溶菌试验阳性。草绿色链球菌：Optochin为R，胆汁溶菌试验阴性。
23、肠杆菌科细菌有哪些共同的生物学特性？如何区分肠杆菌科细菌与其他革兰阴性杆菌？
答：共同的生物学特性：
1. 形态与染色：G –杆菌，多数有周鞭毛、有荚膜或微荚膜，致病菌株多数有菌毛，均无芽胞，多数有动力。
2、培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普特培养基上和MAC上生长良好。
3、生化反应：
氧化酶－；发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）；触酶＋；硝酸盐还原试验＋
发酵多种糖类，多数能发酵乳糖，产酸产气
★利用乳糖发酵试验初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌：
肠道致病菌→多数不发酵乳糖
肠道非致病菌→多数发酵乳糖
4、抗原构造复杂：鞭毛抗原（H）、K或Vi抗原、菌体抗原（O）
5、抵抗力不强，加热60℃30min即被杀死，不耐干燥，对一般化学消毒剂如漂白粉、酚、甲醛等均敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐，并在一定程度上能抵抗染料的抑菌作用。
6、易变异：通过接合、转导、溶源性转换引起耐药性变异、毒力性变异、生化反应性变异
7、临床意义：
☆致病物质：菌毛、表面抗原、内毒素、肠毒素
☆传染途径：肠道传染、肠道外传染
☆所致疾病：○肠道致病菌引起肠道传染病（细菌性痢疾、伤寒等）
○条件致病菌：是医院感染的主要病原菌
肠杆菌科细菌与其他革兰阴性杆菌区分
肠杆菌科细菌与其它G-b鉴定要点:
肠杆菌科 弧菌科 非发酵菌
O/F（葡萄糖） F F O/-
氧化酶 - + +
形态 杆状 弧形 杆状
鞭毛 周毛或无 单毛 单、丛、周或无

24、哪些是主要引起人类肠道感染的肠杆菌科细菌？
埃希菌属，志贺菌属，沙门菌属，耶尔森菌属。
25、如何进行肠杆菌科细菌的微生物学检验？
答:尿液标本
1 首先是直接图片染色,给出初步报告
2 接种在BAP和MAC上,35℃培育箱中培育18～24小时
3 培育好后,做涂片染色,和氧化酶实验.然后转种到KIA和MIU上以及O/F,37℃培育18～24小时.
4 然后观察结果，全面生化鉴定和血清学分型
5 药敏试验
注:1 血清和脑脊液标本需要先增菌,然后做1～4步
2 粪便呕吐物的分离培养是在(SS/HE/XLD和MAC/EMB/中国蓝)上边进行,然后同尿标本
以上实验步骤为肠杆科菌属的检验程序
报告依据:
⑴ 革兰阴性无芽孢杆菌
⑵ O/F为发酵型
⑶ 吲哚/甲基红/V-P/枸橼酸盐(IMVC)
⑷ MAC上面的菌落
⑸ KIA实验的结果
肠杆菌的定科主要依靠O/F实验和氧化酶实验，以及菌的形态和有无鞭毛（有鞭毛的细菌才具有致病性）来定。
属种的鉴定可以用自动仪和商品鉴定盒来定。
手工操作结果判定各种属特点：
大肠埃希氏菌：在选择性平板上课发酵如糖，形成有色菌落：EMB上市粉红色有金属光泽；MAC上粉红或红色；HE上中度抑制，菌落呈橙红色或橘红色；SS上受抑制，菌落呈粉红色或者中间粉红色，周围无色；XLD上市不透明的黄色。KIA上为AA+-,(上下产酸产气，H2S阴性)MIU（动力/吲哚/尿素）++-. IMVC++--
沙门菌属：KIA结果可能为葡萄糖分解阳性，乳糖分解阴性，有的产气，有点不产气，有的H2S阳性 有的阴性。MIU+--；IMVC:-+--或者-+-+。沙门菌属的血清学鉴定中，H血清分型如果第二相不凝，可能是位相诱导.
志贺菌属：无鞭毛，在增菌培养是在GN肉汤上，37℃培养4到6小时即可。KIA上，产碱/产酸、不产气、H2S阴性；MIU-(+/-)-,IMVC上（+/-）+--。血清定型原则是先多价，后单价，需对照。
小肠结肠炎耶尔森菌：粪便标本在增菌时采用冷增菌培养，4～5℃培养2到3周。25℃动力阳性，37℃动力阴性。尿素阳性
克雷伯菌属：对氨苄西林天然耐药，对头孢容易耐药。
肠杆菌属：IMVC结果与大肠埃希氏菌属相反，为--++,动力和鸟氨酸均阴性。
变形杆菌属：周身鞭毛，H2S阳性，同种间的鉴定，普通变形杆吲哚阳性，普通变形杆与豪氏主要依靠七叶苷和水杨苷实验，前者两项为阳性，后者为阴性，奇异变形杆的特点是鸟氨酸阳性，产黏变形杆是木糖发酵阴性，潘氏变形杆是氯霉素耐药。
26、变形杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌鉴定要点
变形杆菌
1、G- 杆菌
2、普琼：有迁徙现象。SS：中心呈黑色
3、氧化酶-
4、尿酶+
5、KIA：KA++
小肠结肠炎耶尔森菌
1、G-杆菌
2、CIN：菌落为粉红色，偶有一圈胆盐沉淀
3、氧化酶：-
4、尿酶+
5、KIA：KA--
6、TSIA：AA
7、血清定型
27、不发酵革兰阴性杆菌的共同特点是什么？临床常见菌属有哪些？
答: 1 培养 在一般培养基上生长良好，包括血平板，巧克力平板。
2 革兰染色 革兰阴性杆菌。
3 氧化酶实验大多为阳性。
4 O/F 为O型，不利用或产碱（N/F）。
5 KIA斜面穿刺生长不良，底层穿刺上可生长 ，斜面及底层均呈碱性生长。
6 动力实验在半固体中仅在穿刺的4mm左右生长，4-6h初步观察，时间久了动力消失。
临床常见菌属有假单胞菌属，不动杆菌属，产碱杆菌属，黄杆菌属，莫拉菌属，军团菌属。

28、产碱杆菌、不动杆菌属鉴定要点
产碱杆菌属：在MAC 、SS平板上可形成无色透明的菌落，在血平板上行成灰色，扁平，边缘薄的较大菌落。
生化鉴定：氧化酶及触酶（+）、O/F产碱性、脲酶（—）、动力（—）不液化明胶、不分解任何糖类
不动杆菌属：在普通培养基和麦康克平板上生长良好，最是温度为35度，有些菌株可在42度生长，在SS琼脂平板上有部分菌落生长，
生化鉴定：氧化酶（—）、动力（—）、硝酸盐实验(—)

29、铜绿假单胞菌的主要生物学特性
1）、形态特征：为格兰阴性菌，长短不一，球状或长丝状，成双或成锻炼排列。一端有鞭毛，运动活泼，无芽孢。可产生多种色素，如绿脓素与带荧光的水溶性荧光素。
2）、培养特性：专性需氧菌，部分菌株能在兼性厌氧条件下生长，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，可生长的温度范围为25—42摄氏度，最适生长唯独为25—30摄氏度，4摄氏度不生长。氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖、产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。
3)、有O抗原和H抗原，其中O抗原包含外膜蛋白，脂多糖两种成分。外膜蛋白是保护性抗原，脂多糖具有特异性，应用抗原成分可对铜绿假单胞菌进行血清学分型，目前可分为20个血清型。

30、革兰阴性杆菌鉴定步骤
见书
31、革兰阳性球菌鉴定步骤
见书
32、细菌实验室应如何检验疑为霍乱的粪便标本？
粪便标本：（1）a·涂片b·动力制动试验===>快速检测→初步报告
（2）接种碱性胨水--（25℃ 6-8小时）→转钟a·TCBS或4号琼脂—35℃ 12-18小时→观察可疑菌落。
（3）生化鉴定：a·涂片 染色（菌体短小 弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌）b·氧化酶试验（+）c·粘丝试验（+）d·O/129敏感试验 （s）e·O1群，O139群血清凝集实验（+）
（4）分纯：转钟KIA→生化鉴定：a耐盐性试验NAcL【0%（+） 1%（+） 3%（+） 6%（+） 8%（-） 10%（-） 】 ；b 血清型鉴定；c生物型鉴定

33、简述结核分枝杆菌的形态及培养特性（培养基）
答：形态：细长略弯曲的杆菌，有时可见啊分枝状，无芽胞和鞭毛，因衰老和抗结核药物的作用可出现多种形态，如球状、串珠状或丝状。
培养特性：在固体培养基上，菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样。在液体培养基中，生成菌膜。如在培养液中加入吐温-80可是细菌分散，均匀生长，有毒株的在液体培养基中呈索状生长。

34、如何进