植物乳杆菌对氨气应激肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响.pdf
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1、动物营养学报,():植物乳杆菌对氨气应激肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响马艳华 李 奎 沈媛媛 刘金松 冯 杰 张瑞强(濮阳职业技术学院生物与食品工程学院,濮阳;浙江农林大学动物科技学院,动物医学院,杭州;浙江惠嘉生物科技股份有限公司,安吉;浙江大学动物科学学院,杭州)摘 要:本试验旨在探究植物乳杆菌对氨气应激肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响。选取健康的 日龄黄羽肉鸡 只,随机分为 个组,每组 个重复,每个重复 只鸡。对照组和氨气应激组饲喂基础饲粮,氨气应激植物乳杆菌组饲喂在基础饲粮中添加 植物乳杆菌(活菌数为 )的饲粮。试验期 。于试验第 天起,氨气应激组和氨气应激植物乳杆菌组进行 的氨气应激处
2、理,对照组不通氨气。结果表明:)与对照组相比,氨气应激组肉鸡屠宰后胸肌 的 以及 和 的红度()值显著降低(),和 的亮度()值以及 的蒸煮损失显著提高(),水分和粗灰分含量显著提高(),有机物和粗蛋白质含量显著降低(),总超氧化物歧化酶()、过氧化氢酶()、谷胱甘肽过氧化物酶()活性和总抗氧化能力()显著降低(),丙二醛含量显著提高(),核因子 相关因子()、超氧化物歧化酶()和超氧化物歧化酶()相对表达量显著降低()。)与氨气应激组相比,氨气应激植物乳杆菌组肉鸡屠宰后胸肌 和 的 以及 的 值显著提高(),的 值以及 和 的滴水损失显著降低(),水分和粗灰分含量显著降低(),粗蛋白质含量显
3、著提高(),、和 活性及显著提高(),相对表达量显著提高()。综上所述,饲粮中添加植物乳杆菌能够提高氨气应激肉鸡胸肌肌肉品质,改善肌肉成分,并通过调控 信号通路增强肌肉抗氧化能力,缓解氨气应激造成的氧化应激损伤。关键词:植物乳杆菌;氨气应激;肉鸡;肌肉品质;抗氧化功能中图分类号:文献标识码:文章编号:()收稿日期:基金项目:浙江省领军型创新创业团队项目();浙江省博士后择优资助项目();浙江省重点研发计划项目();浙江省重点农业企业研究院项目()作者简介:马艳华(),女,河南汝南人,讲师,硕士研究生,主要从事生物技术研究。:通信作者:张瑞强,讲师,:在对动物源性食品日益增长的需求推动下,国内畜
4、禽生产模式由传统的自由放养稳步转向更专业化和规模化的集中饲养体系,这大幅提升了生产能力和生产效率。而肉鸡作为家禽的重要组成部分,近年来市场不断发展,规模不断扩大,预计 年全球年产量将达到 亿。但随着肉鸡养殖业规模化和集约化的提高,养殖中的问题也愈发凸显,养殖中排放的大量有害气体如硫化氢、氨气等,对肉鸡的危害非常严重,可造成肉鸡生长性能下降、疾病增多以及肉质变差等。因此,如何保障肉鸡产品质量安全,促进肉鸡产业实现健康发展,是畜禽业发展需要解决动 物 营 养 学 报 卷的重要问题。畜禽养殖场氨气浓度过高易导致畜禽总抗氧化能力降低、免疫力下降和抗病力降低,继而引发各种畜禽疾病,导致生长性能下降,死亡
5、率大幅提高,造成惨重的经济损失。过高浓度的氨气暴露还会影响畜禽采食,降低饲料转化率,导致蛋白质和能量水平的摄入减少,进而影响动物肌肉内氧化型肌纤维的比例和脂肪含量,使畜禽的肌肉品质下降。近年来,有关益生菌用于畜禽养殖的研究结果显示,许多益生菌均可增强机体免疫力和抗病力,抑制有害微生物生 长,提 高 畜 禽 的 生 长 性能。植物乳杆菌是一种革兰氏阳性菌,菌种呈短杆状,有时成对或成链状,不产芽孢,属于同型发酵乳酸菌,在发酵过程中只产生乳酸,是典型的兼性厌氧菌,有很强的发酵碳水化合物的能力,较耐盐。研究显示,植物乳杆菌能够改善肠道形态结构和菌群结构,提高机体免疫能力和抗病力,促进动物生长。本课题组
6、在此前的研究中发现,饲粮中添加植物乳杆菌具有提高肉鸡生长性能、促进消化器官发育和改善肉鸡有机物和粗蛋白质表观消化率的作用。但是,有关植物乳杆菌调控肉鸡肌肉品质的作用及其发生机理的研究鲜见报道。因此,本文拟通过动物试验,研究植物乳杆菌对氨气应激下的肉鸡胸肌肌肉品质、肌肉成分、抗氧化能力和抗氧化相关基因表达的调控作用,为缓解肉鸡养殖中氨气应激导致的肉鸡肌肉品质下降和促进家禽养殖高质量发展提供理论依据。材料与方法 试验材料 本试验所用植物乳杆菌由浙江某公司提供,活菌数为 。试验设计 试验选择 只体重均匀、健康的 日龄黄羽肉鸡,随机分为 个组,分别是对照组(组)、氨气应激组(组)和氨气应激植物乳杆菌组
7、(组),每组 个重复,每个重复 只鸡。对照组和氨气应激组饲喂基础饲粮,氨气应激植物乳杆菌饲喂在基础饲粮中添加 植物乳杆菌的饲粮;各组饲粮均不添加任何抗生素。基础饲粮为粉料,参考()配制,其组成及营养水平见表。试验期 。于试验第 天起,氨气应激组和氨气应激植物乳杆菌组分别在:和:通入高纯氨气,使氨气浓度达到()(氨气浓度的设定参考 等的研究),持续,对照组不通氨气。表 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)()项目 日龄 日龄 原料 玉米 豆粕 膨化大豆 玉米酒糟 米糠 玉米麸 大豆油 石粉 发酵豆粕 磷酸氢钙 食盐 预混料)合计 营养水平 )代谢能 ()粗蛋白质 赖氨酸 蛋氨酸半胱氨酸 钙 总磷
8、)预混料为每千克饲粮提供 :,泛酸 ,烟酸 ,生物素 ,氯化胆碱 ,载体为沸石 。)代谢能为计算值,其余为实测值。,饲养管理 本试验于浙江惠嘉生物科技股份有限公司试验基地开展。黄羽肉鸡饲养在气候舱中,气候舱可以自动控制舱内的温度、湿度、光照和通风量等 期马艳华等:植物乳杆菌对氨气应激肉鸡肌肉品质和抗氧化功能的影响因素,第 周气候舱内温度保持在 ,随后每周降低 ,温度降至 左右后保持不变;光照(白天自然光照,晚上白炽灯补光);相对湿度保持在;调节气候舱内换气扇的通风换气量,保证在下一次通入氨气时,氨气浓度处于 以上。试验期间鸡只自由采食和饮水。免疫接种及消毒、疾病预防按常规进行。样品采集 氨应激
9、试验进行 后,每组各选取生长状况相近的 只试验鸡(每个重复 只)空腹 后屠宰,采集左侧胸肌测定屠宰后 和 的肌肉品质,同时采集右侧胸肌样品保存于 冰箱中,用于测定肌肉成分,分析鸡肉抗氧化能力和相关基因表达。指标检测 肌肉品质的测定 分别在肉鸡屠宰后 和 ,用装载肌肉专用电极 计(,)测定胸肌的;用色差仪(,)测定胸肌的亮度()、黄度()和红度()值。切割并准确称取()重的肌肉样品,将各组样品标号,悬挂放置于 冰箱中,在放置 和 后各测 次样品的重量并记录,计算各样品 和 的滴水损失。切割并准确称取()重的肌肉样品,将各组样品标号,在 的蒸箱中放置 ,再次称重并记录,计算各样品的蒸煮损失。肌肉成
10、分的测定 样品预处理:将屠宰后采集的胸肌样品适当切碎,称重后置于洁净的已知重量的培养皿中,在 烘箱中烘干 后,取出回潮 ,称重并记录,粉碎后装于自封袋备用,后续测定参考饲料分析及饲料质量检测技术。水分和粗灰分含量的测定:取洁净坩埚烘干至恒重,于干燥器中冷却,称重,称取 左右的肉粉置于坩埚中,在 烘箱中烘干至恒重,于干燥器中冷却,称重,结合样品预处理水分含量结果计算胸肌实际水分含量。随后将坩埚放在电炉上炭化 至 无 烟,移 入 陶 瓷 纤 维 马 弗 炉(,广州越特科学仪器有限公司)中于 下灼烧 ,等待炉温降下后取出,于干燥冷却,称重,结合样品预处理水分含量结果计算胸肌粗灰分实际含量。粗蛋白质含
11、量的测定:称取 左右胸肌肉粉试样,在消化管中消化,冷却消煮液后用常量蒸馏法吸收氨气,用盐酸标准滴定溶液滴定,记录滴定体积,结合样品预处理水分含量结果计算胸肌粗蛋白质含量。粗脂肪含量的测定:称取胸肌肉粉试样 左右,放入滤纸中折成密封小包,放入 烘箱中烘干 ,在干燥器中冷却后称重。将滤纸包放入预干燥处理的索氏抽提管中,在干燥的抽提瓶中加入足量石油醚,浸泡过夜后,进行抽提,控制石油醚回流速度适当。取出试样在通风橱中晾干滤纸包,在 烘箱中烘干至恒重,于干燥器中冷却,称重并记录,结合样品预处理水分含量结果计算胸肌粗脂肪含量。有机物含量的测定:通过胸肌水分和粗灰分含量直接计算出胸肌有机物含量。抗氧化指标的
12、测定 取 左右胸肌肉试样放入 匀浆管,加入 倍体积预冷处理的生理盐水,再加入适量的 灭 菌 匀 浆 珠,经 匀 浆 仪 充 分 匀 浆 后,在 、离心机中离心 ,取上清液作为各组肉鸡的胸肌组织匀浆液,保存在 冰箱中。根据南京奥青生物技术有限公司二喹啉甲酸()蛋白浓度测定试剂盒说明书测定蛋白浓度。根据南京建成生物工程研究所提供的试剂盒进行抗氧化指标的测定:采用亚铁离子()还原法测定组织中总抗氧化能力(),采用酶促比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶()活性,采用钼酸铵法测定过氧化氢酶()活性,采用黄嘌呤氧化酶法测定总超氧化物歧化酶()活性,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛()含量。抗氧化相关基因表达的测定
13、根据 总 提取试剂及说明书,从肉鸡胸肌中提取总。使用 分光光度仪测定总 的浓度。将 反转录为 并将其储存在 冰箱中,为随后实时荧光定量()做准备。使用 试剂盒进行 扩增反应。培养程序如下:预变性 后进入循环;变性 ;退火 ;延长 ,共 次循环;熔解曲线分析,(温度变化率 ),(温度变化率 ),(温度变化率动 物 营 养 学 报 卷 ),收集方法为连续收集,每 次。使用参照基因 肌动蛋白(,:;:)运行和归一化样品。最终,记录循环时 间,并通过法计算肉鸡胸肌抗氧化相关基因核因子 相关因子()、样环氧氯丙烷相关蛋白()、血红素加氧酶()、超氧化物歧化酶()、超氧化物歧化酶()和 相对表达量,目的基
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