血液常规检验标准操作规程.docx

昆仑泌尿外科医院检验科
临检室作业指导书

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血液常规检验标准操作规程

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血液常规检验标准操作规程
1.目的:
检测分析血液中红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白等的数量和质量，对感染、炎症、血液系统疾病等进行辅助诊断、监测治疗效果等。
2.检测项目:
迈瑞BC-2600全自动血球仪上测定血常规19项。包括：白细胞计数(WBC)、中性粒细胞数(Neut#)、淋巴细胞数(Lymph#)、中间细胞计数（MID#）、中性粒细胞比率(Neut%)、淋巴细胞比率(Lymph%)、中间细胞比率（MID %)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、红细胞压积(Hct)、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度变异系数（RDW-CV）、红细胞体积分布宽度标准差（RDW-SD）、血小板计数(PLT)、平均血小板体积（MPV）、血小板体积分布宽度（PDW）、血小板压积（PCT）。
3.原理：
3.1 血细胞(WBC.RBC.PLT)数量和体积检测原理：电阻抗法。
3.2白细胞分类原理：电阻抗法。白细胞脉冲的大小是由被计数细胞在溶血素中大小决定的。
3.3 血红蛋白测定：采用氰化高铁血红蛋白(HICV)比色法。
3.4 RDW、MCH、MCV、MCHC、MPV、PCT、PDW为换算项目。
3.5 HCT测定原理：血细胞产生的脉冲信号的峰值与RBC容积成正比。
4.仪器：
厂商名：深圳迈瑞公司。型号：BC-2600。
5.试剂：
厂商名：深圳迈瑞公司。
5.1清洗液：注册号：粤深药临械（准）字2013第1400051。规格：5.5L
5.2溶血素：注册号：粤深药临械（准）字2013第1400021。规格：500ML。
5.3稀释液：注册号：粤深药临械（准）字2013第1400071。规格：20L。
5.4其它：迈瑞配套试剂：E-Z酶清洁剂，控头清洁剂等
6.标本的采集与运送
6.1 标本类型：静脉血或手指末梢血。
6.2 标本要求：标本用EDTA-K2 抗凝；
静脉血标本量应达到2ml；末梢血20µl。
6.3 标本运送：室温运送，4小时内完成检测。
6.4 标本拒收标准：严重溶血、凝固、血量少、无条码、无标识的血液标本不能进行检测。
7.操作步骤：
7.1 采集病人静脉血lml,加入含有EDTA-K2的真空管中，立即颠倒混匀8次。
7.2 将质控品从冰箱取出，在室温条件下放置15分钟，充分混匀后，与样本一同测定。
7.3 开机：将仪器POWER开关置于ON。仪器自动进行清洗并进行空白计数，当空白计数值在允许范围内时可检测标本。
7.4 检查各种试剂量是否正常。
7.5 充分混匀的血液置于吸样针下，按下进样开关，仪器自动进行检测。
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7.6 观察仪器测定结果及直方图，必要时应手工计数及白细胞分类。
7.7 审核结果，打印报告。
8．血细胞的显微镜检查(用于对仪器法结果可疑时的复核)
8.1 镜检标准
8.1.1 医生明确要求涂片镜检；
8.1.2 仪器提示有原始或幼稚细胞、变异淋巴细胞、有核红细胞等异常需镜检；
8.1.3 新生儿标本需涂片镜检；
8.1.4 WBC≥20×10^9/L或≤2.0×10^9/L；
8.1.5淋巴细胞≥45%，需做涂片镜检，1-4岁儿童且血细胞计数及他结果正常者除外；
8.1.6 单核细胞≥15%；
8.1.7 嗜酸性粒细胞≥10%；
8.1.8 嗜碱性粒细胞≥3%
8.1.9 PLT＞500×10^9/L或＜60×10^9/L；
8.2.0 提示有PLT聚集，需涂片镜检；
8.2 镜检步骤
8.2.1 血涂片的制备
8.2.1.1 在距载玻片一端1cm的位置滴加约5µl的抗凝血；末梢血直接用干净玻片蘸取。
8.2.1.2 用推片使血液沿其边缘展开，与载玻片30～40度角进行推片。
8.2.1.3 涂片完成后在空气中自燃晾干。
8.2.2 血涂片的染色
8.2.2.1 染色试剂：瑞氏染色液。
8.2.2.2 染色步骤
a. 用蜡笔在血膜两头画线，然后将血涂片平放在染色架上。
b.加瑞氏染液数滴，以覆盖整个血膜为宜，染色约1分钟。
c.滴加约等量的缓冲液与染液混合，室温下染色5-10分钟。
d. 用流水冲去染液，待干燥后镜检。
8.2.2.3 镜检观察要求
a. 将湿片在高倍镜下观察涂片、染色是否良好，否则重新涂片染色。
b. 选择涂片体尾交界、细胞分布均匀不重叠部分进行镜检。
c. 在高倍镜下辨认细胞不清楚时，必须待玻片干后用油镜观察。
8.2.2.4 镜检观察的处理
a. 根据仪器报警提示的内容，确认镜下观察结果是否与仪器提示一致。
b. 发现原始及幼稚白细胞，则必须进行手工分类；如不能确定细胞种类，则报告异常细胞的比例。
c. 如果镜下发现有核红细胞，则必须对白细胞进行校正。
d. 如果镜下观察有血小板聚集，则必须手工冲池计数血小板；如果是EDTA﹒K2引起的血小板聚集，可用109mmol/L枸橼酸钠抗凝剂采集标本，结果需要进行换算。
e. 多发性骨髓瘤、冷球蛋白血症引起的红细胞聚集，可将血液用仪器稀释液稀释3倍，然后37℃水浴箱中10分钟后，立即上机检测，结果需要进行换算。
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9．参考区间
中国成年人群血细胞分析参考区间（静脉血标本仪器法）
测定项目 男          女            
WBC（×10^9/L） 3.5～9.5 3.5～9.5
Neut（×10^9/L） 1.8～6.3 1.8～6.3
Lymph（×10^9/L） 1.1～3.2 1.1～3.2
Neut% 40～75 40～75
Lymph% 20～50 20～50
RBC（×10^12/L） 4.3～5.8 3.8～5.1        
Hb（g/L） 130～175 115～150
HCT（%） 0.40～0.50 0.35～0.45
MCV（fl） 82～100 82～100
MCH（pg） 27～34 27～34
MCHC（g/L） 316～354 316-354
PLT（×10^9/L） 125～350 125～350
10．危急值
测定项目 ≤ ≥
WBC（×10^9/L） 1.0 40
Hb（g/L） 50 180
PLT（×10^9/L） 20 600
11．临床意义
11.1 白细胞计数：
11.1.1 生理性变化：白细胞计数结果有明显的生理性波动，如早晨较低，傍晚较高；餐后较餐前高；剧烈运动、情绪激动时较安静时偏高；月经期、妊娠、分娩、哺乳期亦可增高；新生儿及婴儿期明显高于成人。
11.1.2 病理性增多，常见于：
11.1.2.1 急生化脓性感染，尤其是革兰阳性球菌感染（脓肿、脑膜炎、肺炎、扁桃体炎、阑尾炎）
11.1.2.2 某些病毒性感染：传染性单核细胞增多症、流行性乙型脑炎等。
11.1.2.3 组织损伤：严重外伤、大手术、大面积烧伤、急性心肌梗死等。
11.1.2.4 急性大出血
11.1.2.5 白血病
11.1.2.6 恶性肿瘤：肝癌、胃癌、肺癌等。
11.1.3 病理性减少，见于：
11.1.3.1 某些感染性疾病，尤其是革兰氏阴性杆菌感染（伤寒、副伤寒等）。
11.1.3.2 某些病毒感染：流感、病毒性肝炎等。
11.1.3.3 某些原虫感染，如疟疾、黑热病等
11.1.3.4 某些血液病：再生障碍性贫血、急性粒细胞缺乏症、巨幼细胞贫血等。
11.1.3.5 自身免疫性疾病：SLE、AIDS等。
11.1.3.6 脾功能亢进：门脉肝硬化
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11.1.3.7 肿瘤化疗、放疗及某些药物（氯霉素、磺胺类药等）反应等。
11.2 中性粒细胞：中性粒细胞增多分生理性和病理性增多。病理性增多可见于急性感染或炎症、急性失血、急性中毒及恶性肿瘤等；中性粒细胞减少可见于病毒感染、慢性理化损伤、自身免疫性疾病等。
11.3 淋巴细胞：淋巴细胞病理性增多见于某些慢性感染、肾移植手术后、白血病、再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等；淋巴细胞减少可见于接触放射线，应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素，严重化脓性感染等情况。
11.4 红细胞和血红蛋白：
11.4.1减少见于：急、慢性红细胞丢失过多、红细胞寿命缩短、造血原料不足、骨髓造血功能减退等；
11.4.2增多见于：真性红细胞增多症，肺心病等。
11.5 红细胞比积：增高可见于大面积烧伤、脱水等血液浓缩情况；减低可见于贫血。
11.6 红细胞体积分布宽度（RDW）
11.6.1用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW值增大，当给以铁剂治疗有效时RDW值一过性进一步增大，随后逐渐降到正常。
11.6.2对小细胞低色索性贫血的鉴别诊断.缺铁性贫血时RDW值增大而轻型海洋性贫血时RDW值正常。
11.6.3用于对贫血的分类(Bassman MCV/RDW分类法)，根据MCV、RDW值变化共分为6种类型贫血。
　　A.小细胞均一性贫血：MCV减小，RDW正常，如轻型海洋性贫血。
　　B.小细胞不均一性贫血：MCV减小，RDW增大，如缺铁性贫血。
　　C.正细胞均一性贫血：MCV、RDW均正常，如慢性病所致贫血。
　　D.正细胞不均一性贫血：MCV正常，RDW增大，如早期缺铁性、营养性贫血。
　　E.大细胞均一性贫血：MCV增大，RDW正常，如再生障碍性贫血。
　　F.大细胞不均一性贫血MCV、RDW均增大，如巨幼细胞性贫血。
11.7 MCV、MCH、MCHC：这三个参数通常都用于各型贫血的诊断，具体应用如下表：
贫血类型 MCV（82～100） MCH(27～34) MCHC(316～354) 常见原因及疾病
正常细胞性贫血 正常 正常 正常 急性失血、急性溶血、
再生障碍性贫血、白血病等
大细胞性贫血 ＞ 正常 ＞正常 正常 叶酸、维生素B12缺乏或吸收障碍
单纯小细胞性贫血 ＜正常 ＜正常 正常 慢性炎症、尿毒症
小细胞低色素性贫血 ＜正常 ＜正常 ＜正常 铁缺乏、维生素B6缺乏、珠蛋
白肽链合成障碍、慢性失血
11.8 血小板：血小板数量病理性减低见于性白血病、再障、脾亢、血小板 减少性紫癜、败血症等；增高见于慢性白血病、真性红细胞增多症、急性化脓性感染、脾切除、溶血性贫血等 。
11.9 MPV：研究表明MPV的大小与PLT的多少呈非线性负相关，故在分析MPV的临床意义时应结合PLT的变化来考虑。
11.9.1鉴别血小板减少症的病因：骨髓损伤导致血小板减少时，MPV下降；当血小板在外周血中破坏增多导致血小板减少时，MPV增大；当血小板分布异常导致血小板减少时，MPV正常。
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11.9.2 MPV增高可作为骨髓功能恢复的较早期指标。当骨髓功能衰竭时，MPV与PLT同时持续下降，骨髓抑制越严重，MPV越小，当骨髓功能恢复时，MPV值的增大先于PLT数值的增高。
11.9.3血栓前状态或血栓性疾病时MPV常增高。
12.0 PCT的临床应用报道尚少。在血小板增多症、慢性粒细胞性白血病早期PCT常增大。
12.1 PDW的增大可能与骨髓巨核细胞的倍体数增大等有关，其临床应用尚较少。
12.注意事项：
12.1 采血时，加入到抗凝管后，应注意充分混匀，避免血液凝固。混匀时，动作要轻，避免血液有形成分破坏。
12.2 样本测定前，应注意充分混匀，方法如下：①将血样瓶口朝上置于操作者双手掌心，双手来回搓动10次，动作要连贯。②颠倒小瓶，使瓶口朝下，将血样置于操作者双手掌心，双手来回搓动10次。③重复①和②步骤8次。④ 轻轻颠倒混匀1分钟左右。
12.3 为保证结果准确性，应做好仪器的保养和校准(见保养和校准程序)。
12.4 仪器有报警提示或直方图有异常时，应进行手工方法复查。当WBC>1O.O X10^9／L或<3.0X10^9/L时，应推片瑞氏染色，镜下复查白细胞分类、形态。当RBC<3.0X10^9／L或PLT<50x10^9／L时，应进行手工方法镜检复查。
12.5 建议使用仪器配套的试剂。
12.6 样本应在采血后2分钟至4小时内检测完成。
12.7 血液与抗凝剂的比例要适当，lml血液用1.5-2.0mg的EDTA-K2抗凝。
12.8 MID包括单核细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞、幼稚细胞；当MXD>13%时，应推片瑞氏染色，镜下复查白细胞分类、形态。
12.9失控处理：当出现失控现象时，按失控处理程序，寻找失控原因，并扣留该批检测结果，待查明失控原因并排除后重测样本，然后才发出报告。
13.参考文献
11.1尚红、王毓三、申子瑜主编，全国临床临验操作规程（第4版），人民卫生出版社，2015.