微生物标本的正确采集.doc

微生物检验标本的正确采集及注意事项

临床微生物标本的采集应在抗生素应用前或停药一周后进行，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应用前采集。各种标本采集后应立即送检；无菌部位的标本采集应严格无菌操作。
一、 血液及骨髓标本的采集
【标本送检指征】
病人出现以下临床表现，或同时具备以下几种临床表现时应采集血培养。
1 发热（≥38℃）或低温（≤36℃）
2 寒战
3 白细胞增多（＞10×109/L，特别有“核左移”时）
4 粒细胞减少（成熟的多形核白细胞＜1×109/L）
5 血小板减少
6 皮肤、粘膜出血
7 昏迷、休克
8 多器官衰竭
9 血压降低
10 呼吸加快
几种特殊情况：
1 可疑新生儿败血症时，除发热或低温外，很少培养出细菌，应增加尿液和脑脊液培养。
2 老年菌血症病人可能不发热或不低温，如伴有身体不适、肌痛或中风，可能是感染性心内膜炎，也应采取血培养。
骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的，临床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主。但当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者，抽取骨髓培养阳性率会远高于血培养。
【标本采集的容器】
各种血培养仪配套血培养瓶(分为中和抗生素成人需氧瓶、中和抗生素成人厌氧瓶、儿童瓶)
【标本的采集方法】
防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题，采血前严格执行消毒程序是十分重要的。
1 皮肤消毒程序：
严格按以下三步法进行：
(1) 75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s 以上。
(2) 用一根碘酊或聚维酮碘（碘伏）棉签消毒皮肤，1～2％碘酊作用30s 或聚维酮碘作用60s，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上。
(3) 75％酒精脱碘。
对碘过敏的病人只能用70%酒精消毒，消毒60s。
待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。
2 培养瓶消毒程序
(1) 用75％酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。
(2) 酒精作用60s。
(3) 在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。
3 培养瓶接种程序
抽取血液后，不要换针头，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，然后再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。
【标本采集注意事项】
1 血培养采集的时间和频率
(1) 采血培养应尽量在抗菌药物使用之前，在24h 内采集2～3 份血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养），每次2 瓶。因为研究已证实，2～3 份血培养足以检测所有的菌血症和真菌血症。
(2) 入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3 天，每天采集2 份，可选用能中和或吸附抗菌药物的培养基。
(3) 对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，因为发热时血液中可能没有细菌。
2 采血量
成人：推荐每个血培养瓶应加的血量为5～10ml，血液和肉汤比为1：5～10（体积：体积）。
儿童：因很难获得大量的血液，一般静脉采血2～4ml 用于血培养。
骨髓采量一
般为1～2ml。
【标本的保存】
接种标本后立即送检，如不能立即送检，室温保存，且勿冷藏。因为某些苛氧菌可在冰箱温度中死亡，而使培养阳性率下降。在运往实验室的途中如果天气寒冷，应采取一定的保温措施。
二、 下呼吸道（痰）标本的采集
【标本送检指征】
1 咳嗽、咳痰：痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨样痰。
2 咯血：肺结核病人常痰中带血。
3 呼吸困难
4 发热
5 胸痛：当炎症病变累及壁层胸膜时，会发生胸痛。
肺部感染的患者有25～50％可能发生菌血症，应同时作血培养。
【标本采集方法】
1 自然咳痰法：晨痰为佳，用温开水漱口数次（为减少口腔正常菌群污染标本），深咳呼吸道深部痰（非后鼻部分泌物、非唾液）留于无菌容器内。对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入45℃10％NaCL水溶液，使痰液易于排出。对咳痰少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，使其咳嗽。
2、对咳嗽乏力或昏迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口抵达气管腔内吸引痰液。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。
3、双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管经人工气道估插至叶支气管水平吸引痰液。
【注意事项】
1 晨痰为好。多数病人清晨痰较多，易于采集。且清晨痰含有的病理成分较多，会增加培养的阳性率。
2 有1/4-1/2肺部感染患者可能发生菌血症，应同时作血培养。
3 能在抗菌药物应用之前采集标本，标本采集后应立即送检，否则可暂存于4℃冰箱。
三、 上呼吸道（咽拭子）标本的采集
【标本送检指征】
1 病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。
2 细菌性咽－扁桃体炎：明显咽痛、畏寒、发热，体温可达39℃以上。
3 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管－支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。
【标本的采集方法】
嘱患者先用清水漱口，由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽可能向外牵引, 用压舌板将舌向下向外压，用无菌棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次然后送检，拭子应避免触及舌、口腔粘膜和唾液。
【标本采集注意事项】
1 采集时间：应于抗生素应用之前。时间上可无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，也应晨起后采集为佳。
2 送检：应立即送检。
四、 尿液标本的采集
【标本送检指征】
1 有典型的尿路感染症状；
2 肉眼脓尿或血尿；
3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性；
4 不明原因的发热，无其他局部症状；
5 留置导尿管的病人出现发热；
6 膀胱排空功能受损；
7 泌尿系统疾病手术前。
【标本的采集方法】
1 清洁中段尿标本，晨尿为佳，嘱咐患者睡前少饮水，保证与上次排尿时间间隔4小时以上。女性采样前用清水冲洗外阴部及尿道口，男性须翻转包皮冲洗，用清水冲洗尿道口，然后收集标本，方法是排尿弃去前段尿，取中段尿于无菌容器内送检。于一小时内接种。
2、导尿管导尿采样可减少污染。对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液；或拔去闭式引流的集尿袋，弃取导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。
【标本采集注意事项】
1通常取清晨第一次尿液送检。
2多数药物均通过尿液排泄，因此，无论用何种方法采集尿液均宜在用药之前进行细菌培养。
3尿培养不得加防腐剂或消毒剂。
4标本采集后应立即送检，否则可暂存于4℃冰箱。
五、 大便标本的采集
【标本送检指征】
1 急性腹泻：大便次数明显增多，腹痛，里急后重，往往伴有发热，大便性状为粘液便或脓血便。
2 慢性腹泻：大便次数多，多为稀便，伴有全身乏力等症状。
3 无痛性大量水样便或米泔样稀便。
4 先吐后泻：恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史，多为细菌性食物中毒所致。
5 抗生素治疗后腹泻：常发生于长期抗生素治疗后，糊状便，排便次数增加。
6 高热惊厥：通常为中毒性痢疾，多见于婴幼儿和小儿。
【标本的采集方法】
1 自然排便采集法：自然排便后，挑取有脓血、粘液部位的粪便2-3g，液状粪便取絮状物1～3ml盛于无菌的容器中送检。
2 直肠拭子法：适于排便困难者或婴幼儿。可用肥皂水将肛门周围洗净，用无菌盐水、保存液或增菌液湿润的无菌棉拭子插入肛门,成人约4～5cm，儿童约2～3cm，与直肠粘膜表面接触，轻轻转动,放灭菌试管内送检。
【标本采集注意事项】
1 采集时间：应在急性期采样，以提高检出率，最好在用药前。
2 送检：要采集新鲜标本立即送检。
六、脓液及创伤感染分泌物标本的采集
1. 对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。
2. 闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集。

检验科细菌室
2012年8月26日