微生物标本采集运送.doc

ABCD人民医院检验科 程序文件
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版本/修订号：A/0
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生效日期：20060808
第 4 页 共16 页

微生物标本采集运送
标准操作规程

编制： 范小春 杨 峰
审核： 张连垂
批准： 侯 波

生效日期：2012年10月01日
沭阳县仁慈医院检验科

沭阳县仁慈医院检验科
目 录
序号
主 题 内 容
代 号
页 号
1
尿液标本采集和运送
SYXRCYY-JYK-SOP-WSW-01

2
血培养标本采集、运送与报告
SYXRCYY -JYK-SOP-WSW-02

3
痰标本采集与运送标本
SYXRCYY -JYK-SOP-WSW-03

4
手术部位感染标本采集及运送
SYXRCYY -JYK-SOP-WSW-04

5
微生物标本运送标准操作规程
SYXRCYY-JYK-SOP-WSW-05

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沭阳县仁慈医院检验科

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微生物标本采集运送
标准操作规程
尿液标本采集和运送
标准操作规程
编号SYXRCYY -JYK-SOP-WSW-01
版本：A/0

尿液标本采集和运送
标准操作规程
一、 采集时机
宜为抗菌药物使用之前的清晨第一次尿液。
二、 采集方法
（一） 清洁中段尿
1． 女性：采样前用肥皂水或0.1%的高锰酸钾溶液等冲洗外阴，用手指分开阴唇，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10~20ml于无菌容器内。
2． 男性：采样前用肥皂水或0.05%~0.1%的聚维酮碘（碘伏）溶液等消毒液清洗尿道口，擦干后上翻包皮，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10~20ml于无菌容器内。
（二） 趾骨上膀胱穿刺
主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿、脊柱损伤患者的尿液采集。先用0.25%的聚维酮碘溶液等消毒液消毒穿刺部位皮肤，然后使用无菌注射器直接从趾骨联合与脐连线上高于趾骨联合2cm处刺入膀胱吸取尿液10~20ml于无菌容器内。
（三） 导尿管尿
1． 直接导尿法：使用0.05%~0.1%聚维酮碘溶液等消毒剂消毒会阴部，用导尿管直接经尿道插入膀胱，先弃其前段尿液约15ml，再留取中段尿10~20ml于无菌容器内。
2． 留取导尿管法：医院内尿路感染中，临床最常用此法。采集前先夹住导尿管，采集时则松管弃其前段尿液，使用0.25%~0.5%的聚维酮碘溶液等消毒剂消毒导尿管的采样部位，使用无菌注射器斜刺入导尿管（从采样口或靠近尿道的导尿管管壁）抽取10~20ml尿液于无菌容器内。
3． 回肠造口导尿管法：摘除导管，弃去里面的尿液，先用0.05%~0.1%的聚维酮碘溶液等消毒剂消毒吻合口，再将导尿管插入到清洁的吻合口，直到筋膜的深部采集10~20ml尿液于无菌容器内。
（四） 小儿收集包
对于无自控能力的小儿可应用收集包采集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用趾骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复检。
三、 标本运送
标本采集后应及时送检并接种，室温下保存时间不应超过2h（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存）。如果不能及时运送或接种，应4℃冷藏，但保存时间也不应超过8h。
四、 注意事项
1． 不应从集尿袋中采集尿液。
2． 尿液中不应加防腐剂或消毒剂。
3． 若尿液培养前患者曾使用抗菌药物，应反复多次送检。
4． 多次采集或24h尿不应用于尿液培养。
5． 除非进行流行病学调查，不应对长期留置导尿管患者常规进行尿液培养。
6． 培养结果应结合临床表现、菌落计数以及微生物种类等，进行综合判断。

参考文献
[1]周庭银.临床微生物学诊断与图解[M].第2版.上海：上海科学技术出版社，2007.
[2]中华人民共和国卫生部医政司。全国临床检验操作规程[S].2006.

微生物标本采集运送
标准操作规程
血培养标本采集、运送与报告标准操作规程

编号SYXRCYY -JYK-SOP-WSW -05
版本：A/0

血培养标本采集、运送与报告标准操作规程
一、 血培养指证
患者出现寒战，体温超过38℃或低体温，怀疑血流感染时，尤其存在以下情况时，应抽血做细菌和真菌培养：医院内肺炎；留置中心静脉导管超过72h；感染性心内膜炎；骨髓炎；有严重基础疾病、免疫缺陷伴全身感染症状；临床医生怀疑有血流感染可能的其他情况。

二、 采血时机
一旦怀疑有血流感染可能，应立即采血做血培养，最好在抗菌治疗前或停用抗菌药物24h后，以寒战、发热时采集为宜。

三、 采血流程
（一） 消毒
1. 培养瓶消毒程序：用消毒液消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。
2. 皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达5cm以上，待消毒液挥发干燥后（常需30s以上）穿刺采血。
（二） 静脉穿刺和培养瓶接种
成人用注射器无菌穿刺取血后，排尽针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头（如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头），先注于厌氧培养瓶，避免注入空气，然后注入需氧培养瓶，轻轻混匀以防止凝固。近年来临床普遍采用负压血培养瓶，将血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污染环节。
（三） 注意事项
1. 检验单需注明抗菌药物使用情况、血液采集时间和部位、临床诊断等患者信息。
2. 采血部位通常为肘静脉，疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血。除非怀疑有导管相关的血流感染，否则不应从留置静脉或动脉导管取血因为导管易被皮肤正常菌群污染。
3. 采血次数：对于成年患者，应该同时分别在两个部位采集血标本，在两个部位分离到同样菌种才能确定时病原菌。
4. 细菌性心内膜炎：在24h内取血3次，每次间隔不少于30min；必要时次日再做血培养2次。
5. 采血量：以培养基与血液之比10：1为宜，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。采血量过少会明显降低阳性率。成人每次每培养瓶采血8~10ml，婴幼儿每次每培养瓶采血2ml.

四、 运送要求
1. 所有标本采集后都应立即送往实验室，最好在2h内。如果不能及时送检，宜置于室温环境。血培养瓶送到检验科放入培养箱前，不应暂存于冰箱内。
2. 送检标本应正确标注相关信息，注明采样时间和送检时间。
3. 安全防护：放标本的容器必须防漏，禁止将渗漏的标本送往实验室。
五、 报告要求
（一） 紧急口头（电话）报告
血培养出现阳性报警时，立即进行革兰氏染色、镜检，并在最短时间内将结果向临床主管医生进行紧急口头（电话）报告。口头报告包含以下内容并记录在案。
（1） 报告者全名（或工号）；
（2） 报告的时间；
（3） 所联系医生的全名（或工号）；
（4） 报告镜检结果并强调其紧急价值；
（5） 确认临床医生收到报告并复述结果。
（二） 最终结果（书面）报告
（1） 无菌生长（培养5天无需氧菌和厌氧菌生长）；
（2） 阳性培养结果（最终鉴定结果、最终药敏结果）。
（三） 其他报告记录
1. 标本被拒收时，需即刻通知临床立即重新采血，并记录在案。
2. 最终结果与紧急口头报告结果不符，需要变更时，需立即通知临床，同时必须在书面报告上提供正确的结果，注明变更的内容。
3. 其他需临床注意的事项的记录，如：采血量不足、标本转运时间过长、标本采集份数不够等信息。

参考文献
[1]ASM.Blood cultures Ⅲ[S].1977.
[2]CLSI.Principles and procedures for blood cultures [S].2007.

微生物标本采集运送
标准操作规程
痰标本采集与运送标本标准操作规程

编号SYXRCYY -JYK-SOP-WSW-06
版本：A/0

痰标本采集与运送标本标准操作规程
一、 采集目的
一般可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌和军团菌的涂片或培养检测，经气管穿刺吸引物可用于厌氧菌的检测。
二、 一般原则
1．采集标本的最佳时机应在使用抗菌药物之前。
2．宜采集清晨第二口痰液
3．对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2~3天。不建议24h内多次采样送检，除非痰液外观性状出现改变。
4．怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。
三、 采集方法
（一） 自然咳痰法与雾化导痰法
1． 用物准备：无菌容器（盒）、生理盐水（250ml或500ml）、化验单
2.核对患者床号、姓名。
3.无痰或痰量极少者可用3%~5%氯化钠溶液5ml雾化吸入约5min后留取痰液。
4.如有可能，应在医护人员直视下留取清晨第二口痰。嘱咐患者留取前摘去牙托，清洁口腔，如刷牙后反复用生理盐水漱口；深吸气后用力自气管深部咳出痰液，置无菌容器内。应尽可能防止唾液及鼻咽部分分泌物混入样品，不应用纸巾包裹痰液。
（二）支气管镜法
鼻或口腔插入支气管镜。常用采集方法有经支气管镜吸引、支气管肺泡灌洗、防污染毛刷采样或防污染支气管肺泡灌洗等。
（三） 经人工气道吸引法
1． 用物准备：负压吸引器、生理盐水、一次性吸痰器、无菌手套、无菌容器（试管）、化验单。
2． 核对患者床号、姓名等。
3． 将患者头部转向操作者一侧。
4． 进行手卫生后将一次性吸痰器管末端拆开，连接吸引器，调节吸引器至适宜负压（成人：40.0~53.3kPa；小儿：<40.0kPa）。
5． 将一次性吸痰管外包装去除，戴手套持吸痰管试吸生理盐水，检查管道是否畅通。
6． 折叠一次性吸痰管末端，插入口腔或鼻腔或人工气道至适宜深度，放开吸痰管末端，轻柔、灵活、迅速地左右旋转上提吸痰管吸痰。见吸痰管内有痰液吸出。即折叠一次性吸痰管退出，将一次性吸痰管与吸引器分离（使用人工呼吸机者，一次吸痰时间不超过15s，吸痰前后需吸入高浓度氧气1~2min）。
7． 将痰液注入无菌容器（试管）内，如痰液粘稠可用一次性针筒向吸痰管末端注入少量生理盐水，将痰液冲入无菌容器（试管）内。
四、 运送和保存
应在2h之内送至实验室，否则应4℃冷藏，但放置时间不可超过24h。

参考文献
胡必杰，王金良，倪语星，等。下呼吸道感染实验室诊断规范[M]。上海：上海科学技术出版社，2006。

微生物标本采集运送
标准操作规程
手术部位感染标本采集及运送标准操作规程

编号SYXRCYY -JYK-SOP-WSW-07
版本：A/0

手术部位感染标本采集及运送标准操作规程
一、 一般原则
1． 在抗菌药物使用前，且仅在有临床感染症状或伤口恶化或长期不能愈合时采集标本。
2． 皮肤或黏膜表面的清洁。
（1） 闭合伤口和穿刺物标本：消毒方法同血培养标本的皮肤消毒（见《血培养标本采集和运送标准操作规范》）。
（2） 开放伤口：无菌生理盐水充分冲洗伤口部分。不可以用消毒剂。
3． 采集新鲜的感染组织避免采集浅表的组织碎屑。
4． 若可以采集穿刺物或活检标本，应避免拭子标本。
二、 容器
1． 较大的标本：含有少量生理盐水的带螺纹口的无菌塑料容器。
2． 标本较小或拭子标本：MW&TRANSWAB运输培养基，适用于需氧和厌氧菌。
三、 采集方法
（一） 封闭性脓肿
1． 注射器穿刺抽取脓液。
2． 若无法抽到脓液，应先皮下注射少量无菌生理盐水，再次穿刺抽取脓液；若脓液过多，应先切开引流，在基底部或脓肿壁采集标本。脓液的量以大于1ml为宜。
3． 排除注射器内部及针头的气体，用无菌橡皮塞封闭针头送检；或直接打入血培养瓶中。疑为厌氧菌，应迅速将脓液打入厌氧血培养瓶中。
（二） 组织和活检标本
1． 采集足够大的组织，体积以1mm³为宜，避免在坏死区域采集。
2． 将小块的组织放在运输培养基内；较大的放在无菌容器中，并加入少量无菌生理盐水。
（三） 开放伤口
1． 无菌生理盐水彻底冲洗浅表部位，去除表面的渗出物和碎屑。
2． 用拭子深入伤口的基底部或伤口-正常组织边缘部采集两个标本，分别用于培养和革兰氏染色。
四、 标本的标识
填写患者信息、标本类型（深部组织、表浅组织、脓肿和穿刺物等）、标本的来源（腹腔、腿和上臂等），记录标本采集的日期和时间及是否在使用抗菌药物前采集，选择检查项目（需氧培养或厌氧培养）。
五、 标本的送检
为了更好地分离病原菌，标本应在采集后的30min内送到实验室。送检时应保持标本的湿润（尽量采用运输培养基，组织可以放在生理盐水中）。在送检前或运送过程中，禁止将标本放在冰箱。若不能及时送检，运输培养基中标本应室温保存，但最长不可超过24h。

参考文献
[1]ASM.Manual of clinical microbiology[S].8 th ed.2003.
[2]ASM.Clinical microbiology procedure[S].2 nd ed.2004

微生物标本采集运送
标准操作规程
微生物标本运送标准操作规程

编号SYXRCYY -JYK-SOP-LJ-08
版本：A/0

微生物标本运送标准操作规程

一、 运送人员和交通工具
1． 微生物标本应包装完整，由经过培训的专人运送，严禁运送途中擅自打开包装。
2． 可以步行、自行车或专车等方式运送，严禁使用任何公共交通工具。
二、运送容器
1.标本运送时应防止标本外溢、蒸发和污染。必须使用指定的采样管，加盖密封后放入指定的、有盖的、符合生物安全标准的标本运送箱。
2.标本运送箱必须有生物危险标志。运送高致病性标本时必须加锁。
三、运送温度
应注意温度控制，如奈瑟菌检测标本应置于25~35℃环境运输，不可冷藏和冰冻。病毒检测标本一般都需要冷藏和冰冻。
四、运输过程中出现感染性物质溢出时的处理
1.立即洗手（必要时洗眼和全身冲淋），戴好手套和其他防护用品。
2.用布或纸巾覆盖溢出物。
3.向布或纸巾上倾倒消毒剂（可用含氯消毒剂或聚维酮碘），包括周围区域。
4.倾倒消毒剂时，从溢出区域的外围开始，向溢出区域的中心有序进行。
5.消毒剂作用约30min后，清除这些物质。如果现场有破碎玻璃或其他锐器，则用簸箕或硬质纸板收集并将其存放于防刺穿容器内以待处理。
6.消毒完成后，向主管机构通报事件，并说明已经完成现场污染清除工作。
五、标本送出、交接及签收
医务人员将标本交给运送人员，运送人员将标本送到微生物实验室，交予检验人员，交接时均应认真核对，包括核对标本来源、标本属性、检查项目、标本采集和运送是否合乎要求等，有签收记录。
参考文献
【1】 WHO.实验室生物安全手册[S].第3版。2004
【2】 中华人民共和国国务院第424号。病原微生物实验室生物安全管理条例[S].2004

微生物
标准操作规程
生物安全柜标准操作规程

编号SYXRCYY -JYK-SOP-LJ-09
版本：A/0

生物安全柜标准操作规程
一、 适用范围
1． 原代细胞培养物操作。
2． 细菌涂片、接（转）种培养物。
3． 产生气溶胶的操作（如血标本离心后的脱帽等）。
4． 挥发性或放射性的有毒（化学）品操作。
二、 安置要求
1． 生物安全柜应放在远离活动及有可能有干扰气流的地方。
2． 应尽量在安全柜的后侧及两侧留下30cm的空间，便于维护作业。
3． 柜子上方则留下30~35cm的高度。
三、 操作步骤
1． 开启电源和内外风扇。
2． 在机器预热时将所有必需的物品置于安全柜内。
3． 准备一块浸有75%乙醇的纱布。
4． 开始工作前及完成工作后，让安全柜工作5min来完成“净化”工程。
5． 手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约1min，使用安全柜调整完毕才开始进行物品处理。
6． 接种环应用电子加热器灭菌，而不应使用明火。
7． 在实验结束时，生物安全柜内所有物品都应清除表面污染，标本和培养基移出安全柜。
8． 每天实验结束时，用75%乙醇擦拭工作台面、四壁及玻璃的内外侧等部位来清除污染。
9． 有标本溢出等污染时，用含氯消毒剂等进行消毒，然后用水再次进行擦拭。

四、 注意事项
1. 每次开始实验之前将所需物品置于安全柜内，以尽可能减少双臂进出次数。
2. 双臂应该垂直地缓慢进出前面的开口。
3. 尽量减少操作者身后的人员活动。
4. 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。
5. 在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。
6. 生物安全柜前面的进气格栅不能被纸、仪器设备或其他物品阻挡。
7. 所有物品应尽可能地放在靠近工作台后缘的位置，但不能挡后部格栅。
8. 可产生气溶胶的设备(如混匀器、离心机等)应靠近安全柜的后部放置。
9. 生物危害性废物袋放在安全柜内右侧，袋中放入含氯消毒剂等。
10. 房中有人时要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害。
11. 安全柜一直维持运行状态（8h工作期间），不能反复开关。
12. 当气流警报响起时，立刻停止工作，并报告生物安全负责人。

参考文献
【1】 WHO，实验室生物安全手册【S】，第3版，2004。
【2】 周庭银，倪语星.临床微生物检验标准化操作【M】.上海：上海科学技术出版社，2009.