医学科研课题开题报告.doc

医学科研课题开题报告
　　科研，它由课题执行人负责填写，对所承担的研究工程的准备情况、该项研究的目的、意义进展介绍，并对完成该课题的措施、方法及进度进展安排。科研开题报告上报科研管理部门，经上级批准后，科研课题组的全体成员都要遵照执行。下面的是分享的与医学科研课题开题报告有关的文章，欢迎继续访问报告网!
　　恶性黑色素瘤是一种高度恶性且最具侵袭性的癌之一，多发生于皮肤，早期发生血行转移。对放、化疗不敏感，在世界范围内发病率增高，人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新的疗法的出现!
　　最近大量的数据说明恶性肿瘤的开展与T-钙粘蛋白的表达变化相关.T-钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少.最近的研究说明T/H 钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长,降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能[1].T/H 钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类许多癌细胞中表达都降低说明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移[10]及维持正常细胞的表型中起重要作用[11].
　　T/H 钙粘蛋白与肿瘤的发生、开展有着密切的联系,也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机.
　　T-钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用，目前还没有相关研究的报道，所以本实验将进展相关方面的探讨性研究!
　　研究内容及预期成果(说明详细研究内容、创新点及拟解决的关键问题、预期成果及提供形式)
　　第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况
　　第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建
　　第三部分：T-cadherin基因的真核表达及生物活性分析
　　创新点：首次将T-cadherin基因转染黑素瘤细胞
　　拟解决的关键问题：通过RT-PCR反响扩增出T-cadherin的基因全长。
　　观察T-钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况!
　　进一步说明T-钙粘蛋白作用机制
　　T-钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法!
　　研究方案(包括研究方法、技术路线、研究进度安排)
　　第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T-cadherin表达情况
　　材料：从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞株
　　(1)第一抗体：兔抗人T-cadherin 抗体
　　(2)第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG
　　(3) 三抗 ：链亲和霉素标记HRP
　　(1)冷冻切片的免疫染色程序
　　(2)活细胞的免疫染色程序
　　注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照
　　阴性对照(PBS代替一抗)以证明抗体的特异性。
　　第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表达载体的构建
　　(1)组织和细胞
　　(2)菌株与质粒
　　(3)工具酶
　　(4)试剂
　　(5)仪器
　　(1)引物的设计
　　(2)总RNA的提取：异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法
　　(3)甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量，观察所提RNA有无明显降解;
　　(4)逆转录RT反响 ：为了证实RT反响的成功设管家基因GAPDH为内对照
　　(5)PCR扩增 ：利用上下游引物，在DNA聚合酶下对目的片段进展扩增，PCR过程设β-actin为内对照
　　(6)PCR产物的回收、纯化
　　(7)PCR产物的克隆
　　(8)DNA序列测定
　　(9)真核重组表达质粒的构建
　　(10)阳性重组质粒的鉴定和筛选
　　(11)质粒的大量提取
　　(12)转染黑色素瘤细胞
　　第三部分：T-钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析
　　(1)转染细胞的培养
　　(2) Western印迹法检测转染后蛋白的表达
　　(3)流式细胞周期分析
　　(4)凋亡的检测
　　技术路线图：
　　研究进度安排：
　　学习学位课程，查阅文献，完成课题设计
　　根本完成实验研究工作
　　完成实验补遗工作并 进展统计分析，撰写论文
　　论文辩论
　　试剂费用： 1500元
　　《BR》组织及细胞： 100元
　　论文打印费： 100元
　　辩论费： 150元
　　总计： 19000元
　　已完成黑色素瘤及T-钙粘蛋白研究最新进展的文献检索和综述报告工作。
　　所有实验均在承德医学院附属医院皮肤病研究室和中心实验室完成。实验室的老师实验技术熟练，在细胞培养、免疫组化及分子生物学等方面都可给予指导;实验所需的科研仪器设备实验室均具备。
　　Toyooka,KO.,Toyooka S.,Virmani AK.,Sathyanarayana UG et al Cancer Res xx Jun 1;61(11):4556 60
　　Lee,S.W.,1996 Nat.Med,2:776 782
　　Zhong ,Y.,Y.Delgado.,J.Gomez,S.W.Lee et al xx Clin Cancer Res.
　　Takeuchi,M.,Misaki,A.,Chen,B.K.,et al (1999)Histopathology,35,87 8
　　Kawakami,M.,Staub,J.,Cliby,W.,et al 1999Int.J.Oncol.,15,715 720
　　Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al(1998)Hum.Ge.,43,285 286
　　Sato,M.,Mori,Y.,Sakurada,A.,et al (1998)Hum.Ge.,103,96 101
　　Mori,Y.,Matsunaga,M.,Abe,T.,et al (1999)Br J.Cancer,80,556 562
　　Lee.S.W(1996)Nat.Med.,2,776 782
　　Hung.Z.Y.,Wu,Y.,Hedric,N&Gutmann,D.H(xx)Mol Cell.Biol 23,566-578
　　Lee SW.,Reimercl.,Campbell DB.,et al 1998Jun;19(6):1157-9