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猪源罗伊氏乳杆菌LR1对断奶后42 d仔猪生长性能和肠道上皮屏障功能的影响.pdf
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1、动物营养学报,():猪源罗伊氏乳杆菌 对断奶后 仔猪生长性能和肠道上皮屏障功能的影响刘春艳,孙焱杰 王 倩 熊云霞 吴绮雯 杨雪芬 王 丽蒋宗勇 易宏波 黄艳娜(广西大学动物科学技术学院,南宁;广东省农业科学院动物科学研究所,畜禽育种国家重点实验室,农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室,岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心,广东省畜禽育种与营养研究重点实验室,广州)摘 要:本试验旨在研究猪源罗伊氏乳杆菌 对断奶后 仔猪生长性能及肠道上皮屏障功能的影响。选取 日龄体重接近的杜长大杂交断奶仔猪 头,随机分为 组,分别饲喂基础饲粮(对照组,组)、基础饲粮中添加 金霉素和 喹乙醇(抗生素组,
2、组)、基础饲粮中添加 猪源罗伊氏乳杆菌(罗伊氏乳杆菌组,组),每组 个重复,每个重复 头仔猪,公母各占。试验期 。结果表明:)与 组相比,组的平均日增重显著增加()。)与 组相比,组十二指肠、空肠以及回肠的绒毛高度显著增加(),十二指肠和回肠的绒隐比显著提高()。)与 组相比,组结肠闭锁小带蛋白()与闭合蛋白()的基因相对表达量显著增加()。)与 组相比,组空肠黏液素()的基因相对表达量显著增加(),且结肠黏液素()和 的基因相对表达量显著增加()。)与 组相比,组回肠猪 防御素()的基因相对表达量显著增加(),结肠 防御素()、的基因相对表达量显著增加()。)与 组相比,组结肠 样受体()的
3、基因相对表达量显著增加()。综上可知,在饲粮中添加猪源性罗伊氏乳杆菌 可以提高仔猪在断奶后 的生长性能,并通过改善小肠绒毛形态,增加仔猪结肠肠道紧密连接蛋白、黏液素、抗菌肽及 样受体基因的表达,从而改善断奶仔猪肠道上皮屏障功能。关键词:断奶仔猪;罗伊氏乳杆菌;生长性能;肠道形态;肠道上皮屏障中图分类号:文献标识码:文章编号:()收稿日期:基金项目:国家自然科学基金();国家生猪产业技术体系();广州市科技计划项目();茂名实验室自主科研项目();茂名实验室科研启动项目();科技创新战略专项资金(高水平农科院建设)(,)作者简介:刘春艳(),女,湖南郴州人,硕士研究生,动物营养与饲料科学专业。:
4、通信作者:易宏波,副研究员,硕士生导师,:;黄艳娜,副教授,硕士生导师,:仔猪断奶应激易造成肠道上皮屏障功能损伤,易引发严重腹泻。在过去的几十年,抗生素和氧化锌是预防治疗仔猪断奶应激的有效添加剂,但过度使用会造成一定的耐药性已经对环境产生副作用,因此我国目前已对饲料添加剂采取禁抗、限锌的措施,生猪养殖从业者面临巨大困扰。罗伊氏乳杆菌(,)是一种天然定植在哺乳动物和鸟类肠道的益生菌,在维持动动 物 营 养 学 报 卷物健康和免疫调节等方面有着重要意义,已被证明可以调节先天免疫反应和肠道屏障功能。先前对小鼠的研究表明,可通过上调紧密连接蛋白(,)的表达来改善肠道屏障功能,此外,也可通过脂多糖刺激猪
5、小肠上皮细胞和新生仔猪分泌 来增强新生猪的肠道屏障功能。同时,等研究发现,喂养健康新生小鼠 可调节免疫反应,同时调节肠道微生物群并促进有益代谢物的产生。此前,本课题组从健康断奶仔猪的粪便中分离出新型猪源,并发现 可以提高断奶后 仔猪生长性能并改善肠上皮屏障功能以缓解仔猪的腹泻。同时,我们利用猪小肠上皮细胞研究 如何影响产肠毒素大肠杆菌 诱导的肠道损伤,结果显示 可以通过抑制肌球蛋白轻链激酶信号通路来抑制产肠毒素大肠杆菌 诱导的炎症反应。然而,很少关注 对断奶后 仔猪肠道上皮屏障功能的影响,因此,本试验旨在研究 对断奶后 仔猪的生长性能、肠道形态以及肠道上皮屏障功能等方面的影响,以期为 在仔猪生
6、产中的应用提供理论依据。材料与方法 试验方法 选取 头 日龄杜长大杂交断奶仔猪,随机分为 组,每组 个重复,每个重复 头仔猪,公母各占,每栏之间的体重接近()。对照组(组)饲 喂 基 础 饲 粮,其 参 照()营养需要配制成粉状配合饲料,表 为基础饲粮组成及营养水平。试验组分为抗生素组(组)和 组,分 别 在 基 础 饲 粮 中 添 加 金霉素和 喹乙醇、猪源(,根据 等的报道确定添加量)。益生菌制剂经喷雾干燥制成冻干粉,饲喂前经逐级稀释与粉状饲料混合均匀。试验期。仔猪自由采食,充足饮水,所有猪只均按正常免疫程序进行免疫接种。表 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)()项目含量 原料 玉米 膨化
7、玉米 发酵豆粕 去皮大豆粕 膨化大豆 鱼粉 乳清粉 大豆皮 大豆油 浓缩乳清蛋白 白砂糖 氯化胆碱 食盐 磷酸氢钙 石粉 赖氨酸盐酸盐 蛋氨酸 苏氨酸 色氨酸 预混料)期刘春艳等:猪源罗伊氏乳杆菌 对断奶后 仔猪生长性能和肠道上皮屏障功能的影响续表 项目含量 合计 营养水平 )消化能 ()粗蛋白质 钙 总磷 标准全消化道可消化磷 标准回肠可消化赖氨酸 标准回肠可消化蛋氨酸标准回肠可消化半胱氨酸 标准回肠可消化苏氨酸 标准回肠可消化色氨酸 )预混料中含多维 、多矿 ,其具体组成见参考文献。,。)粗蛋白质、钙、总磷为实测值,其余为计算值。,检测指标与方法 生长性能 在试验第 天和第 天时以栏为单位
8、称量各猪只的体重并记录耗料量,在称重前 对仔猪采取禁食措施。计算每组的平均日增重()、平均日采食量(),并根据 和 计算料重比()。肠道形态 试验第 天,从每栏随机挑选 头仔猪进行屠宰,环切约 的十二指肠(近端)、空肠(中段)、回肠(远端),用注射器吸取磷酸盐缓冲液()轻轻冲洗后分别置于 多聚甲醛样品瓶中固定保存,后续进行肠道形态学检测:经过冲水、脱水、透明、石蜡包埋等处理后,苏木精伊红()染色切片观察,每张切片测量 个完整的肠道绒毛及其伴生的隐窝,最后计算绒毛高度与隐窝深度的比值()。肠黏膜基因表达 用实时荧光定量 的方法测定肠道屏障功能相关基因相对表达量,方法如下:利用 (,美国)提取肠黏
9、膜中的总,接着反转录合成。后续 扩增反应体系为 :,上、下 游 引 物 各,模板 ,超纯水 。试验所需引物均由 软件设计,引物合成由上海生工生物工程有限公司完成,引物序列信息见表。内参基因为 肌动蛋白(),目的基因相对表达量用 法计算。表 引物序列信息 基因引物序列 ()产物长度 登录号 闭锁小带蛋白:闭合蛋白:黏液素:动 物 营 养 学 报 卷续表 基因引物序列 ()产物长度 登录号 黏液素:猪 防御素:猪 防御素:抗菌肽:样受体:样受体:肌动蛋白:数据统计分析 数据采用 统计软件进行单因素方差分析(),氏法进行多重比较。结果用平均值均值标准误()表示,软件作图,表示差异显著。结果与分析 猪
10、源罗伊氏乳杆菌对断奶后 仔猪生长性能的影响由表 可知,组相比于 组平均日采食量有增加的趋势,但无显著差异(),平均日增重显著提高了()。组平均日采食量较 组显著增加了(),平均日增重显著增加了()。与 组相比,组和 组的腹泻率均有下降的趋势,但差异不显著()。猪源罗伊氏乳杆菌对断奶后 仔猪肠道形态的影响 由表 可知,与 组和 组相比,组仔猪空肠和回肠的绒毛高度以及回肠的绒毛高度 隐窝深度显著提高()。此外,相比于 组,组十二指肠的绒毛高度与绒毛高度隐窝深度也显著上升()。十二指肠、空肠及回肠的 染色切片如图 所示,所有试验组猪小肠黏膜结构与形态完整。表 猪源罗伊氏乳杆菌对断奶后 仔猪生长性能的
11、影响 项目组别 值初始体重 终末体重 平均日采食量 ()平均日增重 ()料重比 腹泻率 同行数据肩标不同字母表示差异显著()。下表同。,()期刘春艳等:猪源罗伊氏乳杆菌 对断奶后 仔猪生长性能和肠道上皮屏障功能的影响表 猪源罗伊氏乳杆菌对断奶后 仔猪肠道形态的影响 项目组别 值十二指肠 绒毛高度 隐窝深度 绒毛高度 隐窝深度 空肠 绒毛高度 隐窝深度 绒毛高度 隐窝深度 回肠 绒毛高度 隐窝深度 绒毛高度 隐窝深度 图 断奶仔猪肠道 染色切片图 猪源罗伊氏乳杆菌对断奶后 仔猪肠道上皮屏障功能的影响 猪源罗伊氏乳杆菌对断奶后 仔猪肠道紧密连接蛋白基因表达的影响 如图 所示,组与 组相比,空肠闭锁
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