考点一微生物的分离与培养.doc
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专题二 微生物的培养与应用 知识默写 1.培养基 (1)概念:人们按照微生物对 的不同需求,配制出供其 的营养基质。 (2)营养组成:一般都含有 。此外,还需要满足微生物生长对 、 以及特殊营养物质的要求。例如: 培养乳酸菌时需在培养基中添加 ;培养霉菌时需将培养基的PH调至 ,培养细菌时需将培养基调至 (3)种类:按照物理性质可分为 培养基和 培养基。 2.无菌技术 (1)含义:指在培养微生物的操作中,所有防止 的方法。 (2)不同对象的无菌操作方法(连线) 3.大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 →→ → → (2)纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理:想方设法在培养基上得到由 细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落,即可获得较纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤是 。 ③常用的微生物接种方法有两种 a. :是通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(注意:在操作的第一步以及每次划线之前要 接种环;在做第二次及其后的划线操作时,要从上一次划线的 开始划线) b. :是将菌液进行一系列的 ,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。(注意:涂布平板的所有操作都应在 进行) (3)菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种,可以采用 的方法。 ②对于需要长期保存的菌种,可以采用 的方法。 4、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理:土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成 ,这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到 作用。 (2)将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作 (3)统计菌落数目:统计样品中的活菌一般用 法(统计的菌落数一般比活菌的实际数 ); 也是测定微生物数量的常用方法;为保证结果准确,一般选择菌落数在 的平板计数 (4)实验流程:土壤取样→ →微生物的培养与观察→细菌的 。 (5)鉴定:分解尿素的细菌:在以 为唯一氮源的培养基中加入 ,如果PH升高,指示剂将 5、分解纤维素的微生物的分离 (1)纤维素酶作用的原理 纤维素 (2)纤维素分解菌的筛选 ①原理 纤维素分解菌 ↓ → 红色消失,出现 ②筛选方法: 法,即通过 来筛选纤维素分解菌。 ③培养基:以 为唯一碳源的选择培养基。 ④实验流程 土壤取样→ 选择培养→ →涂布平板→挑选菌落 ⑤鉴别:纤维素酶发酵方法有 和 测定:对产生的 进行定量的测定 专题二 微生物的培养与应用 知识默写 1.培养基 (1)概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)营养组成:一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外,还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。例如: 培养乳酸菌时需在培养基中添加 维生素 ;培养霉菌时需将培养基的PH调至 酸性 ,培养细菌时需将培养基调至 中性或微碱性 (3)种类:按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。 2.无菌技术 (1)含义:指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。 (2)关键:防止外来杂菌的入侵。 (3)不同对象的无菌操作方法(连线) 3.大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①操作步骤 →→→→ ②倒平板的方法及注意事项 a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程:丙→乙→甲→丁。 b.甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 c.丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 (2)纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理:想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落,即可获得较纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。 ③常用的微生物接种方法有两种 a.平板划线法:是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(注意:在操作的第一步以及每次划线之前要 灼烧 接种环;在做第二次及其后的划线操作时,要从上一次划线的 末端 开始划线) b.稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。(注意:涂布平板的所有操作都应在 火焰附近 进行)系列稀释操作(如下图所示): 涂布平板操作(如下图所示): (3)菌种的保存方法 ①对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。 ②对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。 考点二 微生物的筛选和计数 1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理:土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶,这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。 (2)将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作 选择培养基 (3)统计菌落数目:统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。(统计的菌落数一般比活菌的实际数 低 ); 显微镜计数 也是测定微生物数量的常用方法为保证结果准确,一般选择菌落数在 30--300 的平板计数 (4)实验流程:土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。 (5)鉴定:分解尿素的细菌:在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红指示剂 ,如果PH升高,指示剂将 变红 2.分解纤维素的微生物的分离 纤维素酶作用的原理 C1酶 、CX酶 纤维素 纤维二糖 葡萄糖苷酶。 葡萄糖 (2)纤维素分解菌的筛选 ①原理 纤维素分解菌 ↓ →红色复合物红色消失,出现透明圈 ②筛选方法:刚果红染色法,即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 ③培养基:以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 ④实验流程 土壤取样→ 选择培养→ 梯度稀释→涂布平板→挑选菌落 ⑤鉴别:纤维素酶发酵方法有 液体发酵 和 固体发酵 测定:对产生的葡萄糖进行定量的测定- 配套讲稿:
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