药理学实验讲义-1.doc

药理学实验指导

实验一 药理学实验基础知识与常用动物捉拿、给药
【目的】 1、学习药理学实验基础知识；
2、掌握药理学实验常用动物捉拿、给药方法。
【器材】 1ml、5ml、20ml注射器，大、小鼠灌胃针头，250ml烧杯、鼠笼(或铁丝笼)，电子称。
【药品】 0.9%生理盐水。
【动物】 小白鼠1只、大鼠1只、家兔1只。
【内容】
一、实验动物的捉拿方法
1、蛙和蟾蜍 左手握持蛙或蟾蜍，食指和中指夹住左前肢，拇指压住右前肢；右手将双下肢拉直，左手无名指及小指将其压住而固定。此法用于淋巴囊注射。毁脑和毁脊髓则用左手食指和中指夹持蛙或蟾蜍的头部，拇指和无名指小指握持双下肢，右手持刺针进行操作。
2、小白鼠可采取双手法和单手法两种形式。
双手法：右手提起鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉，小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。此时迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠颈背部皮肤，并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部，固定于手中。
单手法：小白鼠置于笼盖上，先用左手食指与拇指抓住鼠尾，手掌尺侧及小指夹住尾根部，然后用左手拇指与食指捏住颈部皮肤。

3、大白鼠大白鼠容易激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套或用厚布盖住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住头部，其余手指与手掌握住背部和腹部。不要用力过大，切勿捏其颈部，以免窒息致死。

4、家兔用左手抓住颈背部皮肤(抓的面积越大，其吃重点越分散)。将兔提起，以左手托住其臀部，使兔呈坐位。
二、实验动物的给药途径与方法
1、小白鼠给药途径与方法
灌胃(ig)：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃针头自口角进入口腔，紧贴上腭插入食道。如遇阻力，将灌胃针头抽回重插，以防损伤。
常用灌胃量为0.1～0.2ml/10g。
皮下注射(ih)：可用腹部、背部、腹股沟的皮下，此处皮肤比较松弛，也可由助手协助。注药量一般为0.1～0.2ml/10g。
肌肉注射(im)：一人抓住小鼠头部皮肤和尾巴，另一人持连4号针头的注射器，将针头刺入后腿外侧肌肉。注射量一般不超过0.1～0.2ml/只。
静脉注射(iv)：将小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部使血管扩张。自尾部末端刺入，刺入血管后抽针芯可见回血。常用注射量为0.1～0.2ml/10g。
腹腔注射(ip)：将小鼠固定后，从下腹部外侧进针，深度较皮下注射深(图3-8)。常用注射量为0.1～0.2ml/10g。

2、大鼠给药途径与方法
灌胃、腹腔注射、皮下注射及尾静脉注射与小鼠相似。
静脉注射也可在麻醉下行舌下静脉注射。

3、家兔给药途径与方法
灌胃：一人将兔身固定于腋下，一手固定兔头，另一手将开口器放入兔口。另一人将胃管从开口器孔插入口内，再慢慢插入食道和胃。为慎重起见，可将胃管外端放入水中，如无气泡，则可证实胃管在胃内。灌胃量一般为10ml/kg。如用兔固定盒，可由一人操作。
静脉注射：一人固定兔身和兔头，另一人在使兔耳边缘血管(耳缘静脉)扩张后，将针头从静脉末端刺入血管，左手拇指和食指固定针头和兔耳，右手注药。注药量一般为2ml/kg，等渗液可达10ml/kg。
皮下、肌肉、腹腔注射与鼠类相似。常用注药量分别为0.5、1.0、5.0ml/kg。

三、实验动物的处死方法
颈椎脱位法：
小白鼠和大白鼠：术者左手持镊子或用拇指、食指固定鼠头后部，右手捏住鼠尾，用力向后上方牵拉，听到鼠颈部喀嚓声即颈椎脱位，脊髓断裂，鼠瞬间死亡。
豚鼠：术者左手倒持豚鼠，用右手掌尺侧或木棒猛击颈部，使颈椎脱位迅速死亡。
断头、毁脑法：
常用于蛙类。可用剪刀剪去头部或用金属探针经枕骨大孔破坏大脑和脊髓而致死。
大鼠和小鼠也可用断头法处死，术者需戴手套，两手分别抓住鼠头与鼠身，拉紧并显露颈部，由助手持剪刀，从颈部剪断头部。
空气栓塞法：
术者用50～100ml注射器，向静脉血管内迅速注入空气，气体栓塞心腔和大血管而使动物死亡。使猫与家兔致死的空气量为10～20ml，犬为70～150ml。
大量放血法：
鼠可用摘除眼球，从眼眶动静脉大量放血而致死。如不立即死亡，可摘除另一眼球。
猫可在麻醉状态下切开颈三角区，分离出动脉，钳夹上下两端，插入动脉插管，再松开下方钳子，轻压胸部可放大量血液，动物可立即死亡。
对于麻醉犬，可横向切开股三角区，切断股动静脉，血液喷出；同时用自来水冲洗出血部位(防止血液凝固)，3～5min动物死亡。采集病理切片标本宜用此法。

实验二 不同给药途径对药物作用的影响

【目的与原理】
不同给药途径可影响药物的作用。依据药效出现时间从快到慢，其顺序一般为：静脉注射、肌肉注射、皮下注射、口服。就作用性质而言，同一药物随着给药途径改变将会产生不同的药效。如硫酸镁口服具有导泄和利胆作用，注射具有抗惊厥和降压作用，外用则具有消炎和镇痛作用。本实验主要观察不同给药途径对药物效应的影响。
【器材】1ml注射器2支，灌胃针头1个，小鼠笼，电子秤。
【药品】10%硫酸镁(magnesium sulfate)
【动物】小白鼠2只。
【方法】
1.取体重接近、性别相同的小白鼠2只，称重并标记。观察动物正常活动情况。
2.1号鼠灌胃10%硫酸镁溶液0.15ml/10g，2号鼠腹腔注射10%硫酸镁溶液0.15ml/10g。
3.观察并比较两鼠在呼吸、肌张力、大便有何不同。
【结果】将实验结果填入下表：
表2-1硫酸镁不同给药途径对药物作用的影响
鼠号 给药途径 给药体积(ml/只) 呼吸 肌张力 大便 死亡情况
1号
2号

实验三 不同给药剂量对药物作用的影响

【目的与原理】
药理效应与剂量在一定范围内成正比，称为剂量-效应关系，药物效应的强弱呈连续增减的变化，可用具体数量或最大反应的百分率表示的称为量反应，如果药理效应不随药物剂量或浓度呈连续性量的变化，则变现为反应性质的变化，称为质反应，一般药物剂量过小，药物作用不明显，剂量过大，则可能出现不良反应，甚至毒性反应。 本实验主要观察不同给剂量对药物作用效果的影响。
【器材】1ml注射器3支，小鼠笼，电子秤。
【药品】0.2%、0.4%和0.8%戊巴比妥钠(sodium pentobarbital)溶液
【动物】小白鼠3只。
【方法】
1.取体重接近、性别相同的小白鼠3只，称重并标记3、4、5。观察正常活动。.
2.3号、4号和5号小鼠分别腹腔注射0.2%、0.4%和0.8%戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g.观
3.察翻正反射消失、恢复的时间，并比较三鼠有何不同现象发生。
【结果】将所观察的实验结果填入下表：
表3-1不同剂量戊巴比妥钠对药物作用的影响
鼠号 浓度 给药途径 给药体积(ml/只) 现象 显效时间 恢复时间
3号
4号
5号

实验四 不同给药剂型对药物作用的影响

【目的】 观察不同给剂型对药物作用效果的影响。
【器材】1ml注射器2支，小鼠笼，电子秤。
【药品】8%乌拉坦(urethane)水溶液，8%乌拉坦胶浆液(含2.5%羧甲基纤维素)
【动物】小白鼠2只。
【方法】

1. 取体重接近、性别相同的小白鼠2只，称重并标记6、7。观察正常活动。
2. 6号鼠皮下注射8%乌拉坦水溶液0.15ml/10g，7号鼠皮下注射8%乌拉坦胶浆液0.15ml/10g，观察小鼠对所注射药物的反应。
3. 记录小鼠出现步态蹒跚、卧倒及翻正反射消失等反应的时间。比较小鼠注射不同乌拉坦制剂后，造成中枢抑制的深度及作用出现的快慢与持续时间的长短。
【结果】将所观察的实验结果填入下表：
表4-1乌拉坦不同剂型对小鼠中枢抑制作用的影响
鼠号 剂型 给药途径 给药体积(ml/只) 现象 显效时间 恢复时间
6号
7号

实验五 药物半数致死量LD50和半数
有效量ED50的测定

【目的与原理】
ED50是标志药物效价的一个参数，它是指在一定的实验条件下，一群动物用药后，约半数动物出现疗效的剂量，而LD50则是半数动物出现死亡的剂量。为了对药物的毒性和疗效有一个较全面的考虑，可计算药物的治疗指数。治疗指数= LD50/ ED50，此比值越大，就越安全。本实验学习LD50和ED50的测定方法，掌握LD50、ED50的计算方法，理解其药理学意义
【器材】1ml注射器，小鼠笼，电子秤。
【药品】戊巴比妥钠：0.21%、0.26%、0.32%、0.40%、0.77%、0.96%、1.20%、1.50%。
【动物】小白鼠。体重18～24g，雌雄兼用。实验前禁食12小时，不禁水。
【方法】
（一）ED50的测定
1.取小白鼠40只，雌雄各半，随机分成4组，每组10只。
2.各组戊巴比妥钠剂量分别为21mg/kg、26mg/kg、32mg/kg、40mg/kg，用其相应浓度为0.21%、0.26%、0.32%和0.40%的戊巴比妥钠，每鼠腹腔注射药物容量0.1ml/10g。
3. 给药后立即记下时间，以小鼠15分钟内翻正反射（将动物背位放置单面，试验放手后能否立即翻正）消失，作为阳性反应指标。

（二）LD50的测定
方法同ED50的测定，而剂量分别为77mg/kg,，96mg/kg，120mg/kg和150mg/kg，用其相应浓度为0.77%、0.96%、1.20%和1.50%的戊巴比妥钠。以24小时内死亡（呼吸停止）作为指标，记下死亡数，整个实验过程中，小白鼠按正常生活条件养一天。
结果记录及计算：
表5-１：戊巴比妥钠ED50测定结果
组别
动物数
（只）
剂量
（mg/kg）
翻正反射消失
动物数（只）
有效率
1
10
21

2
10
26

3
10
32

4
10
40

表5-２：戊巴比妥钠LD50测定结果

组别
动物数
（只）
剂量
（mg/kg）
翻正反射消失
动物数（只）
有效率
1
10
77

2
10
96

3
10
120

4
10
150

以上结果按寇氏法公式计算：
公式：ED50=lg-1[Xm-i (∑pi-0.5)]
LD50=lg-1[Xm-i (∑pi-0.5)]
上式中：Xm：最大剂量的对数
i：相邻两组剂量对数值之差（取绝对值）
∑pi：各组反应率（即有效率或死亡率）的总和。
注意事项：
1、各组剂量千万不能搞错，剂量要准确。
2、药物推注速度要慢，以免引起呼吸抑制。
思考题：
什么是LD50、ED50抑制？测定其有何意义？
２、什么是治疗指数？如何测定和计算？

实验六 传出神经系统药物对血压的影响

【目的】 1、学习麻醉动物血压的记录方法；
2、观察传出神经系统药物对家兔血压的作用。
【器材】生物信号处理采集系统，压力换能器，直、弯手术剪，眼科剪，眼科镊，大、小止血钳（直、弯），动脉夹，静脉夹、电子称、1 ml、5 ml、50 ml注射器
【药品】20%乌拉坦(uretharum)水溶液，1000U/ml肝素(heparin)生理盐水，0.01%肾上腺素(adrenaline)，0.01%去甲肾上腺素，0.005%异丙肾上腺素(isoprenaline)
【动物】家兔。
【方法】
1、 将家兔用20%乌拉坦5ml/kg腹腔麻醉，仰卧固定于手术台上；
2、 剪去颈腹部毛。于颈部正中切开皮肤，钝性分离颈部和气管腹面肌肉；
3、 分离出气管和一侧颈总动脉，备线；
4、 耳静脉注射1000U/ml肝素1ml/kg，并建立静脉通道；
5、 用线结扎一侧颈总动脉远心端，用动脉夹夹住近心端，眼科剪在颈总动脉上作一V型切口，插入动脉插管，用线结扎固定；
6、 将动脉插管与生物信号处理采集系统压力换能器连接，松开动脉夹，描记正常血压。
7、 按照如下顺序从耳缘静脉给药，观察下列药物对血压的影响。
(1) 0.01%去甲肾上腺素0.2 ml/kg。 记录血压变化，恢复后给予下一药物；
(2) 0.01%肾上腺素0.2 ml/kg。 记录血压变化，恢复后给予下一药物；
(3) 0.005%异丙肾上腺素0.2 ml/kg。 记录血压变化。

【注意事项】 动脉导管用肝素生理盐水溶液充盈。

实验七 药物的利尿作用
【目的】 1、学习利尿药的实验作用方法；
2、观察利尿药对水、电解质排泄的影响。
【器材】导尿管，烧杯，50ml注射器1个，5ml注射器2个、兔解剖台，兔灌胃器，电子称
【药品】1%呋塞米、生理盐水
【动物】家兔。
【方法】
1、称重：取家兔一只，称重；
2、灌胃：给水负荷30ml/kg；
3、仰卧位固定；
4、观察正常尿量：观察5分钟，记录正常尿量；
5、给药：生理盐水组：耳缘静脉注射生理盐水0.5ml/kg；
呋塞米组：耳缘静脉注射1%呋塞米0.5ml/kg；
6、记录：观察并记录30分钟尿量（每5分钟的滴数）
【结果】将所观察的实验结果填入下表：
表7-1 呋塞米对家兔尿量的影响
组别 总滴数 每分钟滴数
生理盐水组
呋塞米组

实验八 巴比妥类药物的抗惊厥作用

【目的】 1.观察大剂量中枢兴奋药尼可刹米中毒表现——惊厥
2.了解巴比妥类药物的抗惊厥作用
【器材】 电子称、鼠笼、1ml注射器7个。
【药品】 1%苯巴比妥钠，5%尼可刹米，0.5%戊巴比妥钠
【动物】小鼠3只。
【方法】
1、 取体重相近小鼠3只，称重，分别编号1/2/3号
2、 1号腹腔注入生理盐水0.1ml/10g，15分钟后皮下注入5%尼可刹米；
3、 2号腹腔注入1%苯巴比妥钠0.1ml/10g，15分钟后皮下注入5%尼可刹米；
4、 3号腹腔注入生理盐水0.1ml/10g，15分钟后皮下注入5%尼可刹米，再腹腔注入0.5%戊巴比妥钠0.1ml/10g，观察惊厥和死亡情况。
【结果】将所观察的实验结果填入下表：
表8-1巴比妥类药物对尼可刹米所致惊厥作用的影响
组别 给药体积(ml/只) 是否有惊厥 死亡情况
生理盐水
苯巴比妥钠
戊巴比妥钠

实验九 药物的抗凝血作用

【目的】 
1.学习凝血时间的测定方法
2.观察几种药物对凝血时间的影响
【器材】秒表，毛细玻璃管，鼠笼，1ml注射器3个。
【药品】 2.5 %止血敏，1000U/ml肝素，生理盐水
【动物】小鼠3只。
【方法】
   1.分组：取小鼠6只，称重，标记，并分为3组；
2.给药：止血敏组——腹腔注射 2.5 %止血敏0.2ml/10g；
肝素组——腹腔1000U/ml注射肝素0.2ml/10g；
生理盐水组——腹腔注射生理盐水0.2ml/10g；
3.取血：左手固定小鼠，右手持毛细血管从小鼠眼眶内刺入，待血液注满玻璃管后，右手按住毛细玻璃管的另一端迅速拔出，平放桌上，并启动秒表；
4.观察：每隔30秒折断毛细玻璃管0.5-1cm，并轻轻向左右拉平，观察有无粘丝出现，记录凝血时间。
【结果】   将所观察的实验结果填入下表：
表9-1药物对小鼠凝血时间的影响
组别 动物数 凝血时间
生理盐水组
肝素组
止血敏组

实验十 阿司匹林对大鼠足趾肿胀模型的作用

【目的与原理】
大鼠足趾肿胀法是抗炎药物实验中最常见的急性非特异性炎症模型，也是筛选抗炎药物的经典方法。致炎剂鸡蛋清作为异体蛋白注入大鼠足趾皮下组织后，快速引起注射部位的急性炎症反应，出现红肿和痛阀降低，足趾体积明显再让你过大。本实验的目的是掌握炎性肿胀模型的制备以及观察阿司匹林的抗炎作用。
【器材】 电子称，鼠笼，记号笔，足趾容积测试仪，注射器
【药品】 2%阿司匹林，4%阿司匹林，生理盐水，10%鸡蛋清
【动物】大鼠，雌性，体重180g-200g,
【方法】
1.实验装置准备 组织容积测定仪连接完备，平稳摆放于适当位置，玻璃测量杯中盛适量蒸馏水，接上电源，先按“运行”，再按“调零”，待指示灯亮，可开始测定足趾体积。
2.大鼠足趾容积测定方法 常规抓握大鼠，用圆珠笔在大鼠右后肢踝关节处做一水平标记（骨标志），将标记线以下的足趾缓慢浸入玻璃测量杯中，直至标记线与水界面重叠，脚踩踏板，记录显示的体积量，作为给药前的对照值。
3.炎症模型制作 自大鼠右足掌心向踝关节方向进针，皮下注射10%新鲜鸡蛋清0.05-0.1ml，造成炎症性肿胀。
4.分组、给药及实验记录 将大鼠按体重随机分3组，每组6只。按上述方法测定给药前足趾体积后，阿司匹林小剂量组给予给予阿司匹林0.2g/kg，阿司匹林大剂量组给予给予阿司匹林0.4g/kg，对照组给予生理盐水；以上各组均灌胃给药（1ml/100g）。给药后30min，按上述方法制作炎症模型。在致炎后15、30、60、90min时测定右足趾容积并计算右足趾肿胀度：
肿胀度：致炎后容积—致炎前容积
5. 数据处理 各组数据汇总后，并计算各组肿胀度的均值和标准差，填入下表
表10-1阿司匹林对大鼠足趾肿胀的抗炎作用
组别 给药体积（ml） 基础容积（ml） 肿胀度（ml)
15min 30min 60min 90min
生理盐水组
阿司匹林0.2g/kg组
阿司匹林0.4g/kg组

【注意事项】
1.实验前用手术剪将大鼠右后肢踝关节及以下部位去毛，以便于标记和测定。去毛时要避免损伤动物皮肤。
2.踝关节标记线要清晰、持久，易于识别和定位，实验中不能改动。
3.在将大鼠足趾侵入时，尽量保证一次成功。动物挣扎、足趾浸入过多或过少、浸入速度过快，足趾碰测量杯壁等均可能影响测定结果。正式测定前应反复练习体会。
4.每次测定完后宜将大鼠足擦干。
5.同一人操作，可使操作的误差最小。