标本采集方法.doc

检验标本的采集
　　一、血液标本的采集
　　血液标本可来自于静脉、动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本，静脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采血主要用于儿童，血气分析多使用动脉血。
　　（一） 静脉采血法
　　1.采血步骤
采血前核对病人姓名、性别、年龄、编号及检验项目等，按试验项目要求，准备好相应的容器，如空白试管、抗凝管或促凝管等。病人应取坐位或卧位，采血部位通常是前臂肘窝的正中静脉。若用普通采血法，采血后应取下针头，将血液沿管壁缓慢注入试管内。 
2.注意事项
　　（1） 防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清洁；淤血时间过长；穿刺不顺利，组织损伤过多；抽血速度太快；血液注入容器时未取下针头或注入速度过快产生大量泡沫；震荡过于剧烈等。若用普通注射器采血后，未取针头直接将血注入真空管内，也易造成溶血。体内溶血属合格标本，但应在报告单上注明。
　　（2） 避免充血和血液浓缩：采血时应动作迅速，尽可能缩短止血带使用时间。用止血带压迫时间最好不超过半分钟，否则将使生化结果升高或下降。
　　（3） 若病人正在进行静脉输液，不宜在输液同侧手臂采血；若女性病人做了乳腺切除术，应在手术对侧手臂采血。
　　（4） 采血的体位：体位改变可引起一系列的生理变化，使血液中的许多指标发生改变。一般采取直立位采血，其二标本的测定值比卧位高5 ％～15 ％。因此，采血时要注意保持正确的体位（坐位或卧位），以及体位的一致性。
　　（5） 采血时只能向外抽，决不能向静脉内推，以免注入空气，形成气栓而造成严重后果。
　　（6） 很多生化成分受膳食影响，因此，采血前要确认病人是否空腹。
　　（二） 动脉采血法
　　肱动脉、股动脉、桡动脉以及其它任何部位的动脉都可以作为采血点，但多选择肱动脉和桡动脉。在摸到明显搏动处，按常规消毒，左手固定搏动处，右手持注射器，针头成60°角刺入，血液将自动进入注射器内。采血注意事项见血气分析部分。
　　（三） 真空采血法
　　双向针的一端在持针器的帮助下刺入静脉，另一端插入真空试管内，血液在负压作用下自动流入试管内。由于在完全封闭状态下采血，避免了血液外溢引起的污染，并有利于标本的转运和保存。标准真空采血管采用国际通用的头盖和标签颜色显示采血管内添加剂种类和试验用途。可根据需要选择相应的盛血试管。
　　1.普通血清管
　　红色头盖，采血管内不含添加剂，用于常规血清生化、血库和血清学相关检验。
　　2.快速血清管
　　橘红色头盖，采血管内有促凝剂，可激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变为不可溶的纤维蛋白多聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块。快速血清管可在5 分钟内使采集的血液凝固，适用于急诊血清生化试验。
　　3.惰性分离胶促凝管
　　金黄头盖，采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶能够将血液中的液体成分（血清或血浆） 和固体成分（红细胞、白细胞、血小板、纤维蛋白等）彻底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本在48 小时内保持稳定。促凝剂可快速激活凝血机制，加速凝血过程，适用于急诊血清生化试验。
　　4.肝素抗凝管
　　绿色头盖，采血管内添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验、血气分析、红细胞压积试验、血沉及普通生化测定，不适于做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集，不能用于白细胞计数。因其可使血片染色后背景呈淡蓝色，故也不适于白细胞分类。
　　5.血浆分离管
　　浅绿色头盖，在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂，可达到快速分离血浆的目的，是电解质检测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和IC U 等急诊血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在冷藏状态下保持48 小时稳定。
　　6.EDTA 抗凝管
　　紫色头盖，乙二胺四乙酸（EDTA ，分子量292） 及其盐是一种氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液标本中的钙离子。螯合钙或将钙从反应位点移去将阻滞和终止内源性或外源性凝血过程，从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验，不适用于凝血试验及血小板功能检查，亦不适用于钙离子、钾离子、钠离子、铁离子、碱性磷酸酶、肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR 试验。
　　7.枸橼酸钠凝血试验管
　　浅蓝头盖，枸橼酸钠主要通过与血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血实验，抗凝剂与血液的比例是1∶9 .
　　8.枸橼酸钠血沉试验管
　　黑色头盖，血沉试验要求的构橼酸钠浓度是3.2 ％ （相当于0.109 mol／L），抗凝剂与血液的比例为1∶4 .
　　二、尿液标本的采集
　　（一） 采集方法
　　尿液标本有随机新鲜尿、定时尿及24 小时尿，根据检查项目选择标本的采集类型。定量生化分析多收集24 小时尿液，24 小时尿标本采集方法如下：
　　嘱病人在早晨8 时排尿弃去，以后每次排尿均收集于一大容器内，至次日早晨8 时最后一次尿亦收集于容器内。测量并记录24 小时尿液总量，然后混匀尿液，取适量尿液送检。
　　（二） 注意事项
　　收集尿液标本的容器必须清洁干燥， 最好是一次性使用的容器。若容器反复使用，则须用洗涤液和自来水清洗， 再用蒸馏水冲洗。尿标本要防止混入月经血、阴道分泌物、精液、前列腺液、粪便等异物。尿标本收集后应12 时内送检，以免细菌作用和化学成分分解。若不能及时检验（如收集24 小时尿液），将标本置冰箱保存，若加入防腐剂，保存效果更佳。
　　三、粪便标本采集
　　标本的收集、存放与运送的得当与否，直接关系到检验结果的准确性。
　　应采取新鲜粪便，盛于洁净、干燥无吸水性的有盖容器内，不得混有尿液、水或其他物质，以免破坏有形成分，使病原菌死亡和污染腐生性原虫、真菌孢子、植物种子、花粉易混淆检验结果。
　　采集标本时应用干净竹签选取含有粘液、脓血等病变成分的粪便；外观无异常的粪便须从表面、深处及粪端多处取材，其量至少为大拇指末段大小（约5g）。
　　标本采集后一般情况应于1h 内检查完毕，否则可因p H 及消化酶等影响导致有形成分破坏分解。查痢疾阿米巴滋养体时应于排便后立即送检。从脓血和稀软部分取材，寒冷季节标本传送及检查时均需保温。
　　检查日本血吸虫卵时应取粘液、脓血部分，孵化毛蚴时至少留取30g 粪便，且须尽快处理。
　　检查蛲虫卵须用透明薄膜拭子于晚12 时或清晨排便前自肛门周围皱襞处拭取并立即镜检。
　　找寄生虫虫体及做虫卵计数时应采集24h 粪便，前者应从全部粪便中仔细搜查或过筛，然后鉴别其种属；后者应混匀后检查。
　　对某些寄生虫及虫卵的初步筛选检验，应采取三送三检。因为许多肠道原虫和某些蠕虫卵都有周期性排出现象。
　　隐血试验，应连续检查3 天，选取外表及内层粪便，应迅速进行检查，以免因长时间放置使隐血反应的敏感度降低。
　　粪胆原定量检查应连续收集3 天的粪便，每天将粪便混匀称重后取出约20g 送检。查胆汁成分的粪便标本不应在室温中长时间放置，以免阳性率减低。
　　脂肪定量检查时，应先食定量脂肪食，每天进食脂肪50 ～150g ，连续6 天。从第3天起，收集72h 粪便，也可定时口服色素（刚果红），作为留取粪便的指示剂，将收集的粪便混合称量，从中取出60g 左右送检。简易法为在正常膳食情况下，收集24h 的全部粪便，混合称量，从其中取出约60g 送检，测脂肪含量。
　　细菌检验用标本应全部用无菌操作收集，立即送检。无粪便排出而又必须检查时，可经肛门指诊或采便管拭取标本，灌肠或服油类泻剂的粪便常因过稀且混有油滴等而不适于做检查标本。
　　四、分泌物的标本采集
　　1.取材所用消毒的刮板，吸管或棉拭子必须清洁干燥，不粘有任何化学药品或润滑剂。
　　2.根据不同的检查目的可自不同部位取材。一般采用盐水浸湿的棉拭子自阴道深部或阴道后部、宫颈管口、尿道等处取材，制备成生理盐水液。
　　五、特殊标本的采集
　　（一） 脑脊液的采集
正常脑脊液为无色、清亮水样液体，当脑组织和脑膜有病变，如感染、外伤或肿瘤时，可使脑脊液（cerebrospinal fluid ，CSF） 发生变化，主要反映在颜色、透明度、细胞及各种化学成分的改变。脑脊液标本的采集由医生进行。脑脊液的穿刺部位较多，有腰椎穿刺、小脑延髓池穿刺，婴儿时期的前囟门作侧脑室穿刺等。因腰椎穿刺简单易行且危险性小，最为常用。将脑脊液标本收集于三支无菌试管中，第1 管作细菌检查，第2 管作生化检查，第3 管作细胞计数。脑脊液标本应尽量避免凝固和混入血液，标本采集后要立即送检，以免因标本放置时间过长使其成分变化，如葡萄糖分解，使葡萄糖含量降低。 
（二） 浆膜腔积液的采集
　　正常情况下，人体胸腔、腹腔、心包膜等有少量液体，它们主要起着润滑浆膜的作用，当浆膜发生病变时，如炎症、循环障碍、恶性肿瘤浸润等，浆膜腔液产生增多并积聚在浆膜腔内，称为浆膜腔积液。检测浆膜腔积液的某些化学成分，如蛋白质、葡萄糖、酶及肿瘤标志物等，有助于了解浆膜腔积液的性质和病因。一般由临床医生用浆膜腔穿刺术获得标本。
　　六、临床微生物学检验标本的采集
　　※脓液及创伤感染标本的采集
　　1.首先用无菌生理盐水拭净病灶表面的污染杂菌。
　　2.对已破溃脓肿一般以无菌棉拭子采取脓液及病灶深部的分泌物， 而瘘管则以无菌方法采取组织碎片，放入无菌试管中送检。
　　3.对未破溃脓肿最好用2.5 ％～3 ％碘酊和75 ％ 酒精消毒患部皮肤后，以无菌注射器抽取脓汁及分泌物，也可于切开排脓时，以无菌棉拭采取。
　　4.有时也可将沾有脓汁的最内层敷料放入无菌平皿内送检。
　　5.对放线菌的标本， 常用无菌棉拭挤压瘘管，选取流出脓汁中的“硫磺样颗粒”盛于试管内送检，也可将灭菌纱布塞入瘘管内。次日取出送检。
　　※血液及骨髓标本的采集
　　1.将患者拟采血部位放平，扎以止血带，选好静脉穿刺点，以皮点为中心用2.5 ％～3 ％碘酊从内向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脱碘。消毒范围不得过小。
　　2.以无菌手续由静脉取血5 ml ，立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。
　　※尿液标本的采集
　　采集尿标本必须防止杂菌污染，严格无菌操作，一般多采集中段尿。送检标本以晨
　　起第一次尿液为佳，采集后立即送检，（泌尿系感染大多病原菌，于室温放置时间较久，即可增殖）并均应在用药之前培养。
　　1.中段尿采集方法
　　（1） 女性采样前应先用肥皂水清洗，再用0.1 ％高锰酸钾水溶液冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿，留取中段尿10 ml 左右于无菌容器内，立即送检。
　　（2） 男性须将包皮翻开冲洗，然后采集中段尿。
　　（3） 儿童多数情况下仅冲洗外阴是不够的，故采集标本较为困难，如尿内细菌明显增多，可高度怀疑尿路感染。
　　2.肾盂尿采集法
　　为确定菌尿是否来自肾脏，可用导尿管采集肾盂尿，充分冲洗膀胱，以最后一次冲洗尿作为对照，尔后用导尿管插入输尿管，分别标记左右两侧收集3 次尿，如输尿管菌数比对照尿菌数多或第3 次比第1 次多，该菌尿可能来自肾脏；反之，第1 次尿菌数多于第3 次尿菌数，则可能来自膀胱。该方法一般请泌尿科医师协助进行。
　　3.膀胱穿刺采集法
　　采集中段尿完全避免污染是很困难的培养结果与病情不符时，可采用耻骨上膀胱穿
　　刺采集尿液。此法用于厌氧菌培养或留尿困难婴幼儿。
　　4.导尿法
　　采取导尿管留尿是一种较好的无菌采集方法，取10 ～15 ml 于灭菌容器内送检。
　　※粪便标本的采集
　　1.选取有脓血、粘液部分的粪便2 ～3g ，液体粪便则取絮状物，装于灭菌的蜡纸盒中送检。
　　2.在无法获得粪便的情况下，可用直肠拭子插入肛门4 ～5cm 处，取直肠表面的粘液，装于无菌试管或保存液中送检。
　　※上呼吸道标本的采集
　　1.拟检查白喉棒状杆菌采集标本时， 应使患者对光而坐，头部上仰口张大，用压舌板轻轻压舌根，直接用棉拭子擦拭病人咽、鼻粘膜、伪膜边缘部分或组织深层的分泌物作直接涂片和分离培养。若无局部病变或作带菌者检查则应于咽部或扁桃体上擦拭。
　　2.拟检查百日咳鲍特菌或脑膜炎奈瑟菌时，应自鼻咽部采集标本。即用无菌的鼻咽拭子（一端弯曲的金属棉拭）由口腔进入伸向鼻咽部，到达咽因后壁涂擦取标本，对患百日咳患儿作标本培养时可采用咳碟法。
　　3.拟检查麻风分枝杆菌时， 可采取鼻粘膜标本。即将无菌棉拭子用力擦拭鼻中隔部，直至微有出血为止。
　　※痰液及下呼吸道分泌物标本的采集
　　1.标本在采集前，首先让病人用清水漱口数次，以除去口腔内大量杂菌，让患者用力自气管深部咳出痰液吐至无菌的广口瓶内或小纸盒内。
　　2.若病人痰量较少，需要检查痰中结核杆菌时，则应收集24 小时痰液。
　　3.气管洗涤液：取8 ～9 号消毒导管，从鼻腔插入气管内， 缓慢注入灭菌蒸馏水5 ml ，取出导管。留取病人在3 小时内咳出的痰液，放入灭菌瓶内送检，本法可在清晨空腹时进行。
　　※鼻、咽、眼、耳拭子标本采集
　　1.拟检查白喉杆菌采集标本时， 应使患者对光而坐，头部上仰口张大，用压舌板轻轻压舌根，直接用棉拭子擦拭病人咽、鼻粘膜、伪膜边缘部分或组织深层的分泌物作直接涂片和分离培养。若无局部病变或作带菌者检查则应于咽部或扁桃体上擦拭。
　　2.拟检查百日咳杆菌或脑膜炎奈瑟菌时，应自鼻咽部采集标本。即用无菌的鼻咽拭子（一端弯曲的金属棉拭） 由口腔进入伸向鼻咽部，到达咽后壁涂擦取标本，对患百日咳患儿作标本培养时可采用咳碟法。
　　3.眼、耳道疖肿或化脓性疾病通常以无菌棉拭子直接采取分泌物送检即可。
　　标本的处理
　　标本处理不当将可能引起比分析更大的误差。因此，应根据分析目的选择合适的抗凝剂、防腐剂和处理方法。
　　一、抗凝剂
　　应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固， 称为抗凝。阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂（anticoagulant）。对抗凝剂的一般要求是用量少、溶解度大、不影响测定。生化检验常用的抗凝剂有以下几种：
　　1.肝素
　　是一种含有硫酸基团的粘多糖，其抗凝机理主要是对抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集。肝素抗凝血常用于血气分析和部分生化项目的测定，使用1.0g／L 的肝素溶液0.5 ml 可抗凝5 ml 血液。
　　2.草酸钾－氟化钠
　　草酸钾可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。草酸钾溶解度大，抗凝作用强。氟离子能结合钙而抗凝，但抗凝效果较弱。氟离子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解，若未加氟化钠，血标本中葡萄糖含量将以每小时6 ％的速度下降。而在氟化钠的存在下，血糖浓度在25 ℃ 可稳定24 小时，4 ℃ 可稳定48 小时。因此，草酸钾－氟化钠是血糖测定标本常使用的抗凝剂。
　　二、防腐剂
　　尿液检验最好留取新鲜标本及时检查，否则尿液生长细菌，使尿液中的化学成分发生变化。在留取24 小时或12 小时尿液时，尿液标本应置冰箱保存或加入防腐剂（antiseptic），常用的防腐剂有：
　　1.浓盐酸
　　盐酸使尿液保持酸性，阻止细菌繁殖， 同时防止一些化学物质因尿液碱化而分解，通常用量为0.5 ～1.0 ml 浓盐酸／100 ml 尿液，适用于24 小时尿儿茶酚胺、秀草扁桃酸（V M A）、17 －羟皮质类固醇和17 －酮类固醇等定量测定。
　　2.甲苯
　　甲苯可在尿液表面形成薄膜，防止细菌繁殖，用量1.0 ～2.0 ml 甲苯／100 ml 尿液，适用于尿肌酐、尿糖、蛋白质、丙酮等生化项目的测定。
　　3.冰醋酸
　　用量5 ～10 ml 冰醋酸／24 小时尿液，适用于24 小时尿醛固酮测定。
　　4.麝香草酚
　　可抑制细菌生长，用量为0.lg 麝香草酚／100 ml 尿液。用10 ％ 的麝香草酚异丙醇溶液可增加麝香草酚的溶解量，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿钾、钠、钙、氨基酸、糖、尿胆原、胆红素等测定。
　　标本的分离、储存和转运
　　血液标本采集后应及时分离血清或血浆，否则可发生红细胞与血清之间成分的相互转移，或细胞中的某些酶分解待测物等，而影响检验结果。例如，血清无机磷可由于红细胞内有机磷酸酯被磷酸酯酶的水解而增加；血清中葡萄糖可因红细胞内糖酵解酶的分解作用而降低，此外，钠存在于红细胞与血清中之比为1∶2 ；钾在血清和红细胞中之比为1∶20 ；钙在红细胞中极少， 几乎全部在血清中。因此，血清钠、钾、钙测定时，需注意及时分离标本，若不能立刻分离血清或血浆，应将标本放置于室温或37 ℃水浴箱内，不能将血液标本直接放入4 ℃ 冰箱， 以免发生溶血。对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红素血，应在检验报告上注明，供医生参考。尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心，取上清液进行分析。 
　　分离后的标本若不能及时检测或需保留以备复查时，一般应放于4 ℃ 冰箱，某些检测项目的标本存放于－20 ℃冰箱更稳定。标本存放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。需注意的是，某些检测指标如乳酸脱氢酶的标本应存放于室温，置4 ℃ 反而不稳定。
　　标本采集后应尽快送实验室分析，标本管道传递系统可加快标本传递速度和避免标本的错误传递。若标本不能及时转运到实验室或欲将标本送到上级部门或检测中心进行分析时，应将标本装入试管密封，再装入乙烯塑料袋，置冰瓶或冷藏箱内运输，运送过程中应避免剧烈震荡。
　　要视所有标本为传染品，对“高危” 标本，如乙肝病人标本、艾滋病病人标本等，要注明标识；急症或危重病人标本要特别注明。严禁标本直接用口吸取、接触皮肤或污染器皿的外部和实验台。标本用后均要做消毒处理，盛标本的器皿要消毒处理或毁型、焚烧。