非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网膜病变.pdf

!实验研究!非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网膜病变李才锐(!+!姜德咏+!孙曙光(!洪!卫(基金项目!中国云南省科技厅资助课题!#$UE(*%&#中国湖南省科技厅资助课题!#$&=h%&%#作者单位$(!Z(&#中国云南省大理市大理学院附属医院眼科+!(&(#中国湖南省长沙市中南大学湘雅二医院眼科作者简介$李才锐男博士副主任医师眼科主任院长助理研究方向$玻璃体视网膜病%通讯作者$李才锐$;7 V 5 9 9 2-#9 1.:;$7#1收稿日期$+&8(&8(+!修回日期$+&8(8()%3&0+%/-2 3 -.),%-:0)6.).;)/#+%/-#1 28.(,Y (V(+G ,*%#+/(.#+W 4 ,$.#+W#(X(-%#+(1%#5.6(%#(6 7:$Q 4/./K#G:/7:.;=7:5/7 5./6 f 5 7-/#;#0 E 5 A.9 1 5/9?-:/.!#$UE(*%&#R 4/./K#G:/7:.;=7:5/7 5./6f 5 7-/#;#0 E 5 A.9 1 5/9?-:/.!#$&=h%&%#(5 A.9 1 5/9#3X A-9-.;1#;#0 E 9-5B 3 3:;:.9 5 6 R#C A:9.;#3.;:?#;5 0 5 .;:Z(&Q 4/./K#G:/7 5?-:/.+5 A.9 1 5/9#3X A-9-.;1#;#0 E 9-5=5 7#/6 H:./0 E.R#C A:9.;#3?5/9 .;=#49-F/:G 5 C:9 E?-./0 C-.(&(R 4/./K#G:/7 5?-:/.8%9 9 :;%#5#6%$?.:8 M 4:b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b:?M S:./0 Q =4/=N R#/0g$.;E6:.V5 9:7 5 9:/#A.9-E#3/#/8#V5 C 56:.V5 9 5 C1:7 5$W/9SX A-9-.;1#;!N 4#Y:Q./U5L.,-:#+&!Z#$()*(8()*摘要目的!研究早期糖尿病视网膜病变的小鼠模型%方法!X 小鼠随机分为正常对照组!(+U 组&m#和糖尿病组!(+U 组&m(+#每组取 U 和(+U 处死小鼠光镜和电镜观察视网膜结构的改变%结果!糖尿病组 U 时毛细血管基底膜增厚可见内皮细胞*周细胞和神经节细胞超微结构改变%(+U 时基底膜明显增厚内皮细胞*周细胞和神经节细胞凋亡增加%结论!在糖尿病早期发生了视网膜神经元细胞超微结构病变和微血管病变%关键词!X 小鼠#型糖尿病 糖尿病视网膜病变李才锐姜德咏孙曙光洪卫$非肥胖性糖尿病小鼠的早期视网膜病变$国际眼科杂志+&!Z#$()*(8()*!引言糖尿病视网膜病变!6:.V5 9:7 5 9:/#A.9-E M#是糖尿病常见的并发症%但糖尿病视网膜病变的发病机制尚未完全阐明其预防及治疗仍不完善尤其对于疾病的早期诊断*预防及治疗尚不完善%因此糖尿病视网膜病变的早期病变研究已成为目前的研究重点(+)%非肥胖性糖尿病!/#/8#V5 C 56:.V5 9 5 C X#小鼠是指一种遗传性#型糖尿病的啮齿类动物模型该病的发病机制受遗传和环境因素的双重影响(%)%本动物模型与人类#型糖尿病相似()%目前 X 小鼠视网膜病变的专门性研究尚未见报告%我们利用 X 糖尿病鼠观察视网膜的早期病变情况%$材料和方法$材料!X b 9 小鼠%&只鼠龄 U体质量(Z0 购自美国 S.7 UC#/实验室%在无特定病原体!C A5 7:3:7 8 A.9-#80 5/3#环境下繁殖饲养!恒温+a湿度)k#自由饮净化水和全价营养颗粒喂养%每周用电子天平测小鼠体质量和进食量(次%X/5 8 f#47-!快速血糖仪*血糖试纸!美国强生公司#尿糖试纸!苏州制药厂#=8 Z&=电子天平!长沙湘平科技发展有限公司#透射电子显微镜!日立 R 8 Z&#%饲养 X 小鼠的营养配方饲料常规高压灭菌%$%方法!鼠龄(&U 开始每周检测尿糖+次发现尿糖强阳性后用血糖仪测血糖连续+次血糖#(Z$1 1#;b诊断为糖尿病%已发生糖尿病的 X 雌鼠作为试验组!&m(+#随机分为糖尿病第 U 及(+U+组每组 Z只%未发病的同龄 X 雌鼠作为对照组!&m#根据时间(+U 分+组%取对照组和糖尿病组小鼠于糖尿病第 U 和(+U 摘除眼球法处死小鼠&0 b多聚甲$O#$=#6 9#.6(%#./%9#.%?;4 6 4.7%+A B%C D E%C F G$IHK,LHHMNODHPQ 7.($=/C HIIIROFSC%7P T T T C=/C#%$视网膜神经节细胞电镜改变!正常 X 小鼠的视网膜神经节细胞正常!图+B#%糖尿病 U 时 X 小鼠视网膜神经节细胞肿胀细胞核内染色质高度盘绕出现空泡结构认为是凋亡的(期!图+P#%糖尿病(+U 时 X 小鼠视网膜神经节细胞缩小核膜皱缩*增厚核染色质分布紊乱%线粒体嵴丢失而且结构不清*内质网扩张胞质空泡化认为是凋亡的+.期!图+?#%讨论W 型糖尿病是一种与遗传有关的自身免疫性疾病人类 W 型糖尿病和动物!X 小鼠*P P大鼠()*N h大鼠(Z)#W型糖尿病有许多相似之处都是由于自身免疫反应引起 f细胞介导的胰岛%细胞进行性损伤和死亡导致胰岛素缺乏出现多尿*糖尿*酮尿和体质量迅速下降等症状()%其发病过程*生理学*遗传学及生物学特性和人类极其相似在糖尿病发生之前也经过胰岛素抵抗*糖代谢异常*高胰岛素血症等阶段同时其子代中发现糖耐量异常等症状%我们利用 X 小鼠观察糖尿病视网膜病变情况%非肥胖性糖尿病小鼠模型!X 小鼠#可自发产生 W 型糖尿病表现多尿*糖尿*酮尿和体质量迅速下降若无外源性胰岛素治疗一般发病后数月死亡%研究发现(%)X 小鼠糖尿病的发病率是逐渐增加的一般雌鼠在鼠龄+(&6发病率为 Z&k _*&k雄鼠为(&k _+&k发病的主要时期是&_+&6%我们发现 X 雌鼠在(+U 龄时开始发生糖尿病发病率为)k左右(Z U 龄发病率为)%k%&U 龄发病率为+k!()&#平均发病时间为(%$+e%$+6%未发生糖尿病的 X 雌鼠可存活($).左右发生糖尿病后的小鼠因为血糖迅速增高可达+)1 1#;b 体质量下降而于%1#左右死亡%我们培育的 X 小鼠在发病率及发病时间等和其他研究相似%研究认为糖尿病视网膜微血管病变包括毛细血管基底膜增厚*微血管瘤*周细胞丢失和非细胞性毛细血管形成等%毛细血管基底膜增厚一直被认为是糖尿病视网膜病变中微血管的主要损害也是超微结构变化的标志%正常的血管基底膜可抑制视网膜新生血管形成基底膜增厚就减弱了其抑制作用()%基底膜增厚还可使周细胞突起与内皮细胞发生脱离%基底膜增厚和周细胞丢失都发生在糖尿病视网膜病变早期这说明基底膜增厚可能与周细胞的丢失有关%尽管目前已知基底膜增厚与血糖持久地增高有关()但其发生机制未完全阐明基底膜增厚的原因可能与多元醇通路活性增强(*)*非酶糖化作用增强(&)*糖基化的胶原及基底膜降解的酶的活性降低()有关%我们发现正常小鼠视网膜毛细血管基底膜未见异常%U 糖尿病小鼠视网膜毛细血管基底膜增厚伴血管周围组织水肿%(+U 糖尿病小鼠视网膜毛细血管基底膜增厚明显并呈局灶结节样和迭片状增厚部分区域劈裂成数层说明早期糖尿病 X 小鼠视网膜毛细血管出现了微血管病变%其他研究也支持我们的结论(+c()%我们在 X 小鼠糖尿病 U 时就已经开始发现内皮细胞和周细胞超微结构的改变内皮细胞及周细胞核染色质分布不均匀糖尿病(+U 内皮细胞及周细胞核膜凹陷皱缩染色质凝聚靠边说明内皮细胞和周细胞发生了凋亡%研究证明视网膜周细胞凋亡是糖尿病视网膜病变早期细胞死亡的特殊形式*周细胞丧失是糖尿病视网膜病变早期的一个重要机制 周细胞丢失的本质是细胞凋亡(+c()%=f L糖尿病大鼠在 Z1#内确实存在内皮细胞凋亡%在高糖作用下培养的人血管内皮细胞凋亡率升高%b#$(+U图%)/;(糖尿病小鼠节细胞T+P6 N!#B$正常P$U?$(+U我们还发现 X 小鼠糖尿病 U 时视网膜神经节细胞内质网扩张*核染色质分布紊乱糖尿病(+U 时神经节细胞体积缩小*线粒体嵴丢失*核染色质边集%神经节细胞位于视网膜的最内层是视网膜耗氧量最大的细胞对缺氧缺血最为敏感因此在糖尿病视网膜病变的早期神经节细胞超微结构即发生改变%线粒体损伤会造成细胞氧化磷酸化失调细胞生成 B f K下降*损害细胞功能甚至导致细胞死亡%而且损伤的线粒体释放出的细胞色素 7和B A.3 是细胞凋亡路径的主要物质因此线粒体的病理改变可能激发凋亡路径而导致细胞死亡(Z)%我们认为在糖尿病早期视网膜发生了神经元病变%h./.1#和 T N 1 M B增加%我们也发现 X 小鼠在糖尿病早期视网膜 T N 表达增加(+&)在糖尿病视网膜病变的早期超微结构改变的神经节细胞其分泌功能也发生改变%我们认为在糖尿病的临床前期即发生了视网膜的微血管病变和神经元病变但糖尿病视网膜微血管病变和神经元病变之间的关系及其分子机制尚不清楚需要我们进一步研究也提示我们在临床上应重视糖尿病的早期发现及早期治疗%参考文献(李媛卢艳$糖尿病视网膜病变早期发病机制研究进展$国际眼科杂志+&)!#$)&8)+张小玲邱曙东陈艳炯孙文涛$糖尿病性视网膜病变发病机制研究进展$国际眼科杂志+&)!Z#$(+%*8(+(%D.U:/#=h 4/:1#9#Q D 4.#U.Q D:,4C-:1.Q h.9.0:h f#7-:/#Q$P 5 5 6:/0#3./#/8#V5 C 5 C 9 .:/#3 1:7 5$J A B/:1.;C(*&+*!(#$(8(%D./C 3:5;6 h S g:;C#/$5 C 4VC 9 .:/#3 9-5/#/8#V5 C 56:.V5 9:71#4C 5-:7-65 G 5;#AC 7.9.7 9 C!X P.b#A(*#$P S X A-9-.;1#;(*%!Z#$)*8 Z)=-:V.f W/#0 47-:f =A#9 C 1./S M$?#5;.9:#/#3 6:.7 E;0;E 7 5#;5 G 5;./6 A#9 5:/U:/.C 5?.7 9:G:9 E:/.9 5 9:/.9#5 9:/.;7:7 4;.9:#/$B 1S K-E C:#;/6#7 :/#;D 5 9.V(*%+Z)!)K 9(#$%8*%Z D:E.1#9#h X 0 4.Q :C-:.U:R$BC A#/9./5#4C 1#65;#3/#/8:/C 4;:/865 A5/65/9 6:.V5 9 5 C$W/G 5 C 9 X A-9-.;1#;T:C=7:(*Z%!)#$*8*&)M.V:/#G:9 7-B =UE;5 S=$K$f-5A#;E#;A.9-.E:/69:/.;1:87#./0:#A.9-E$40 C(*Z%+!=4AA(+#$(*8+%*h:/#C-:9.S R$B;6#C 5 5 647 9.C 5:/9-56:.V5 9:75 E 5$H b W W W 6.6 S.7 UC#/1 5 1#:.;5 7 9 4 5$B 1S X A-9-.;1#;(*Z(&+!Z#$Z)8 Z*+(&f C:;:V.E?-.#/:C B=M 5 0 5 b B g#-;-45 9 5 4/%9#.%?;4 6 4.7%+A B%C D E%C F G$IHK,LHHMNODHPQ 7.($=/C HIIIROFSC%7P T T T C=/C#/#4C?W 6#1.:/9#9 E A5W T7#;.;0 5/$S?5;P:#;(*+Z%!*#$%&+8%&(=9 5:/V5 0 D B/6 5 S K 5 E#4J S$W/:V:9:#/#3 9-5.0;E 7#C:6.C 5 C A5 7:3:7 3#7#;.0 5/6:C.7 7-.:654/:9 C:/6:.V5 9:7.9 U:6/5 EVE:/G:G#0;47#C 5;5 G 5;C$A#C C:V;5 7#/9 :V49:#/9#P D9-:7 U5/:/0$:.V5 9#;#0:.(*%+!*#$+Z8+*(+P 5 U#:9,P B h#;4 ./U M h 5 /f=R#-1./f?K .U.C-D$=4V/#1.;5 9:/.;#J E 0 5/.9:#/5 C A#/C 5 A 5 7 5 65 C 6:.V5 9:7 8;:U5 5 9:/#A.9-E$W/G 5 C 9 X A-9-.;1#;T:C=7:(*&!*#$+(&8+(&)(%M#V:C#/gNS h.6#h:/#C-:9.S R$M 5 9:/.;7.A:;.:5 C$P.C 5 1 5/91 5 1 V./59-:7 U5/:/0:/6:.V5 9:7.9 C VE.;6#C 5 5 647 9.C 5:/-:V:9#?-.U.V.9:=N.7:.8=.;/C M P.C 4 K h$f-5 P P 8 .9$B/.489-5/9:71#65;#3-41./6:.V5 9:7 5 9:/#A.9-E$?4 E 5M 5 C(*)!(&#$(&8(&*+()孙曙光李才锐周智广姜德咏$早期非肥胖性糖尿病小鼠视网膜细胞凋亡$国际眼科杂志+&!(#$)+8)(Z h 4 4U4C-:1.h X 7-:.:h$?5;4;.5 G 5/9 C:/G#;G 5 6:/V49 E :7.7:68:/647 5 6 f7 5;.A#A9#C:C$S W 1 1 4/#;+&%(!#$%)Z8%)(h./.1#:B .U.1 4.D D 4U4/#R D.5 6.R 5 0:B$:.V5 9 5 C-.C./.66:9:G 5 5 3 3 5 7 9#/5 4.;.A#A9#C:C:/.9 5 9:/.:9-7-#/:7.;E 5;5 G.9 5 6:/89 .#7 4;.A 5 C C 4 5$?4 E 5 M 5 C+&+!(#$8)(:/0 H P.#E 4 O Q 4,-5/b =-4;:=M 5 5 6 b:O O$5 4#8#A9:7 7 5;.A#A9#C:C./6 1:7#./0:#A.9-E:/h h B Q1#4C 5 5 9:/.$W/9 S D#;D 5 6+&(%!(#$8*+(*R.1 1 5 C R K b:/S R P 5 9,5;M N P#/;5 5D P 5:5 N$F A 5 0 4;.89:#/#3 9-5G.C 7 4;.5/6#9-5;:.;0#9-3.7 9#G.C 7 4;.5/6#9-5;:.;0#9-3.7 9#5 7 5 A9#C E C 9 5 1:/5 J A5 :1 5/9.;V.7 U0#4/6 6:.V5 9:7 5 9:/#A.9-E#39-5表达及意义$眼科研究+&(!)#$%Z8%!短篇报道!复方樟柳碱#号治疗眼肌麻痹1 O例临床分析杨!戈(!李!静+!安!洁(作者单位$(!(&)#中国陕西省西安市解放军四五一医院眼科+!(&Z)#中国陕西省西安市陕西省博爱医院眼科作者简介$杨戈女副主任医师%收稿日期$+&8&Z8(!修回日期$+&8(8+杨戈李静安洁$复方樟柳碱!号治疗眼肌麻痹*例临床分析$国际眼科杂志+&!Z#$()*!引言后天性眼肌麻痹由外伤*感染*炎症*血循环障碍*肿瘤及退行性变等引起多为神经源性%目前多采用皮质激素P族维生素及扩血管药物治疗疗效欠佳%+&)+&Z年我们用复方樟柳碱!号在解放军四五一医院及陕西省博爱医院治疗眼肌麻痹患者*例*眼取得满意疗效报告如下%$临床资料眼肌麻痹患者*例*眼男%Z 例女(%例年龄()_Z&!平均%#岁%眼部钝挫伤所致眼肌麻痹(例伴视神经挫伤 Z 例伴上睑下垂 例伴瞳孔括约肌麻痹%例%原因不明者%)例%排除眶内肿瘤*颅内占位性病变及脑梗塞存在的可能%*例患者中(条直肌麻痹+例(条斜肌麻痹+)例%在发病(&6 以内就诊者(例(&6 _(1#者+Z 例(1#以上者)例%后天性急性发作眼肌麻痹的突出和典型症状为复视%复视患者常感觉头晕*目眩*头痛*恶心和精神紊乱症状或同时存在视力下降%用复方樟柳碱!号注射液+1 b患侧颞浅动脉旁皮下注射(次 6(&6 为(个疗程可连续注射 个疗程逐渐停药痊愈者可能随时终止治疗%普鲁卡因过敏者禁用%疗效评价$痊愈$复视消失上睑活动度恢复正常瞳孔对光反射基本正常视力提高眼球各方向活动正常眼位正常%好转$复视减轻视力有提高眼球各方向活动正常眼位正常%无效$症状无明显改善%本组*例中治愈(例!k#好转 例!(k#无效(例!+k#总有效率*k%一般注射%次后开始好转视力上升复视减轻%疗程最短者 6最长连续注射 个疗程%病程越短者用药时间越短效果越明显%讨论复方樟柳碱!号注射液由解放军总医院研制含&q)0 b樟柳碱($)1 b 维生素 P(+(&0+&0 b普鲁卡因&$%1 b%樟柳碱()是由中国医学科学院药物研究所从茄科植物唐左特山莨菪中分离出的一各生物碱其氢溴酸盐为白色结晶易溶于水不溶于氯仿*乙醚有缓解平滑肌痉挛*散瞳*抑制唾液分泌等抗胆碱作用能调节和维持血管张力增强推动血液的力量其中枢作用较强毒性比东莨菪*阿托品*山莨菪小得多小剂量应用时对调整高级神经系统活动有良好作用%复方樟柳碱在眼科临床的应用已有报道(+8 Z)但对后天性眼肌麻痹的临床治疗较少报道%樟柳碱的作用可能是通过中枢调整血管舒缩功能缓解血管痉挛改善眼的循环改善支配眼肌的神经供血促进神经细胞生长使眼肌功能得以恢复%复方樟柳碱中含有维生素 P(+它对保护神经髓鞘的正常代射防止神经脱髓鞘及退行性变有一定作用%颞浅动脉通过脑膜中动脉与眶内动脉相连采用颞浅动脉旁皮下注射比一般肌肉注射用量小效果明显而且此部位易为患者接受治疗时机应越早越好%当眼部挫伤出现复视或不明原因的复视!排除眶内肿瘤颅内占位病变及脑梗塞外#应尽早应用复方樟柳碱治疗%本组眼肌麻痹患者应用复方樟柳碱!号注射治疗疗程短效果明显无并发症具有安全有效方便可靠的优点%参考文献(中国医学科学院药物研究所药理室神经组$樟柳碱的药理作用与东莨菪碱等的作用比较$中华医学杂志(*)!(#$*)+张怀宝刘杰为$复方樟柳碱对挫伤性视神经病变的治疗效应$眼外伤职业眼病杂志(*(*!(#$+(%宋琛李星星王纪$复方樟柳碱治疗快中子辐射性视网膜损伤$实用眼科杂志(*+(&!*#$)%&宋琛申维勇何庆华$复方樟柳碱(号治疗烧伤皮肤瘢痕的实验研究$中华眼科杂志(*Z%+!%#$(Z)罗兴中刘尚铨$复方樟柳碱治疗眼睑及面肌痉挛的临床研究$国际眼科杂志+&ZZ!Z#$(8(*Z 李博$复方樟柳碱治疗外伤性麻痹性斜视的临床观察$国际眼科杂志+&ZZ!#$*Z)1O#$国际眼科杂志!#$年%月第$卷!第&期电话!#()*+%$!电子信箱!,-./#0%&1/2 3 4