干燥香榧假种皮精油挥发性成分、体外抗氧化活性及抑菌效果研究.pdf
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1、2023 年 6 月第 44 卷第 3 期河南工业大学学报(自然科学版)Journal of Henan University of Technology(Natural Science Edition)Jun.2023Vol.44 No.3收稿日期:2023-04-09基金项目:浙江省科技计划公益项目(LGF18C200003);浙江省自然科学基金项目(LR13C200002)作者简介:刘思宇(1998),女,四川崇州人,博士研究生,研究方向为食品微生物技术。通信作者:陈启和,教授,博导,E-mail:。干燥香榧假种皮精油挥发性成分、体外抗氧化活性及抑菌效果研究刘思宇1,史瑛1,陈启和1,2
2、1.浙江大学 食品科学与营养系,浙江 杭州 3100582.浙江大学 长三角智慧绿洲创新中心,浙江 嘉兴 314102摘要:香榧假种皮作为废物被丢弃会造成资源浪费和环境污染,为提高其综合加工价值及开发香榧精油产品,采用水蒸气蒸馏法提取干燥香榧假种皮精油,利用 GC-MS 技术分析精油的挥发性成分及含量,通过体外自由基清除试验探究干燥香榧假种皮精油的抗氧化活性,并采用牛津杯法评估其对 3 种食源性致病菌(大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌)的抑制效果。结果表明:利用 GC-MS 共鉴定出 45 种挥发性成分,包括萜烯类、醇类、醛类和酮类等化合物,主要成分为 3-蒈烯(26.20%)、D-柠檬
3、烯(15.11%)、-杜松醇(8.16%)和-杜松烯(7.57%);干燥香榧假种皮精油具有较好的体外抗氧化活性,对 DPPH、ABTS 和羟自由基清除能力与其质量浓度呈正相关(P0.01);此外,干燥香榧假种皮精油有明显的抑菌作用,抑菌效果与其质量浓度呈正相关(P大肠杆菌金黄色葡萄球菌。干燥香榧假种皮精油具有较好的体外抗氧化和抑菌活性。关键词:香榧;精油;挥发性成分;体外抗氧化活性;抑菌效果中图分类号:TS201.2文献标志码:A文章编号:1673-2383(2023)03-0042-08DOI:10.16433/j.1673-2383.2023.03.006Study on volatile
4、 compounds,in vitro antioxidant activities and antibacterial effects of es-sential oil extracted from the dried aril of Torreya grandisLIU Siyu1,SHI Ying1,CHEN Qihe1,21.Department of Food Science and Nutrition,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China2.Innovation Center of Yangtze River Delta,Zhejia
5、ng University,Jiaxing 314102,ChinaAbstract:In this study,the essential oil of Torreya grandis(T.grandis)dried aril was extracted by steam distillation,and its volatile compounds and contents were analyzed using gas chromatography-mass spec-trometry(GC-MS).In addition,the in vitro antioxidant activit
6、ies of the essential oil were investigated by DPPH,ABTS and hydroxyl free radicals scavenging rate assays.Finally,the inhibitory effects against Escherichia coli(E.coli),Bacillus cereus(B.cereus)and Staphylococcus aureus(S.aureus)were evaluated by the Oxford cup method.According to the GC-MS analysi
7、s,a total of 45 volatile components were identified in the essential oil of T.grandis dried aril.Among them,3-Carene was the most dominant compound,possessing the highest relative content of 26.20%,followed by D-limonene,-Cadinene and-Cadinol,with relative content of 15.11%,8.16%and 7.57%,respective
8、ly.The results of in vitro free radical scavenging tests showed that the essential oil exhibited great antioxidant activities,and the scaven-ging ability against DPPH,ABTS and hydroxyl free radicals was positively correlated with the mass con-第 44 卷第 3 期刘思宇,等:干燥香榧假种皮精油挥发性成分、体外抗氧化活性及抑菌效果研究centrations
9、 of the essential oil(P0.01).The scavenging rates against DPPH,ABTS and hydroxyl free radicals were 74.82%1.58%,78.78%1.75%and 69.76%2.73%,respectively,at the highest con-centration of 1 mg/mL essential oil.The results of the antibacterial effects revealed that the essential oil of T.grandis dried a
10、ril inhibited E.coli,B.cereus,and S.aureus to some extent.By comparing the diame-ter of the inhibition zone,the essential oil displayed obvious antibacterial activity,which was positively cor-related with the concentration(P0.01).At the same mass concentration,B.cereus was the most sensi-tive to the
11、 essential oil,followed by E.coli and finally S.aureus.This study demonstrated that the essen-tial oil of T.grandis dried aril had good in vitro antioxidant and antibacterial activities.Key words:Torreya grandis;essential oil;volatile components;in vitro antioxidant activity;antibacterial effect香榧(T
12、orreya grandis,T.grandis),又称野榧、玉香果,属于红豆杉科榧属植物。香榧是我国特有的一种珍贵经济干果类树种,主要分布在浙、苏、皖、闽和赣等地区,浙江省诸暨市是香榧的主产地,有着“中国香 榧之乡”的美称1。香榧果实因其独特的风味、极高的营养和药用价值而深受人们的喜爱,成为市场受欢迎和有价值的干坚果之一,并在全球范围内消费2。香榧果实由假种皮、外种皮和食用种子仁构成,其中香榧假种皮是包裹在香榧果实外面的一层肉质化结构,占新鲜果实质量的 50%60%3。目前对于香榧果实的工业开发大多是将采摘的新鲜果实进行晾晒,之后通过脱皮机将假种皮和种子分离,保留种子做进一步的处理加工,而假
13、种皮作为废物被丢弃,既污染了环境又造成了资源的浪费4。研究表明,香榧假种皮作 为 香 榧 加 工 过 程 中 的 下 脚 料,其 富 含萜类和芳香族等多种活性化合物,具有抗氧化、抑菌消炎、镇咳和驱虫等生物活性和药用功能,是一种提取药用活性精油和香料制品的天然原料5。香榧精油作为香榧假种皮的挥发性次级代谢产物之一,含有萜烯类、醇类、醛类、酮类和酯类等 多 种 芳 香 活 性 成 分,在 清 除 自 由 基 方面有较好的效果,具有体外抗氧化和抑菌活性,可作 为 提 取 高 级 芳 香 油 和 浸 膏 的 天 然 优 质原料6-7。目前关于香榧属植物的研究主要集中在香榧枝叶和假种皮等的化学组成及其生
14、物活性等方面。关于香榧假种皮精油的报道多为比较不同提取方法和提取工艺对所得精油成分及含量的影响,开展香榧假种皮精油的化学物质及生物活性功能的研究对于提高香榧假种皮的附加价值、合理开发利用我国特有的地方资源以及增加农民经济收入具有积极的促进作用。作者采用水蒸气蒸馏法对干燥的香榧假种皮进行提取,利用 GC-MS 技术对提取得到的精油的挥发性成分及含量进行分析,进一步通过体外抗氧化试验探究了香榧假种皮精油对 DPPH、ABTS 和羟自由基的清除能力,评估了该精油对 3种食源性致病菌(大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌)的抑制效果,以期为香榧假种皮资源的深加工和香榧精油的开发利用提供参考。1材料与
15、方法1.1试验材料干燥香榧假种皮:浙江省诸暨市果园;无水乙醇、抗坏血酸(Vc)、过硫酸钾:分析纯,国药集团化学试剂有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH):上海麦克林生化科技有限公司;2,2-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS):德国 Sigma-Aldrich 公司;Luria-Bertani(LB)液体培养基、LB 固体培养基、羟自由基清除能力检测试剂盒:北京索莱宝科技有限公司。大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌均为本实验室保藏。1.2仪器与设备BSA 223s 电子天平:德国赛多利斯有限公司;KDM 水蒸气蒸馏设备:天津赛得利斯实验分析仪器制造厂;78
16、90B/5977A 气相色谱-质谱联用仪:美国安捷伦科技有限公司;紫外可见光分光光 度 计:美 国 赛 默 飞 世 尔 科 技 公 司;GR-B2078DAH 冰 箱:韩 国 LG 电 子 集 团;Opti-Clean1300 洁净工作台:力康生物医疗科技控股有限公司;DK-S22 电热恒温水浴锅:上海精宏实验设备有限公司;BPH-9162 恒温培养箱:上海一恒科学仪器有限公司。34河南工业大学学报(自然科学版)2023 年1.3试验方法1.3.1香榧假种皮精油的提取与配制采用水蒸气蒸馏法提取香榧假种皮精油。称取干燥的香榧假种皮粉末 100 g 置于圆底烧瓶中,按料液比 1 10(g/mL)加
17、入去离子水,并加入沸石,组装水蒸气蒸馏装置后开始加热,循环提取 6 h,收集提取器中的精油,用无水硫酸钠干燥。提取的香榧假种皮精油密封储藏在 4 冰箱中备用。将香榧假种皮精油按照一定比例溶于无水乙醇,混合均匀后得到质量浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL 的精油溶液。1.3.2香榧假种皮精油挥发性成分分析采用气相色谱-质谱技术(GC-MS)分析香榧假种皮精油的挥发性成分,参考 Hu 等8的方法并稍加修改。气相色谱条件:HP-5MS 毛细管柱(30 m0.25 mm,0.25 m),进样口温度 250 ,进样量 1 L,载 气 为 氦 气(99.999 5%),流 速1
18、mL/min,分流比 15 1。升温程 序:起始温度60 ,保持 2 min,以 5 /min 升至 140 ,保持3 min,再以 10 /min 升温至 280 ,保持 2 min。质谱条件:电子轰击电离源(EI),离子源温 度230 ,能量电压 70 eV,质量扫描范围 35 450 m/z,全扫描模式。将获得的质谱数据和美国国家标准与技术研究院(NIST)、Willey 质谱数据库中存储的数据进行匹配鉴定精油挥发性成分,采用色谱峰面积归一化法定量计算各成分的相对含量。1.3.3对 ABTS 自由基清除能力的测定参 考 Zhu 等9的 方 法 并 稍 加 修 改。将7 mmol/L 的
19、ABTS 溶液与 2.45 mmol/L 的过硫酸钾等体积混合反应,并在室温黑暗条件下静置12 h,得 到 ABTS+储 备 液。用 无 水 乙 醇 稀 释ABTS+储备液至 734 nm 处的吸光度为 0.700 0.050,得到 ABTS+工作液。在 5 mL 试管中加入1 mL ABTS+工作液和 3 mL 无水乙醇,混合均匀后置于室温黑暗条件下反应 30 min,于 734 nm 处测定吸光度,记为 A0。将 1 mL ABTS+工作液、1 mL 不同质量浓度的精油样品以及 2 mL 无水乙醇依次加入试管中,涡旋混匀后在室温黑暗条件下反应 30 min,于 734 nm 处测定吸光度,
20、记为 A。用相同质量浓度的抗坏血酸(Vc)作为阳性对照,每个样品做 3 个平行。ABTS 自由基清除率=(A0-A)/A0100%。1.3.4对 DPPH 自由基清除能力的测定参考 Sun 等10的方法并稍加修改。用无水乙醇配制 0.2 mmol/L 的 DPPH 工作液。在 5 mL试管中加入 1 mL DPPH 溶液和 1 mL 无水乙醇,混合均匀后置于室温黑暗条件下反应 30 min,于517 nm 处测定吸光度,记为 A0。将 1 mL DPPH 溶液和 1 mL 不同质量浓度的精油样品加入试管中,涡旋混匀后在室温黑暗条件下反应 30 min,于 517 nm 处测定吸光度,记为 A。
21、用相同质量浓度的抗坏血酸(Vc)作为阳性对照,每个样品做3 个平行。DPPH 自由基清除率=(A0-A)/A0100%。1.3.5对羟自由基清除能力的测定H2O2将邻二氮菲-Fe2+水溶液中的 Fe2+通过Fenton 反应氧化为 Fe3+,并产生羟自由基,从而导致 536 nm 处的吸光度下降,而吸光度下降速率的抑制程度反映了样本清除羟自由基的能力。参照试剂盒说明书进行操作,将检测试剂依次加入 1.5 mL EP 管中,充分混匀后加入 150 L 不同质量浓度的精油样品,涡旋混匀后置于 37 水浴锅中反应 60 min。在常温条件下 10 000 r/min离心 10 min,取上清液测定
22、536 nm 处的吸光度。用不加样品的蒸馏水体系作为空白组,不加样品的反应体系作为试验对照组,加样品的反应体系作为试验组,每个样品做 3 个平行。羟自由基清除率=(A-A1)/(A0-A1)100%,式中:A0、A1、A 分别为空白组、对照组、试验组在536 nm 处的吸光度。1.3.6香榧假种皮精油的抑菌试验采用牛津杯法测定不同样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑菌圈,评估不同质量浓度的香榧假种皮精油的抑菌效果。参考曾琳等11的方法并稍加修改。挑取 3 株供试菌于 LB 固体培养基中分别进行活化,然后挑取适量菌种接种于 4 mL 的 LB 液体培养基中,37 振荡培养 24 h
23、后将供试菌液稀释至浓度为 106 CFU/mL。取 150 L 各供试菌悬液于 LB 固体培养基中,用涂布棒涂布均匀,待微干后在平板表面放置牛津杯(直径 8 mm),将 100 L 不同质量浓度的香榧假种皮精油加入牛津杯,置于 37 培养箱中培养 24 h。用无水乙醇做空白对照,每组做 3 个平行,测量各抑菌圈直径。1.4数据处理数 据 以“平 均 值 偏 差”表 示,采 用 Excel 2019、SPSS 26.0 及 Origin 2018 进行数据统计分析和作图。44第 44 卷第 3 期刘思宇,等:干燥香榧假种皮精油挥发性成分、体外抗氧化活性及抑菌效果研究2结果与分析2.1香榧假种皮精
24、油挥发性成分分析通过 GC-MS 对干燥香榧假种皮精油的挥发性成分进行分析,精油的 GC-MS 总离子流图如图 1 所示。表 1 列出了香榧假种皮精油中的挥发性成分及其含量,共鉴定得到 45 种化合物,包括萜烯类、醇类、醛类和酮类等化合物。香榧假种图 1干燥香榧假种皮精油的总离子流图Fig.1Total ion current chromatogram of essential oil from the dried aril of T.grandis表 1干燥香榧假种皮精油的挥发性化合物及其含量Table 1Volatile compounds and their content of ess
25、ential oil from the dried aril of T.grandis序号保留时间/min化合物名称分子式CAS 号相对含量/%18.600 3环葑烯C10H16488-97-10.3529.121 63-蒈烯C10H16488-97-126.2039.463 7莰烯C10H1679-92-51.16410.302 8-水芹烯C10H16555-10-20.42510.373 71-亚甲基-4-(1-甲基乙烯基)环己烷C10H16499-97-82.34610.916 8-蒎烯C10H1618172-67-30.96712.173 7D-柠檬烯C10H165989-27-515
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