扶正祛邪方加减治疗失眠症的药效及其对脑组织内GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7表达的影响.pdf

2023年7 月第43卷第7 期Jul.2023Vol.43 No.7实验研究本文引用：刘艳霞，李雁.扶正祛邪方加减治疗失眠症的药效及其对脑组织内GABAAR1、5-H T 1A R、m G l u R 7 表达的影响 J.湖南中医药大学学报，2 0 2 3，43(7)：1149-1154.扶正祛邪方加减治疗失眠症的药效及其对脑组织内GABA AR1、5-H T 1A R、mG l u R 7 表达的影响湖南中医药大学学报Journal of Hunan University of Chinese Medicine1149刘艳霞,李雁*上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科，上海2 0 0 0 7 1【摘要】目的探究扶正祛邪方加减对氯苯丙氨酸（para-chlorophenylalanine，PC PA）失眠模型小鼠的镇静催眠作用及其对脑组织内-氨基丁酸A受体l(gamma-aminobutyric acid Areceptor subtype l，G A BA A R 1）5-羟色胺1A受体(5-hydrox-ytryptamine1Areceptor，5-H T 1A R）、代谢型谷氨酸受体7(metabotropic glutamatereceptor7，mG l u R 7）表达的影响。方法将50 只小鼠随机分为空白对照组、模型组、艾司唑仑组、高剂量组和低剂量组，连续灌胃给药7 d后，各组小鼠进行戊巴比妥钠协同睡眠实验和旷场试验的行为学测试，分别采用RT-qPCR和Westernblot法检测脑组织中GABAARl、5-H T 1A R、m G lu R 7 m R NA 和蛋白的表达以及mCluR7/GABAAR1的比值。结果与空白对照组比较，模型组小鼠睡眠潜伏期延长(P0.05)，睡眠时间缩短(P0.05),旷场试验中总的区域路程延长（P0.05)，中心区停留时间缩短（P0.05)，脑组织中GABAAR1、5-H T 1A R m R NA 和蛋白的表达均降低(P0.05),mGluR7mRNA和蛋白的表达升高(P0.05),mGluR7/GABAARl上升(P0.05)。与模型组比较，艾司唑仑组和高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短（P0.05)，睡眠时间延长(P0.05)，总的区域路程减少（P0.05)，中心区停留时间增加(P0.05），脑组织中GABAARl、5-H T 1A R m R NA 和蛋白的表达上升（P0.05），m G l u R 7 m R NA 和蛋白表达降低（P0.05）,m G l u R 7/GABAAR1下降(P0.05)。与艾司唑仑组比较，高剂量组、低剂量组小鼠睡眠潜伏期和总区域路程增加(P0.05)，睡眠持续时间和中心区停留时间减少(P0.05),GABAAR1.5-HT1ARmRNA和蛋白表达下降(P0.05)mGluR7mRNA和蛋白表达上升(P0.05)，mGluR7/GABAARl上升(P0.05)。与高剂量组比较，低剂量组小鼠睡眠潜伏期、总区域路程增加(P0.05)，睡眠持续时间、中心区停留时间减少（P0.05），G A BA A R 1、5-H T 1A R mR NA 和蛋白表达下降（P0.05）、mG l u R 7 mR NA 和蛋白表达上升（P0.05），mGluR7/GABAARl上升（P0.05。结论扶正祛邪方加减可以改善PCPA失眠模型小鼠的睡眠，有较好的镇静催眠作用，其机制可能是通过调节脑组织内GABAAR1、5-H T 1A R、m G lu R 7 水平发挥作用。【关键词】扶正祛邪方加减；失眠；氯苯丙氨酸；-氨基丁酸A受体1;5-羟色胺1A受体；代谢型谷氨酸受体7【中图分类号】R285.5【文献标志码 A【文章编号 doi:10.3969/j.issn.1674-070X.2023.07.001Efficacy of modified Fuzheng Quxie Formula in treating insomnia and itsinfluence on GABA ARl,5-HT1AR,and mGluR7 expressions in brain tissueLIU Yanxia,LI Yan*Department of Oncology,Municipal Chinese Medicine Hospital of Shanghai University of Chinese Medicine,Shanghai 200071,ChinaAbstract)Objective To explore the sedative and hypnotic effects of modified Fuzheng Quxie Formula(FZQXF)on insomniamodel mice induced by para-chlorophenylalanine(PCPA)and its influence on gamma aminobutyric acid A receptor subtype l(GABA AR1),5-hydroxytryptamine 1A receptor(5-HT1AR),and metabotropic glutamate receptor 7(mGluR7)expressions in braintissue.Methods Fifty mice were randomly divided into blank control group,model group,estazolam group,high-and low-dose【收稿日期 2 0 2 3-0 1-18【基金项目】国家自然科学基金面上项目（8 19 7 37 9 5,8 2 17 418 3）；上海申康医院发展中心临床三年行动计划资助项目（SHDC2020CR4052)。【第一作者 刘艳霞,女，硕士研究生,研究方向：中医药防治恶性肿瘤研究。【通信作者*李雁，男，博士，博士研究生导师，主任医师，E-mail:。1150modified FZQXF groups.After 7 d of continuous intragastric administration,the mice in each group were subjected to behavioraltests including pentobarbital sodium synergistic sleep experiment and open field experiment.Meanwhile,the mRNA and proteinexpressions of GABA ARl,5-HT1AR,and mGluR7 in brain tissue and the ratio of mGluR7/GABA ARl were determined byRT-qPCR and Western blot,respectively.Results Compared with blank control group,the mice in model group showed prolongedsleep latency(P0.05),shortened sleep time(P0.05),longer total regional distance in the open field experiment(P0.05),shorterresidence time in the central area(P0.05),lower mRNA and protein expressions of 5-HT1AR and GABA ARal in brain tissue(P0.05),higher mRNA and protein expressions of mGluR7(P0.05),and increased mGluR7/GABA AR1 ratio(P0.05).Compared withmodel group,the mice in estazolam,high-and low-dose modified FZQXF groups showed shortened sleep latency(P0.05),prolongedsleep time(P0.05),reduced total regional distance(P0.05),extended residence time in central area(P0.05),higher mRNA andprotein expressions of GABA ARl and 5-HT1AR in brain tissue(P0.05),lower mRNA and protein expressions of mGluR7(P0.05),and increased mGluR7/GABA ARl ratio(P0.05).Compared with estazolam group,the mice in high-and low-dose modifiedFZQXF groups showed prolonged sleep latency and total regional distance(P0.05),shortened sleep time and residence time incentral area(P0.05),lower mRNA and protein expressions of GABA ARl and 5-HTIAR,higher mRNA and protein expressionsof mGluR7(P0.05),and increased mGluR7/GABA ARl ratio(P0.05).Compared with high-dose modified FZQXF group,the micein low-dose modified FZQXF group showed longer sleep latency and total regional distance(P0.05),shorter sleep time andresidence time in central area(P0.05),lower mRNA and protein expressions of GABA ARl and 5-HT1AR,and increasedmGluR7/GABA AR1 ratio(P0.05).Conclusion Modified FZQXF can exert its sedative and hypnotic effects on PCPA-inducedinsomnia model mice,and its mechanism of sleeping-improving may be related to regulating the levels of GABA ARl,5-HT1ARand mGluR7 in brain tissue.Keywords modified Fuzheng Quxie Formula;insomnia;para-chlorophenylalanine;gamma-aminobutyric acid A receptorsubtype l;5-hydroxytryptamine 1A receptor;metabotropic glutamate receptor 7失眠是临床常见的身心疾病，全球发病率为10%50%,是多种疾病发生的危险因素,其发病年龄逐渐年轻化I-2。失眠患者多伴有睡眠异常的特征，如入睡困难、睡眠持续时间短、多梦易醒，醒后难以再次人睡等睡眠障碍，多伴有头晕头痛、乏力、易怒、健忘、注意力无法集中、焦虑等表现，长期失眠会影响患者的生活、工作和学习，引发焦虑抑郁状态、代谢性疾病及心血管疾病等 3-4。目前,现代医学治疗失眠以苯二氮草类镇静安眠药为主，短期效果明显，但长期服用不良反应较多，会产生耐药性，影响临床疗效和患者的身心健康5。近年来,中医从整体观念和辨证论治出发，在治疗失眠上取得较好的效果,且无成瘾性和耐药性,安全性高,是临床重要的治疗手段 6-7 。扶正驱邪法治疗失眠有良好的效果 8。扶正祛邪方加减是上海市名中医李雁教授临床上治疗失眠的经验方。本研究拟探讨扶正祛邪方加减对氯苯丙氨酸（para-chlorophenylalanine，PC PA）诱导失眠模型小鼠的药效及其作用机制，为临床诊疗提供实验依据。1材料1.1实验动物健康SPF级雄性C57小鼠50 只，体质量（2 0 2）,购于上海杰思捷实验动物有限公司，动物生产许可证号码：SCXK（沪)2 0 18-0 0 0 4，动物质量合格证湖南中医药大学学报http:/2023年第43卷编号：2 0 18 0 0 0 40 6 7 0 0 9，动物伦理审批号：2 0 2 2 0 46。动物饲养于上海市中医医院SPF级别实验室中，于叠夜12 h交替，室温为（2 12），相对湿度50%70%，自由饮水摄食，于清洁干燥的环境中适应性喂养1周。1.2药品及主要试剂扶正祛邪方组成：生黄芪30 g，生白术15g，茯苓15g,陈皮9 g，天冬15g，麦冬15g,北沙参15g，酸枣仁15g,五味子2 0 g，合欢皮2 0 g。以上中药均购买自上海市中医医院，加4倍量的水,浸泡30 min，大火加热至沸腾后转小火煎煮40 min。再加4倍量的水，大火加热至沸腾后转小火煎煮40 min。两次的药液混匀,浓缩为4.18 g/mL的水煎剂,置于4冰箱保存以备用。艾司唑仑片（四川大家制药有限公司,批号：H20170205)。PCPA（美国Sigma公司，批号：C6506）；戊巴比妥钠（北京中生瑞泰科技有限公司，批号：130 32 6)；-氨基丁酸受体Al(-aminobutyric acid Arecep-tor1,GABAAR1)抗体、代谢型谷氨酸受体7(metabotropic glutamate receptor 7,mGluR7)抗体（美国Affinity抗体公司，批号：DF8548、A F0 17 1）；5-羟色胺1A受体（5-hydroxytryptamine 1Areceptor,5-HT1AR)抗体（北京博奥森生物技术有限公司，批号：bs-1124R);GAPDH抗体（杭州贤至生物科技有限公司，批号：AB-P-R001);RNA提取液、逆转录试2023年第43卷剂盒、2 实时荧光定量PCR扩增预混液（武汉赛维尔生物科技有限公司，批号：G3013、G 3330、G 332 2）。1.3主要仪器小鼠自主活动测试仪（南京威美特科学仪器有限公司，型号：SPT-CM72ZZ-6);PCR扩增仪、化学发光凝胶成像系统、电泳仪（美国Bio-Rad公司，型号：CFX96、17 0 8 2 8 0、16 450 50)；全自动样品快速研磨仪（上海净信科技有限公司，型号：JXFSTPRP-48L）。2方法2.1分组、造模及给药方法C57雄性小鼠50 只，随机抽出10 只为空白对照组，其余40 只每天上午腹腔注射吐温-8 0 配制的PCPA混悬液（30 0 mg/kg），持续2 d,建立小鼠失眠模型9,空白对照组小鼠用等体积的生理盐水腹腔注射。在末次注射PCPA混悬液12 h后，小鼠昼夜节律消失，白天活动增加,对外界刺激异常敏感，易惊恐打斗，饮食量减少，饮水量明显增加，提示造模成功 0。造模成功后，根据随机数字表法将小鼠分为模型组、艾司唑仑组、低剂量组、高剂量组，每组10只。造模分组后第2 天,根据中药药理研究方法学叫中人日用量与动物临床等效剂量的比值计算中药给药剂量，高剂量组：生药量为2 6 1g，即0.7 8 4g/20g，浓度为1.56 8 g/mL；低剂量组为高剂量组的一半,即用药量为0.39 2 g/20g，浓度为0.7 8 4g/mL；艾司唑仑组按1mg/kg灌胃；空白对照组和模型组小鼠每日灌胃等体积的生理盐水。每天1次，连续7 d，给药体积均为 0.5 mL/20 g。2.2行为学检测2.2.1睡眠潜伏期及睡眠持续时间测定采用戊巴比妥钠协同睡眠法 12 ,在最后一次灌胃给药30 min后,各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(45 mg/kg),使小鼠进入睡眠状态。小鼠翻正反射消失1min以上即可认为小鼠进入睡眠状态，观察睡眠潜伏期（腹腔注射戊巴比妥钠后至翻正反射消失的时间)和睡眠持续时间（翻正反射消失至翻正反射恢复的总时间）。2.2.2旷场试验各组小鼠在连续灌胃的第6 天给药30 min后进行旷场试验 3,将小鼠放在自主活动仪中适应5min,用仪器记录各组小鼠6 min内的总区域路程、总区域停留时间。2.3标本采集末次给药2 4h后，快速断头将小鼠处死，保留脑组织，在冰上迅速剥离小鼠海马、下丘脑组织，快速存放于-8 0 冰箱备用。湖南中医药大学学报http:/2.6统计学分析采用SPSS26.0统计软件分析数据，计量资料用“x土s”表示，数据符合正态分布用独立样本Stu-dentst-test检测统计差异，数据不符合正态分布用Mann-WhitneyUtest进行统计分析。组间比较用方差分析，方差齐者用LSD检验，方差不齐者用Dun-nett-t检验,P0.05为差异有统计学意义。3结果3.1各组小鼠戊巴比妥钠协同睡眠实验比较腹腔注射戊巴比妥钠后，小鼠表现出不同程度的睡眠状态。与空白对照组比较,模型组小鼠睡眠潜11512.4RT-qPCR检测小鼠大脑皮质中GABAAR1、5-HT1AR、m G lu R 7 m R NA 表达水平取50 mg组织,Trizol法提取总RNA，根据逆转录试剂盒说明书以42 6 0 min,705m in 为反应条件逆转录为cDNA，后根据荧光定量PCR试剂盒说明书，配成2 0 L的反应体系，于PCR仪中以9510 m in;9 515s;6 0 30 s 共40 个循环的反应条件进行扩增。结果采用2-AA相对定量法计算，引物由上海生工生物工程有限公司合成。引物序列GABAAR1：正向5-AGTGCCAGAAATTCC-CTCCCAAAG-3,反向 5-CAATCAGAGCCGAGAA-CACGAAGG-3;5-HT1AR:正向5-AAGGTGGAAAAGAAGGGAGC-3,反向5-AATAACTGGGTTGAGCAGGG-3;mGluR7:正向 5-ATTGGGCAGTGGACAGATGA-3;反向 5-GGTATCCATCACAGGGCTCA-3;-actin:正向 5-AGGGAAATCGTGCGTGAC-3,反向5-ATACCCAGGAAGGAAGGCT-3。2.5Western blot 法检测小鼠海马组织GABAARl、5-HT1AR蛋白表达量取50 mg组织,研磨后提取蛋白质,用BCA法进行蛋白质浓度定量，煮8 min使蛋白质变性。蛋白质上样质量为30 g，以分离胶10 0 V、浓缩胶8 0 V的恒压条件进行电泳,以2 0 0 mA、6 0 m in 的恒流条件进行PVDF转膜；转完膜后用5%脱脂奶粉于摇床上缓慢摇匀封闭12 0 min，根据Marker指示裁剪条带，加人一抗(GABAAR1、5-H T 1A R、G A PD H,1:1000)4孵育过夜;TBST洗涤30 min(10min/次)，加人二抗(HRP标记山羊抗兔，1:10 0 0)室温孵育120 min,TBST洗涤30 min(10 min/次）,采用ECL法显影检测目的条带，用凝胶成像系统分析目标蛋白灰度值,与内参比较作为目标蛋白相对表达量。1152伏期显著延长(P0.01),睡眠持续时间显著缩短(P0.01)；与模型组比较，艾司唑仑组、高剂量组、低剂量组睡眠潜伏期缩短（P0.05），睡眠持续时间延长(P0.05)；与艾司唑仑组比较,高剂量组、低剂量组睡眠潜伏期延长(P0.05)，睡眠持续时间缩短(P0.05)；与高剂量组比较，低剂量组睡眠潜伏期延长(P0.05），睡眠持续时间缩短（P0.05）。详见图1。*4A/6-*420模型组空白对照组图1扶正祛邪方加减对小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间的影响(xs,n=10)注：与空白对照组比较，P0.01；与模型组比较，*P0.05,*P0.01；与艾司唑仑组比较，AP0.05，A A P 0.0 1；与高剂量组比较，P0.05。3.2各组小鼠旷场试验比较与空白对照组比较，模型组小鼠总区域路程显著增加(P0.01），中心区停留时间显著降低（P0.01)；与模型组比较，艾司唑仑组、高剂量组、低剂量组总区域路程减少(P0.05),中心区停留时间增加(P0.05)；与艾司唑仑组比较，高剂量组、低剂量组总区域路程增加(P0.05)，中心区停留时间减少(P0.05)；与高剂量组比较，低剂量组总区域路程增加(P0.05)，中心区停留时间减少(P0.05)。详见湖南中医药大学学报http:/80760-40-20-0低剂量组模型组空白对照组2023年第43卷AR1、5-H T 1A R m R NA 表达降低(P0.05),mGluR7mRNA表达升高(P0.05）,m G lu R 7/G A BA A R 1上升（P0.05）；与模型组比较,艾司唑仑组、高剂量组、低剂量组GABAAR1、5-H T 1A R m R NA 表达上升(P0.05）,m G l u R 7 m R NA 表达下降（P0.05),mGluR7/GABAAR1下降(P0.05);与艾司唑仑组比较，高剂量组、低剂量组GABAAR1、5-H T 1A RmRNA表达下降（P0.05）,m G lu R 7 m R NA 表达上升(P0.05),mGluR7/GABA AR1 上升(P0.05);*与高剂量组比较,低剂量组GABAAR1、5-H T 1A R*4口mRNA表达下降（P0.05）,m G lu R 7 m R NA 表达上升(P0.05),mGluR7/GABA AR1 上升(P0.05)。详见图3。利2.57低剂量组2.01.5-1.0-0.5-0.0空白对照组艾司唑仑组2.572.01.5-1.0-0.5-0.0空白对照组艾司唑仑组2.5-*2.0-*1.5-*公口1.0-0.5-0.0高剂量组低剂量组#*4A口*模型组低剂量组*O#模型组高剂量组低剂量组空白对照组艾司唑仑组2.571.5-1.00.5-0.0*口*低剂量组图3扶正祛邪方加减对小鼠脑组织中GABAAR1、图2。5-HT1AR、m G lu R 7 m R NA 表达的影响(xs,n=10)*P0.01,*P0.001；与艾司唑仑组比较，AP0.05，A P 0.0 1；与15 000710000-50000-空白对照组507*公口*注：与空白对照组比较，P0.05，P 0.0 1;与模型组比较，*P0.05，*40-*30*4A口10-0空白对照组艾司唑仑组高剂量组比较，P0.05。3.4各组小鼠脑组织中GABAAR1、5-H T 1A R、mGluR7蛋白相对表达量的比较与空白对照组比较,模型组小鼠脑组织中GABAAR1、5-H T 1A R 蛋白表达降低（P0.05）,m G lu R 7图2 扶正祛邪方加减对小鼠自主活动的影响(xs,n=10)注：与空白对照组比较，P0.01；与模型组比较，*P0.05,*P0.01,*P0.001;与艾司唑仑组比较，AP0.05,AAP0.01;与高剂量组比较,P0.05。3.3各组小鼠脑组织中GABAAR1、5-H T 1A R、mGluR7 mRNA的相对表达量比较与空白对照组比较,模型组小鼠脑组织中GABA蛋白表达升高(P0.05）,m G lu R 7/G A BA A R 1升高(P0.05)；与模型组比较,艾司唑仑组、高剂量组、低剂量组GABAAR1、5-H T 1A R 蛋白表达升高（P0.05）,m G lu R 7 蛋白表达降低(P0.05),mGluR7/GA-BAAR1降低（P0.05)；与艾司唑仑组比较,高剂量组、低剂量组GABAAR1、5-H T 1A R 蛋白表达降低（P0.05），mG l u R 7 蛋白表达升高（P0.05），2023年第43卷2.5-2.01.51.0-0.50.0模型组高剂量组低剂量组空白对照组艾司唑仑组湖南中医药大学学报http:/mGluR7GABA AR15-HT1ARGAPDH2.5-2.01.5-*1.00.50.0模型组高剂量组低剂量组空白对照组艾司唑仓组1153100kDa52kDa46kDa36kDaABCDE2.52.0-*口2.52.0*1.5-#1.00.5-0.0空白对照组艾司唑仑组#*A口1.5-1.00.50.0模型组高剂量组低剂量组*A口模型组低剂量组空白对照组图4扶正祛邪方加减对小鼠脑组织中GABAARl、5-H T 1A R、mG l u R 7 蛋白表达的影响(xs,n=10)注：与空白对照组比较，P0.05，P0.0 1；与模型组比较，*P0.05,*P0.01,*P0.001；与艾司唑仑组比较，AP0.05，4A P0.0 1；与高剂量组比较,P0.05。mGluR7/GABAAR1升高（P0.05）；与高剂量组比较，低剂量组GABAAR1、5-H T 1A R 蛋白表达降低(P0.05),mGluR7蛋白表达升高(P0.05),mGluR7/GABAAR1升高(P0.05)。详见图4。4讨论失眠在中医学中属“不”范畴，其病机在于阳不入于阴,卫不人于营，阴阳失和，阳盛阴衰 4。阳指太阳、少阳和阳明三阳，阴为太阴、少阴和厥阴三阴，阴阳正常出人交接的基础在于三阴三阳开阖枢功能的正常。开阖枢理论源于黄帝内经，是三阴三阳阴阳运动的形式 15,若开阖枢功能失调，阴阳无法正常出人交接，则会导致失眠的发生。根据睡眠觉醒周期规律并结合“三阴三阳开阖枢”时辰理论，从阴阳气机的动态变化过程中认识失眠发生的机制，在失眠的治疗上取得了良好的效果 16-17。太阴病失眠是常见的失眠类型,其病机多与阴虚血少,阳气不能潜藏于内有关。太阴归属脾、肺二脏,主司气、血、阴津的化生。太阴脾脏气机为开，主升清，在阳气的推动下，运化、布散水谷精微，脾脏功能正常，则阳气得以收藏，人可睡眠正常。若太阴受到浊之气的影响而导致清阳受阻，则气机运行受阻发为不。脾主水谷之气，肺司呼吸之气，肺、脾与营卫之气的化生和运行密切相关，脾肺二脏功能失常则引发失眠。扶正祛邪方加减中重用黄芪以增强补气生血、养心安神之功，白术、茯苓、陈皮相配以益气健脾、化湿祛痰，天冬、麦冬、北沙参合用，滋补肺阴以降肺气，酸枣仁、五味子、合欢皮合用，酸甘敛阴，使阴引而下，阳合于阴。诸药合用,健脾益肺以开太阴,调和阴阳以助睡眠。旷场试验中，总运动距离、中心区域停留时间可以反映动物的紧张、焦虑程度 18 。本实验结果表明，造模后模型组小鼠睡眠潜伏期延长、睡眠持续时间缩短、总的区域路程增加、中心区停留时间减少，表明小鼠兴奋性增高，具有明显的紧张、焦虑行为。给药后高剂量组、低剂量组以及艾司唑仑组小鼠睡眠潜伏期缩短、睡眠时间延长、总的区域路程减少、中心区停留时间延长，说明药物可以缓解小鼠烦躁焦虑情绪，改善睡眠。研究发现,大脑内的-氨基丁酸、5-羟色胺、谷氨酸、多巴胺、褪黑素等多种神经递质与失眠的发生和进展密切相关9。谷氨酸是中枢神经系统中重要的兴奋性神经递质，失眠时会伴随大量谷氨酸释放 2 0 。mGluR7属于代谢型谷氨酸受体,可以调节谷氨酸以及-氨基丁酸神经递质的释放，调节睡眠过程 2 。-氨基丁酸是谷氨酸脱羧后形成的产物,对神经元兴奋有抑制作用 2 1。谷氨酸与-氨基丁酸比值的动态失衡与失眠的发生密切相关 2 。有研究发现，上调GABAAR水平,可以改善大鼠失眠症状 2 3。5-HT1AR是5-羟色胺家族受体中的研究热点，与调节焦虑及睡眠有关 2 4。有研究证实，接受大剂量5-HT1A受体激动剂注射的大鼠，脑组织中5-羟色胺的释放减少,觉醒增加 2 5。本研究进一步对失眠小鼠脑组织进行检测,结果显示,PCPA造模成功后，小鼠脑组织中GABAAR1和5-HT1AR的含量降低，mGluR7含量升高，脑组织中mCluR7/GABAAR1的比值上升，表明PCPA诱导了小鼠脑内单胺类神经递质水平的失衡，引发小鼠紧张焦虑、失眠状态；1154艾司唑仑和扶正祛邪方加减治疗可以升高脑组织中GABAAR1和5-HT1AR含量,下调mGluR7水平,降低mGluR7/GABAARl的比值,逆转脑组织中GABA AR1 和mGluR7的动态紊乱,维持兴奋性和抑制性神经递质之间的平衡，缓解小鼠紧张焦虑、失眠状态。综上所述，扶正祛邪方加减可以缩短PCPA失眠模型小鼠的睡眠潜伏期、延长睡眠时间，有镇静催眠的作用,其机制可能是通过调节脑内GABAAR1、5-HT1AR、m G lu R 7 神经递质受体发挥作用。然而本实验只研究了脑组织中部分单胺类神经递质受体，其他神经递质蛋白表达以及活化情况有待后续进行深入研究。参考文献1郝雅楠，吴晓青中青年失眠的流行病学及发病机制研究进展 中国疗养医学，2 0 2 3,32(5)：48 1-48 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