藏药蓝玉簪龙胆的种子萌发和愈伤繁殖特性.pdf
《藏药蓝玉簪龙胆的种子萌发和愈伤繁殖特性.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《藏药蓝玉簪龙胆的种子萌发和愈伤繁殖特性.pdf(10页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、2023 年 6 月第 3 期97105甘肃农业大学学报 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY第5 8卷双 月 刊藏药蓝玉簪龙胆的种子萌发和愈伤繁殖特性郑晓雯1,3,4,张思思1,郑冰洁1,冯勇强1,褚晖1,巨秀婷1,3,4,才桑加2,李长慧1,徐庭亮1,3,4(1.青海大学,青海 西宁 810016;2.青海洮河源湿地公园管理服务中心,青海 西宁 810016;3.青海大学高原花卉研究中心,青海 西宁 810016;4.青海省园林植物与观赏园艺重点实验室,青海 西宁 810016)摘要:【目的】为保护蓝玉簪龙胆的种质资源,探索其人工繁育方法。【方法
2、】试验采用浸种和组织培养技术,通过不同培养基和不同激素的筛选,讨论蓝玉簪龙胆种子萌发以及愈伤组织分化的最佳策略。【结果】蓝玉簪龙胆种子在200 mg/L GA3处理4 h发芽率最高,为44.84%;在不同基本培养基中培养,B5培养基萌发效果最佳,发芽率达53.21%。以B5培养基为基础,向培养基中添加不同浓度的GA3、NAA和6-BA,得到蓝玉簪龙胆种子萌发的最优培养基为:B5+0.5 mg/L GA3+1 mg/L 6-BA,发芽率达 66.01%;诱导愈伤组织生长的最适宜培养基为:B5+0.5 mg/L GA3+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,诱导率为34.28%。以
3、愈伤组织生长最适培养基为基础,添加不同浓度6-BA,进一步优化培养基配方,得到最适合蓝玉簪龙胆愈伤组织继代培养的方案:B5+0.5 mg/LGA3+0.5 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA。【结论】愈伤组织继代培养方案可以将蓝玉簪龙胆从种子分化成愈伤组织,再分化成幼苗。关键词:蓝玉簪龙胆;人工繁育;种子萌发;愈伤诱导中图分类号:S567.23+9 文献标志码:A 开放科学(资源服务)标识码(OSID):文章编号:1003-4315(2023)03-0097-09Characteristics of seed germination and callus propagation of T
4、ibetan medicine Gentiana veitchiorumZHENG Xiaowen1,3,4,ZHANG Sisi1,ZHENG Bingjie1,FENG Yongqiang1,CHU Hui1,JU Xiuting1,3,4,Caisangjia2,LI Changhui1,XU Tingliang1,3,4(1.Qinghai University,Xining 810016,China;2.Qinghai Taoheyuan Wetland Park Management Service Center,Xining 810016,China;3.Plateau Flow
5、er Research Center,Xining 810016,China;4.Key Laboratory of Landscape Plant and Horticulture of Qinghai Province,Xining 810016,China)Abstract:【Objective】The study aimed to explore artificial breeding approaches of the Gentiana veitchiorum in order to protect its germplasm resources.【Method】The best c
6、onditions for seed germination and callus differentiation of G.veitchiorum was determined by using seed soaking and tissue culture techniques and screening of different media and different hormones in the experiment.【Result】The germination DOI:10.13432/ki.jgsau.2023.03.013第一作者:郑晓雯,硕士研究生。E-mail:通信作者:
7、徐庭亮,讲师,博士,主要从事藏高原野生植物开发与利用相关研究。E-mail:基金项目:青海省科技厅基础研究计划(青年基金,2023-ZJ-982Q);青海省“昆仑英才科技领军人才”培养项目(青人才字 2022 1号);2021洮河源国家湿地公园湿地保护与恢复项目(2021-thy-1);青海大学第五批创新创业工坊(GF-20230002);青海大学2023年大学生科研训练计划(SRT)项目(SRT202311);青海大学农牧学院大学生创新创业训练计划项目(2022)。收稿日期:2023-03-31;修回日期:2023-04-19甘肃农业大学学报2023 年rate of G.veitchior
8、um seeds was the highest when treated with 200 mg/L GA3 for 4 h,which was 44.84%.Cultured in different basic media,the seeds had the highest germination rate on B5 medium(i.e.,53.21%).With adding different concentrations of GA3,NAA and 6-BA to basic B5 medium,it was showed that the optimal medium fo
9、r seed germination of Gentiana veitchii was B5+0.5 mg/L GA3+1 mg/L 6-BA,on which the seed germination rate was 66.01%.The optimal medium for callus induction was B5+0.5 mg/L GA3+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,on which the induction rate was 34.28%.Based on the optimal medium for callus growth,the medium
10、 formula was further optimized by adding different concentrations of 6-BA,and the most suitable scheme for callus subculture was obtained as follows:B5+0.5 mg/L GA3+0.5 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA.【Conclusion】The G.veitchiorum seeds can be differentiated into callus,and then into seedlings by using the cal
11、lus subculture scheme.Key words:G.veitchiorum;artificial breeding;seed germination;callus induction蓝玉簪龙胆(Gentiana veitchiorum Hemsl.)藏语学名为“邦见温保”,龙胆科龙胆属,是青藏高原特有的多年生草本植物,其花冠形状同“喇叭状”,呈蓝色或深蓝色,极具观赏价值1。蓝玉簪龙胆作为传统的中藏药,因其地上部位的提取物富含类黄酮,生物碱和环烯醚萜苷类等次生代谢产物,而被认为具有清热解毒和清热利胆的功能2-3。现代医学表明它可以用于治疗肝脏黄疸,急性肝病,天花,头痛和呼吸道感染
12、等疾病,并且现以蓝玉簪龙胆为原料的成药产品有龙胆泻肝汤、蓝玉簪龙胆花漱口剂等4-7。因其具有重要的产业价值,对原材料需求逐年上升,但目前获取蓝玉簪龙胆植株仍靠人工采挖,导致产品产量稳定性差,品质层次不齐,同时野生群体稳定性被破坏,进而导致生态系统次生危害激增8。为了缓解蓝玉簪龙胆野生植物资源枯竭,最大限度地满足药品、保健品等生产用原料的需求,本试验通过研究其种子的萌发和愈伤组织的特性,建立人工繁育体系,促进该药用植物资源的永续利用。由于青藏高原的特殊地理环境因素,导致蓝玉簪龙胆种子体积很小,所以种子内的营养物质也很少,使得真正能够成熟且正常萌发的种子数量十分有限,同时恶劣的气候又使落地种子的活
13、力不断下降,致使蓝玉簪龙胆在自然状态下萌发率极低9-10。组织培养是一种在不受季节变化的影响的前提下,能够提高种子萌发率和快速繁殖植物的一种常用的生物技术手段,不仅可以保存植物的种质资源且能够优化和增强其生物合成11。迄今为止,蓝玉簪龙胆的组织培养只有茎段培养技术的研究12。但茎段的繁殖材料数量有限,植株遗传性状较稳定,无法通过诱变育种进行品种改良。本研究在前人的基础上,拟通过赤霉素处理,探究野生蓝玉簪龙胆种子萌发特性;为进一步提高种子的发芽率,试验将种子接种在不同基础培养基和不同激素配比的培养基中,获取最适合种子萌发和诱导愈伤组织生长的方案;最后对促进愈伤组织生长的方案进行优化,获取促进愈伤
14、组织继代培养的最优方案。试验旨在探究蓝玉簪龙胆种子萌发和愈伤组织生长特性,改进播种繁育技术,以期为蓝玉簪龙胆人工种子的获取和系统开发、多元利用提供技术和理论参考。1材料与方法1.1试验材料试验材料用蓝玉簪龙胆种子于2021年9月在青海洮河源国家湿地公园(N 3432 1 3412 25,E 10156 20 10208 52)采集,并将种子储存在牛皮纸袋中,晾晒干燥后保存备用。1.2试验方法1.2.1赤霉素打破休眠处理蓝玉簪龙胆种子经白猫漂水消毒20 min,参考刘美茹等的方法将消毒后 的 种 子 分 别 以 赤 霉 素 浓 度 为 0、200、300、400 mg/L的溶液和浸泡30 min
15、和4 h处理,随后将不同浓度不同浸泡时间处理组合的种子平铺在有湿滤纸的培养皿中,每个处理设置3次重复13。随后置于光照培养箱(40%的相对湿度,白天25/16 h;黑夜20/8 h)中进行常规培养,全程保湿。于7 d后观察种子萌发情况并统计发芽率。1.2.2基本培养基的筛选蓝玉簪龙胆种子经白98第 3 期郑晓雯等:藏药蓝玉簪龙胆的种子萌发和愈伤繁殖特性猫漂水消毒20 min,利用试验1.2.1筛选出的最适合的打破种子休眠赤霉素的方案处理种子,然后接种在 5种不同基础培养基上,即 1/2 MS 培养基、1/4 MS培养基、3/4 MS培养基、MS培养基和B5培养基(MS 培养基中微量元素分别为原
16、来的 1/2、1/4和3/4,配成1/2MS、1/4MS培和3/4MS培养基。MS和B5培养基配方见表12)。每个处理设置3个重复,每个重复做6皿技术重复,每皿3050粒种子,然后置于光照培养箱(40%的相对湿度,白天25/16 h;黑夜20/8 h)中进行常规培养,于培养7 d后观察种子萌发情况并统计蓝玉簪龙胆种子的发芽率。1.2.3不同激素浓度对种子发芽和愈伤组织的影响在试验1.2.2的基础上,将种子接种于添加不同浓度和种类激素配比的培养基中,按表3拟正交试验组合27组处理,每个处理设置3次重复,每个重复接种3皿,于接种后7 d开始观察种子萌发情况,2周后开始观察愈伤生长情况,筛选出蓝玉簪
17、龙胆种子发芽和愈伤组织生长的最优培养基培养配方。种子发芽率(%)=发芽种子数/总种子数100%愈伤组织诱导率(%)=愈伤组织数/总种子数100%1.2.46-BA对愈伤组织诱导的影响为促进诱导蓝玉簪龙胆愈伤组织的生长,从试验1.2.3中所选出的诱导蓝玉簪龙胆愈伤组织生长的最优方案的基础上进一步优化,在此培养基上繁育愈伤组织,然后控制 GA3和 NAA 的激素浓度,添加 0.20(C1处理),0.50(C2处理),0.70(C3处理),1.0(C4处理),1.5(C5处理),2.0 mg/(C6处理)的6-BA,以不添加6-BA为对照(CK),每个处理3个重复,每个重复接种3皿愈伤组织。每隔2周
18、测量直径并观察愈伤组织的生长情况,直至第6周,计算愈伤组织直径增长率,筛选出诱导愈伤组织分化的最佳培养基。愈伤组织总增长量(mm)=M3-M0直径增长率(%)=(M-M0)/M0100%M0为初始愈伤组织的直径;M1,M2,M3分别为2周,4周和6周后愈伤组织直径。表1MS培养基配方Table 1Formulation of MS medium大量元素(母液)Macroelement(mother liquor I)微量元素(母液)Macroelement(mother liquor )铁盐(母液III)Iron salt(mother liquor III)有机成分(母液)Organic c
19、omponents(mother liquor IV)成分 Component硝酸钾 KNO3硝酸铵 NH4NO3磷酸二氢钾 KH2PO4硫酸镁 MgSO4 7H2O氯化钙 CaCl2 2H2O碘化钾 KI硼酸 H3BO3硫酸锰 MnSO4 4H2O硫酸锌 ZnSO4 7H2O钼酸钠 Na2MoO4 2H2O硫酸铜 CuSO4 5H2O氯化钴 CoCl2 6H2O乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA硫酸亚铁 FeSO4 7H2O肌醇甘氨酸盐酸硫胺素 VB1盐酸吡哆醇 VB6烟酸 VB5蔗糖/(g L-1)琼脂/(g L-1)使用浓度/(mg L-1)Using concentration1 90
20、01 6501703704400.836.222.38.60.250.0250.02537.2527.8510020.10.50.530799甘肃农业大学学报2023 年1.3 数据分析本试验利用Excel进行数据的整理和初步计算,利用 SPSS 17.0软件进行差异性分析,使用 Origin 19.0软件进行绘图。2结果与分析2.1GA3对蓝玉簪龙胆种子萌发的影响由图1-A可知,外源添加不同浓度GA3并处理30 min和4 h蓝玉簪龙胆种子,发芽率不同,种子的发芽率随着GA3的浓度升高和处理时间的延长呈先升高后下降的趋势。对蓝玉簪龙胆而言,添加200 mg/L的GA3种子的发芽率相较于其他浓
21、度处理显著增高,处理 30 min 和 4 h 的发芽率分别为39.57%和44.84%,分别比对照CK提高了25.16%和35.72%。随着浓度超过200 mg/L时,发芽率逐渐降低,在400 mg/L处理30 min时,种子的发芽率低于对照,说明该处理对种子的萌发起到抑制作用。综合考虑:200 mg/L GA3处理30 min与处理4 h无显著差异,所以选择处理30 min为适合蓝玉簪龙胆种子萌发的条件。表2B5培养基配方Table 2Formulation of B5 medium大量元素(母液)Macroelement(mother liquor I)微量元素(母液)Macroelem
22、ent(mother liquor )铁盐(母液III)Iron salt(mother liquor III)有机成分(母液)AOrganic components(mother liquor IV)成分 Component硝酸钾 KNO3硫酸铵(NH4)2SO4硫酸镁 MgSO4 7H2O氯化钙 CaCl2 2H2O碘化钾 KI硼酸 H3BO3硫酸锰 MnSO4 4H2O硫酸锌 ZnSO4 7H2O钼酸钠 Na2MoO4 2H2O硫酸铜 CuSO4 5H2O氯化钴 CoCl2 6H2O乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA硫酸亚铁 FeSO4 7H2O肌醇盐酸硫胺素 VB1盐酸吡哆醇 VB6烟
23、酸 VB5蔗糖/(g L-1)琼脂/(g L-1)使用浓度/(mg L-1)Using concentration2 5001342501500.753.0102.00.250.0250.02537.2527.85100101.01.0307表3因素水平表Table 3Cause level table水平 Level123因素 FactorsA:GA3浓度/(mgL-1)GA3 concentration0.00.51.0B:NAA浓度/(mgL-1)NAA concentration0.00.51.0C:6-BA浓度/(mgL-1)6-BA concentration0.00.51.010
24、0第 3 期郑晓雯等:藏药蓝玉簪龙胆的种子萌发和愈伤繁殖特性2.2不同基本培养基对蓝玉簪龙胆种子萌发的影响如图1-C,在种子发芽的初期,中期和后期,B5培养基种子发芽率最高,幼苗根系长,颜色嫩绿,且长势一致。图1-B所示:蓝玉簪龙胆在B5和1/4 MS培养基中的发芽率相较于其他培养基显著升高,发芽率分别达到了53.20%和47.04%,而在MS培养基中的发芽率最低,为15.16%。所以选用B5培养基进行后续试验。2.3不同激素配比对种子萌发和愈伤诱导的影响正交试验设计结果表明(表4):影响蓝玉簪龙胆种子发芽率的激素按主次排序为 A(GA3)C(6-BA)B(NAA),GA3浓度是排在第一位的关
25、键原因;从初选的最优水平组合能够看出,最适合种子发芽的激素配比方案为A2B1C3(B5+0.5 mg/L GA3+1 mg/L 6-BA),发芽率达66.01%;影响诱导蓝玉簪龙胆愈伤组织生长的激素按主次排序为C(6-BA)B(NAA)A(GA3),6-BA浓度是排在第一位的关键原因,其次是NAA和GA3;适合诱导愈伤组织生长的最优水平组合为A2B2C2(B5+0.5 mg/L GA3+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA),愈伤诱导率达34.28%。影响发芽率和诱导愈伤组织生长的最优组合均未在表中出现。2.46-BA对诱导植物愈伤组织分化的影响细胞分裂素对愈伤组织的增殖和胚性
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 藏药 玉簪 龙胆 种子 萌发 繁殖 特性
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。