十味清瘟汤HPLC指纹图谱的建立及其4种成分含量测定_彭佩.pdf
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1、年月第卷第期,湖北中医药大学学报?【药学研究】十味清瘟 汤指纹图谱的建立及其种成分含量测定彭佩王婉秋席振华文莉,杨贤海,杨成雄(荆楚理工学院化工与药学院,湖北荆门 ;湖北中医药大学药学院,湖北武汉;湖北省荆门市中医医院,湖北荆门)摘要:目的建立十味清瘟汤的指纹图谱并进行化学模式识别分析,同时测定其中种成分的含量。方法利用高效液相色谱法结合中药指纹图谱相似度评价系统(版)建立批十味清瘟汤的指纹图谱并进行相似度评价。采用 软件对共有峰进行系统聚类分析、主成分分析。采用高效液相色谱法测定批样品中升麻素苷、毛蕊异黄酮、撕皮素、甲基维斯阿米醇苷的含量。结果在“十味清瘟汤”特征指纹图谱中,共标定个共有峰,
2、通过与对照品比较指认其中峰为曱基维斯阿米醇香,峰为毛蕊异黄銅,峰为升麻素苷,峰为榭皮素。各批次的相似度均,聚类分析结果显示批十味清瘟汤可分为类,主成分分析表明,在第个成分累积方差值占,种成分在各自范围内线性良好,精密度、重复性、稳定性的值均,加样回收率平均值为?,为?。结论所建立的十味清瘟汤指纹测定图谱和含量测定方法符合相关规定,结合化学模式分析识别分析可用于十味清瘟汤的质量控制。关键词:十味清瘟汤;指纹图谱;化学成分中图分类号:文献标识码:?,?,(,;?,;,):,(),基金项目:湖 北省科技重大专项项目(项目编 号:)。作者简介:彭佩(),女,荆 楚理工学院讲师,研宄方向:中药新剂型与新
3、技术。通信作者:杨成雄(),男,荆 楚理工学院教授,研究方向:中药学,。?湖北中医药大学学报 年月第卷第期,?,?,:;“十味清瘟汤”由玉屏风散加减而来玉屏风散”有益气固表止汗的作用,能够增 强 免疫力。该方之功效如同人体抵御邪气之屏 障,珍贵如玉,由此得名。方中运用防风、黄芪相 须相使,取黄芪 补气固表之效,辅以防风祛风解表之功,二者共用,使其补中寓散。在治疗外感风邪的同时,更注重免疫的调节,增 强体力,抵御外邪。中药指纹图谱是评价中药材优劣、鉴别真伪确保其一致性和稳定性的有效方法,化学模式识别中的系统聚类分析与主成分分析可以在无样品类别信息的情况下获取分类信息,其主要目的是在 分析数据之间
4、最初的结构特征,反应样品之间 的相似程度。本研宄拟建立“十 味清瘟汤”的髙效液相色谱指纹图谱,并进行化学模式识别分析,同时 测定“十味清瘟汤”中升麻素苷、毛蕊异黄酮、槲皮素、甲基维斯阿米醇苷含量,评价“十味清瘟汤”整体质量,为其质量控制标准提供参考。材料与方法主要仪器高效液相色谱仪(美国赛默飞公司)、型电子天平(常熟 市天量仪器有限责任公司)、型多功能粉碎机(上海哈瑞斯电器有限公司)、型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)、型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)等。药物与试剂升麻素苷对照品(批号:,纯度)、毛蕊异黄酮对照品(批号:,纯度)、槲皮
5、素对照品(批号:,纯度)、甲基维斯阿米醇苷对照品(批号:,纯度)均购自成都埃法科技有限公司。防风饮片(河北,批号:)、炒白术(浙江,批号:)、黄芪(山西,批号:)、金银花(山东,批号:)、贯众(黑龙江,批号:)、芦根(湖南,批号:)、佩兰(江西,批号:)、苍术(河北,批号:)、陈皮(湖南,批号:)、大枣(山西,批号:)。上述药材均由荆门市中医院提供,并由该医 院王砚主任药师 鉴定药材均符合标 准。十味清 瘟汤(批号:,编号依次为)由荆 楚理工学院自制;甲醇、乙腈为色谱醇,其余试剂均为分析纯,水为超纯水。对照品溶液的配制取升麻素苷、毛蕊异黄酮、槲皮素、甲基维斯阿米醇苷对照品适量,精密称定,加甲醇
6、溶解,制成升麻素苷、毛蕊异黄酮、槲皮素、甲基维斯阿米醇苷质量浓度分别为、及其混合对照品溶液()。供试品溶液的配制将味药材按照防风,黄芪,芦根,金银花,佩兰,贯众,苍术,陈皮,大赛,炒白术投入,总量共,加水(倍水)浸泡,常压煎煮次,合并煎煮液,用旋转蒸发仪将药液浓缩至左右,得到供试品十味清瘟汤的水煎液,倒出用蒸发皿浓缩至干,加入的甲醇水溶液,完全溶解后过滤,用微孔滤膜过滤,即得供试品溶液。色谱条件采用(,()色谱柱,流动相比例为乙腈甲醇,梯度脱洗方法为(:),(:),(:);体积流量;柱温;检测波长。结果指纹图谱的建立精密度试验:取供试品溶液,在“”项下进样测定次,以升麻素苷为参照,测得各共有峰
7、相对保留时间为?,相对峰面积为?,表明仪器精密度良好重复性试验:取供试品份,按“”项下方法制备供试品溶液,“”项下进样测 定,以升麻素苷为参照,测得各共有峰相对保留时间为?,相对峰面积为,表明该方法重复性良好。稳定性试验:取供试品溶液,分别在、在“”项下进样测 定,以升麻素苷为参照,测得各共有峰相对保留时间为,相对峰面积为表明溶液在内具有年月第卷第期,湖北中医药大学学报?良好的稳定性。对照图谱生成及共有峰标定:取批供试品溶液,在“”项下进样测定,相关数据导入年版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,以为参照图谱,为参照峰进行全谱峰匹配,以平均数法生成对照指纹图谱。按照文献报道结合对照品进行比对,
8、峰为甲基维斯阿米醇苷,峰为毛蕊异黄酮,峰为升麻素苷,峰为槲皮素。见图图。图对照指纹图谱图混合对照品 的色谱图相似度评价:取批十 味清瘟汤的样品溶液采用年版中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件进行相似性评估,以参照图谱对比,批十味清瘟汤的的相似性为和,表明批十味清瘟汤的质量差异较小。聚类分析采用软件,以批十味清瘟汤指纹图谱的个共有峰峰面积为变量,进行系统聚类分析。结果显示,当平方欧氏距离为时,批样品可聚为类,、为一类,、为一类,其余批次样品为一类。见图。图批样品 的聚类 分析树状图主成分分析在前个成分中,累积方差值占,表明这个主要成分含有个总成分的资讯,能比较好地反映样品的主要特征,具有很好的代表
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