细菌感染的检测方法与防治原则PPT培训课件.pptx

细细菌感染的菌感染的检测检测方法与防治原方法与防治原则则第一节 细菌感染的实验室诊断第二节 细菌感染的特异性防治第三节 细菌感染的抗菌药物治疗原则重点难点熟悉了解掌握1.细菌感染的实验诊断方法的原理与应用2.疫苗的种类1.细菌感染的实验室检验流程2.常用疫苗的特点 细菌感染的抗菌药物治疗原则医学微生物学（第9版）细菌感染的实验室诊断laboratory diagnosis of bacterial infection第一节含菌标本可疑细菌感染血液（双份）形态学检查细菌分离培养与鉴定细菌成分检测特异性抗体检测免疫学技术分子生物学技术质谱分析法生物芯片技术细菌培养生物化学检查血清学鉴定药物敏感试验动物（毒力）试验等凝集试验免疫荧光试验酶联免疫吸附试验免疫印迹试验等核酸杂交聚合酶链反应高通量测序技术等基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）固态芯片、液态芯片蛋白质芯片、基因芯片等凝集试验补体结合试验中和试验免疫荧光试验酶联免疫吸附试验等细菌感染的实验室检测方法医学微生物学（第9版）一、临床标本的采集与运送原则早期采集无菌操作 选感染部位最佳时间采集双份血清 标本采集标本采集 做好标记置于密闭容器内尽快送检标本运送标本运送 医学微生物学（第9版）二、细菌的形态学检查暗视野显微镜相差显微镜主要用于检查在生活状态下细菌的动力及其运动情况不染色标本 二、细菌的形态学检查细菌的染色细菌的染色革兰革兰染色染色抗酸抗酸染色染色荧光金胺荧光金胺OO染色染色其他其他特殊染色特殊染色医学微生物学（第9版）葡萄球菌（革兰染色阳性）大肠埃希菌（革兰染色阴性）医学微生物学（第9版）革兰染色结果（张力平提供）细菌检查的一般程序 三、细菌的分离培养与鉴定标本脓/痰/尿等血液/脑脊液涂片、染色、镜检分离培养纯培养染色镜检生化反应血清学鉴定药敏试验增菌医学微生物学（第9版）1.细菌的分离培养：是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术（1）培养基的营养成分（2）酸碱度（pH）（3）培养时间（4）温度（5）气体环境 三、细菌的分离培养与鉴定在血平板上的肺炎链球菌菌落（张力平提供）医学微生物学（第9版）血平板上的完全溶血环【引用资源ID 678481】细菌对糖类和蛋白质的分解产物不完全一样，故有关酶类和代谢产物可作为鉴别细菌的重要依据之一2.生化试验三、细菌的分离培养与鉴定肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应（张力平提供）医学微生物学（第9版）3.血清学鉴定 三、细菌的分离培养与鉴定（1）利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌（2）对细菌进行种、群、型的鉴定 沙门菌血清学鉴定（倪语星 尚红 临床微生物检验第5版 PPT）医学微生物学（第9版）4.药物敏感试验（antimicrobial susceptibility test）最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration,MBC）能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度方法：纸片扩散法、稀释法、E-test法 三、细菌的分离培养与鉴定医学微生物学（第9版）4.药物敏感试验（1）纸片扩散法在琼脂平板上接种待检病原菌；贴含有定量抗生素的纸片后培养；纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散，形成了逐渐减小的药物浓度梯度；根据药物纸片周围抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感。三、细菌的分离培养与鉴定医学微生物学（第9版）4.药物敏感试验（2）稀释法以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。方法琼脂稀释法使用琼脂培养基肉汤稀释法使用肉汤培养基 三、细菌的分离培养与鉴定医学微生物学（第9版）4.药物敏感试验（3）浓度梯度琼脂扩散法（E-test法）：简称浓度梯度法将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度（MIC）。三、细菌的分离培养与鉴定医学微生物学（第9版）E-test试验结果（张力平提供）5.自动微生物鉴定及药敏分析系统将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。三、细菌的分离培养与鉴定自动微生物鉴定及药敏分析系统（张力平提供）医学微生物学（第9版）药敏检测原理微型化的肉汤稀释试验根据CLSI标准得到相应敏感度：敏感、中度敏感和耐药微生物数码鉴定原理计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和性能特点自动化程度较高、检测速度快、可鉴定细菌种类及药敏试验种类多、数据处理软件功能强大、结果准确可靠系统组成测试卡（板）、菌液接种器、培养和监测系统、数据管理系统自动微生物鉴定及药敏分析系统医学微生物学（第9版）四、细菌成分的检查 1.免疫学检验技术医学微生物学（第9版）用已知抗体检测待检标本中未知的颗粒性抗原。IgG的Fc段与金葡菌的SPA结合，Fab段与细菌抗原结合后，可使金葡菌发生肉眼可见的凝集现象。用已知的荧光抗体检测待检标本中的未知抗原，借助荧光显微镜观察。用酶标抗体检测特异性可溶性抗原。利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法。由于电泳和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在比例合适处形成肉眼可见的沉淀线。凝集试验 协同凝集试验 免疫荧光试验酶免疫技术对流免疫电泳2.分子生物学检验技术四、细菌成分的检查医学微生物学（第9版）PCR技术 可用于常规培养困难或耗时太长的病原体以及细菌毒素基因的检测核酸杂交技术可从标本中直接检出病原菌基因，对尚不能或难以分离培养的病原菌尤为适用高通量测序技术可用于病原菌的分类鉴定、菌群结构和物种多样性的分析和系统发育研究，具有检测未知病原体的应用前景3.质谱分析法（mass spectrometry）质谱法是将有机化合物的分子电离、碎裂，然后按照离子的质荷比（m/z）大小把生成的各种离子分离，检测其强度并排列成谱；根据细菌的蛋白质质谱图，与数据库中的细菌参考谱图比对，对细菌的属、种，甚至不同亚种进行鉴定与分类；常用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）。该技术具有简便快速、准确度高、重复性好、低成本、自动化和高通量等特点。四、细菌成分的检查医学微生物学（第9版）4.生物芯片技术（biochip technology）将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。分类：液态芯片/固态芯片、蛋白芯片/基因芯片/糖芯片/细胞芯片等 四、细菌成分的检查医学微生物学（第9版）4.生物芯片技术用途微生物感染的快速诊断：对某些病原体多重快速检查与鉴别；微生物变异机制和耐药机制的研究；微生物基因分型及分子流行病学的调查；微生物基因组及后基因组的研究：可研究病原体基因的序列、转录表达及抗原的表达；抗微生物感染药物的研制等。四、细菌成分的检查医学微生物学（第9版）用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以作为感染性疾病的辅助诊断。由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常称为血清学诊断（serological diagnosis）。一般适用于抗原性较强的细菌，以及病程较长的感染性疾病。也可用于调查人群对某病原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的预防效果。五、细菌感染的血清学诊断医学微生物学（第9版）血清学试验应用举例直接凝集试验肠热症（肥达试验）间接凝集试验钩体病、梅毒免疫荧光技术炭疽、立克次体病、恙虫病等多种细菌感染性疾病补体结合试验慢性布鲁氏菌病中和试验风湿热（抗O试验）酶联免疫吸附试验鼠疫、梅毒、Q热等多种细菌感染性疾病细菌性感染的血清学诊断医学微生物学（第9版）细菌感染的特异性防治specific prevention and treatment of bacterial infection第二节机体获得特异性免疫力的方式医学微生物学（第9版）自然免疫主动免疫：隐性或显性感染被动免疫：获得母体的Ab(胎盘/初乳)人工免疫析主动免疫：疫苗被动免疫：抗毒素或丙种球蛋白等人工主动免疫（artificial active immunization）是将疫苗接种于人体，刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于特异性预防。采用人工主动免疫方法通常称为预防接种（prophylactic inoculation）或疫苗接种（vaccination）一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）疫苗的种类死疫苗（killed vaccine）：亦称灭活疫苗（inactivated vaccine）用物理、化学方法杀死病原微生物，但仍保持其免疫原性的生物制剂；常用的有：伤寒、霍乱、流行性脑膜炎、钩端螺旋体病等。活疫苗（living vaccine）：亦称减毒活疫苗（attenuated vaccine）是通过毒力变异或人工选择法（如温度敏感株）而获得的减毒或无毒株，或从自然界直接选择出来的弱毒或无毒株经培养后制成的疫苗。常用的有：卡介苗、鼠疫、炭疽等细菌性减毒活疫苗。一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）区别点活疫苗死疫苗制品特点减毒或无毒的细菌，可在体内增殖死菌，在体内不增殖，但仍保持免疫原性 制备方法通过自然筛选/非正常培养得到减毒株通过物理和/或化学方法使病原体失活接种次数和接种量1次，量小23次，量大接种反应类似轻型感染或隐性感染可出现发热、全身或局部肿痛等反应免疫应答的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫免疫维持时间15年或更长0.51年毒力回升与安全性有可能，对免疫缺陷者有风险不可能，安全性好疫苗的稳定性相对不稳定相对稳定保存不易保存，存活2周，真空冻干可长期保存易保存，可保存1年以上活疫苗与死疫苗的比较疫苗的种类类毒素（toxoid）外毒素经0.3%0.4%甲醛处理后，失去了毒性但仍保持免疫原性的生物制品。加入吸附剂（佐剂）氢氧化铝后便制成精制类毒素。吸附剂可延缓类毒素在体内的吸收时间，刺激机体产生足量的抗毒素。举例：白喉类毒素、破伤风类毒素 一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）疫苗的种类多糖疫苗（carbohydrate vaccine）提取纯化细菌中能引起特异性保护作用的多糖成份制备而成；成分单一，不存在易引起免疫副反应的物质，更为安全有效，已成为应用最多的疫苗之一；在临床上被广泛使用的荚膜多糖疫苗包括：肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌荚膜多糖疫苗等。一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）疫苗的种类多糖结合疫苗将细菌的聚糖共价连接到适当的蛋白载体上而制备形成；TI-Ag转变TD-Ag，抗体IgM为主向IgG为主转变，抗体亲和力更强，效价更高，持续时间也更长；目前上市的细菌多糖蛋白结合疫苗有：b型流感嗜血杆菌、脑膜炎球菌和肺炎球菌等多糖结合疫苗。一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）疫苗的种类联合疫苗（combined vaccines）：由不同抗原组分混合制成的疫苗，包括多联疫苗与多价疫苗；多联疫苗：由两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的疫苗，可同时预防多种疾病。如：百白破疫苗（DTP）；多价疫苗：由同一种细菌的不同亚型或不同血清型抗原合并组成的含多价抗原成分的一种疫苗，典型的如23价肺炎球菌多糖疫苗。一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）疫苗的种类基因工程疫苗（gene engineered vaccine）是利用基因工程技术将编码病原体保护性抗原表位的目的基因导入原核或真核表达系统中，利用表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗；基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗等。一、人工主动免疫医学微生物学（第9版）抗毒素（antitoxin）将类毒素或外毒素给马免疫制成；用途：外毒素所致疾病的治疗和紧急预防；精制破伤风、白喉和肉毒抗毒素以及多价精制气性坏疽抗毒素等；使用这些异种抗毒素时应注意避免型超敏反应的发生。二、人工被动免疫医学微生物学（第9版）丙种球蛋白（gammaglobulin）血清丙种球蛋白、胎盘丙种球蛋白；用途：某些感染性疾病的紧急预防、烧伤患者预防感染、丙种球蛋白缺乏症患者、经长期化疗或放疗的肿瘤患者等。抗菌血清（antisera）已基本被淘汰；对于由铜绿假单胞菌多重耐药菌株所引起的严重烧伤疾病感染的治疗，尚可以考虑试用。二、人工被动免疫医学微生物学（第9版）两种人工免疫方法的比较医学微生物学（第9版）区别点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数13次1次免疫出现时间慢（注射后24周）快（注射后立即出现）免疫维持时间长（数月数年）短（23周）用途多用于预防多用于治疗或紧急预防细菌感染的抗菌药物治疗原则the principles of antimicrobial therapy for bacterial infection第三节主要采用抗菌药物来治疗细菌感染；抗菌药物一般是指具有杀菌或抑菌活性的药物以及由微生物合成的抗生素类药物；正确合理应用抗菌药物是提高疗效、降低不良反应发生率以及减少或减缓细菌耐药性发生的关键。医学微生物学（第9版）诊断为细菌性感染者，方有指征应用抗菌药物；尽早查明感染病原，根据病原种类及抗菌药物敏感试验结果选用抗菌药物；按照药物的抗菌作用特点及其体内代谢过程特点选择用药；抗菌药物治疗方案应综合患者病情、病原菌种类及抗菌药物特点制订。抗菌药物治疗性应用的基本原则医学微生物学（第9版）细菌感染的实验室检测 早期无菌采集适当标本 根据细菌的染色与形态学特征、菌落特征、生化反应结果、抗原、核酸检测确定病原菌种属、型别。根据药物敏感实验确定特定细菌对抗菌药物的敏感性。检测双份血清中的特异性抗体效价也有助于疾病的诊断。细菌感染的特异性防治 接种疫苗 紧急预防/治疗：抗毒素或免疫球蛋白 细菌感染的治疗原则 使用抗生素治疗细菌感染性疾病。综合考虑感染细菌的种类、对药物的敏感性、药物作用机制及药物动力学特点等诸多因素选择抗菌药物，制定合理有效的治疗方案。医学微生物学（第9版）