药品卫生检验方法.docx

第一章药品卫生检验通则 一、供试品取样及注意事项 供试品取样应有一定数量，以使检验结果具有代表性。因此，正常的供试品，一般每批应随机抽取两瓶或两盒以上的包装单位。检验时，每次最少应分取两瓶（盒）以上的样品共克或毫升，中药蜜丸至少应分取丸以上共克；贵重或微量包装的供试品，取样量可酌减 。 凡异常的供试品，则选取有疑问的样品进行检验。 肉眼能看出发霉生虫变质、活螨的样品，应判为不合格，无需再作抽样检验。 检查活螨的样品抽样量，见活螨的检验法。 供试品在检验前，应严格保持包装的原有状态，不得启开，防止再污染。并放在阴凉干燥处，防止微生物再繁殖，以免影响检验结果。凡已将原包装启开，则无代表性，应另行取样。 供试品在检验过程中，从开封至全部检验操作结束，须防止微生物再污染和扩散。凡直接与样品接触的用具，均应事先灭菌并保持无菌；全部操作须在无菌室内进行，或在相应的条件下，按无菌操作规定进行。 供试品稀释后，须在小时内操作完毕，防止微生物繁殖或死亡。 供试品稀释成供试液后，应在均匀状态下取样。凡因抑菌或不溶于水的剂型，其供试品应作特殊处理后进行检验。 从供试品检出大肠杆菌或其它致病菌的报告发出起，该菌种保存一个月备查。如有疑问，可送药检部门或上一级药检单位复核。 二、供试品制备 凡固体样品，应称取克，加在毫升稀释剂（生理盐水或磷酸盐缓冲液）中，经充分研磨或振摇制成供试液。液体样品，则可量取毫升加在毫升稀释剂中，混匀后成供试液。 凡含有防腐剂或抑菌成份且影响检验的供试品，可经离心沉淀集菌法及其他适宜的方法处理后，检验大肠杆菌和其他致病菌。集菌处理法如下： 取供试液毫升，以无菌手续放在灭菌的尖底刻度离心管中，经每分钟转以上离心沉淀分钟，用灭菌毛细吸管吸取上清液弃掉，并留下管底的毫升残余液，将其全部洗净加在培养基中，进行增菌检验。含有不溶性药渣的样品稀释液，可均匀吸取毫升放在离心管中 ，先经每分钟转左右离心沉淀分钟，取其上清液放在另一灭菌尖底刻度离心管中，再经每分钟约转以上离心沉淀分钟，轻轻吸取上清液弃掉，取其管底的毫升残余液全部洗净加在培养基中，增菌检验即得。 非水溶性的软膏、乳膏、油膏剂等，可称取样品克，放在乳钵或烧杯中，加毫升灭菌的吐温充分研磨匀后，加入经干热灭菌半小时的西黄蓍胶克研磨匀。再加少量的稀释剂充分研磨，使呈均匀乳剂。随后边加入稀释剂边研磨，使成毫升乳剂 ，移至三角瓶中，即为供试液。 或称取供试品克，分别量取液体石蜡毫升，吐温毫升，稀释剂毫升。先将供试品置乳钵中，边研磨边滴加液体石蜡；然后再边研磨边滴加吐温，研磨均匀后；再边加入稀释剂边研磨，开始每次约毫升，待起团块时，加入稀释剂毫升，稍停一分钟 ，再轻轻研磨至乳化，将稀释剂加完为止，即得供试液。 滤膜法：取规定量的供试品，按毫升加入灭菌生理盐水毫升左右，摇匀，用灭菌吸管或注射器注入薄膜过滤器内，减压抽干后，用灭菌生理盐水或其他适宜的溶剂冲洗薄膜次，每次毫升。取出薄膜，剪成几条，加至毫升灭菌稀释剂中，充分摇动，使成供试液。可 供细菌、酵母菌和霉菌计数用。或将剪成几条的上述薄膜加至有关的增菌培养基中培养，可供检查绿脓杆菌或金黄色葡萄球菌用。 三、阳性菌株对照试验 为便于研究观察成药制剂中，某些含有防腐剂和抑菌成份的干扰作用，以及测试常规检验方法和培养基、试剂等的灵敏度时，可将定量的已知阳性对照菌加在供试品稀释液中，按检验供试品的操作方法进行阳性菌的对照试验。阳性对照菌应生长。 常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和破伤风杆菌等。 对照试验加入的已知活菌量，每批供试品应控制在个范围之内，需氧菌常用的计数方法，如金黄色葡萄球菌可用培养小时 新鲜肉汤培养物，十倍递增稀释至，取其 毫升按琼脂平板表面涂抹法或取稀释液毫升按浇碟法进行活菌数测定。按每毫升菌液内所含的活菌量，取适量加在供试品里，对照检验即得。破伤风杆菌的阳性对照以作毒力试验为主（具体操作见破伤风杆菌检验项下。） 作阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染供试品和环境。为此，加入阳性菌的操作可在另外无菌室或其他适宜的地方进行。 第二章药品卫生检验法 一、细菌总数测定法 细菌总数的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染的活菌数量。测定结果便于判明供试品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的药品原料、工具设备和工艺流程、操作者的卫生状况，是对供试品进行卫生学总评价的综合依据。 供试品的测定： 固体供试品，以无菌操作称取若干克，按下列方法之一进行稀释： （）将已称取供试品置入灭菌乳钵中加入适量稀释剂，充分研磨，然后移至于灭菌三角瓶中，共加入稀释剂毫升，使成均匀供试液。 （）将已称取的供试品连同毫升的稀释剂加入灭菌三角瓶或其他相应容器内，进行振荡，使成的均匀供试液。 液体供试品，可量取毫升加入毫升稀释剂，混匀即得。 用毫升灭菌吸管，吸取供试液毫升，沿管壁注入装有毫升灭菌的稀释剂试管内，混匀即为稀释液。 另取毫升灭菌吸管，按上项操作顺序作倍递增稀释。如此每递增稀释一次，应换用支 毫升灭菌吸管并充分混匀，稀释至或适当倍数备检。 另用毫升灭菌吸管支，按高倍稀释至低倍稀释的顺序分别吸取各稀释度的液体毫升，注入直径厘米的平皿内，或在作上述倍递增稀释时，应稀释妥一稀释度，即可取毫升稀释液注入平皿内。一般可根据对供试品污染情况的估计，从供试液起选择个适宜稀释度进行 测定，每个稀释度各用个平皿。 稀释液注入平皿后，应及时将熔化并冷至的肉汤琼脂培养基倾注平皿内，各约毫升，随即转动平皿使充分混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置培养箱内培养至小时和小时，并分别计算平板内生长的的菌落。一般以小时的菌落数为准。 为减少片状菌落的干扰，也可采用琼脂，在无菌室开盖倒置或换灭菌的干燥陶瓦盖等方法使平板表面干燥后，再进行培养。 菌落计数方法： 先用肉眼观察，点数菌落数（霉菌不包括在内），然后持倍放大镜检查有无遗漏。各平板菌落计数后，求出同一稀释度各平板生长的平均菌落数。如平板中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平板不宜计数。 、细菌菌数报告： 一般的报告方法是选取同一稀释度平均菌落数在之间的平板，作为菌落总数测定的范围。如每个稀释度使用两个平板，应采用两个平板的菌落平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，或两平板菌落数相差一倍以上，此稀释度不宜采用。如每个稀释度使用三个平板， 应采用三个平板菌落数的平均数，其中有两个平板菌落数较接近，另一个平板相差在一倍以上，或有片状菌落生长时，则应采用前者平均数为该稀释度的菌落数，按下列规则乘其稀释倍数报告之。 稀释度的选择： （）若只有一个稀释度，平均菌落数在个之间时，乘以稀释倍数报告之（见表例）。 （）若两个稀释度，其平均菌落数均在个之间，则应求出两者总菌数之比，凡比值小于或等于应报告其平均数，若大于则报告其中较小的数字。（见表例、）。 （）若所有稀释度的平均菌落数均多于个，则应按稀释度最高的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表例）。 （）若所有稀释度的平均菌落数均少于个，则应按稀释倍数最低的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表例）。 （）若所有稀释度的平均菌落数均不在之间，其中一个稀释度大于，而相邻的另一稀释度小于时，则以接近或的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表例）。 （）若所有稀释度均无菌生长，报告数为个克或毫升。 菌数的报告，菌数在以内时，按实有数报告之，大于时，采用左端前位数字，在前两位数字之后的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用的指数来表示（见表）。 如供试品经检验，细菌数不合格，需复验时，应重新取样，依法复试两次，细菌数仍有一次不合格时，则该供试品细菌数应判为不合格。 表细菌计数结果及报告方法 平均菌供试品稀释倍数两数菌落 落数 稀总数细菌总数报告方式 释之（个（个克或毫升） 例度克或 次菌比亳升） 或 或 或 不可计或 或 不可计或 二、霉菌总数测定法 霉菌总数（包括酵母菌）的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染活的酵母菌、霉菌数量，借以判明供试品的酵母菌、霉菌污染程度及其一般卫生状况。 供试品的测定： 供试液与稀释按细菌总数测定项下规定的方法进行。取供试液、和的稀释液各毫升分别注入平皿内，每个稀释度各用个平皿，加入稀释液后将熔化并冷至的虎红琼脂培养基约毫升倾入平皿内，充分摇匀。凝固后，翻转平板置 培养小时，计算平板内生长的霉菌菌落数。若有根霉或毛霉蔓延生长，为避免影响其它霉菌的计数时，应及时将此平板取出计数。 酵母菌霉菌菌数报告： 酵母菌、霉菌计数，应选取带有菌丝体的菌落和酵母菌菌落进行点数。先点清每个平板上生长的菌落数，再求出每一稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取平板上菌落数既清可数，平均又在个范围以内的菌落数，乘以稀释倍数后，做为供试品的霉菌总数报告之。若有两 个稀释度的菌落数皆在个以内或三个稀释度皆不在此范围之内时，应参照细菌总数测定的规则报告之。 一般眼科制剂的细菌、霉菌总数测定按上述方法进行并报告之。如抗生素或有抑菌作用的制剂，采用适宜的方法处理后，按常规方法进行。 如供试品经检验，霉菌总数不合格，需复检时，应重新取样，依法复试两次。霉菌数仍有一次不合格时，供试品应判为酵母菌、霉菌数不合格。 三、大肠杆菌检验法 大肠杆菌来源于人和温血动物的粪便。凡由供试品中检出大肠杆菌时，表明该药品已被粪便污染，患者用后，有被粪便中可能存在的其它肠道致病菌和寄生虫卵等病源体感染的危险。因此，大肠杆菌被列为重要的卫生指标菌，是非规定灭菌口药品的常规必检项目之一。 大肠杆菌检验程序。 表肠杆菌科各菌属的生化特性鉴别表 爱亚枸克肠杆菌属沙雷氏菌属 菌属艾志德沙利橼雷 希贺华门桑酸伯夫尼亚液化 氏氏氏氏那杆氏阴沟产气粘质红色 生化特性菌菌菌菌菌菌菌3722- 3722- 属属属属属属属2525 靛基质+ -/+ + - - - -/+ - - - - - - - - 甲基红+ + + + + + - - - +/- - -/+ -/+ +/- -/+ 反应- - - - - - + + + +/- + + + -/+ +/- 西蒙氏枸橼- - - d + + + + + (+) d + + + + 酸盐/- 硫化氢（三糖- - + + + +/- - - - - - - - - - 铁） w w-, 尿素酶- - - - - d + +/- - - - d +)w d 氰化钾- - - - - + + + + + + + -/+ + 动力+/- - + + + + - + + + + + + + + 明胶()- - - - (+) - - (+) -/- +/+ + /-(+) (+) 赖氨酸脱羧d - + + + - + - + + + + +/+/- + 酶(+) 精氨酸双水d -/- (+) +/d - + - - - - - - - 解酶(+) /+(+) 鸟氨酸脱羧d d + + + d - + + + + + - + + 酶 苯丙氨酸脱- - - - - - - - - - - - - - 氨酶 丙酸钠- - - - + d + +/- +/- +/- d - +/- - 葡萄糖产气+ - + + + + + + + + + +/- -/+ + 乳糖+ - - - d (+) + + + -/- - + d (+) /+(+) 蔗糖d - - - - d + + + d -/(+) + + + 甘露醇+ +/- - + + + + + + + + + + + + 卫矛醇d d - d - d -/+ -/+ - - - - - - 水杨甙d - - - - d + +/+ d d + + + (+) 侧金盏花醇- - - - - - +/- -/+ + - - d + d 肌醇- - - d - - + d + - - d d + + 山梨醇+ d - + + + + + + - - + - + 阿拉伯糖+ d - +/+ + + + + + + - + + + (+) 棉子糖d d - - - d + + + - - - + d + 鼠李糖d d - + + + + + + + + - - - - 果胶杆菌属形杆菌属普罗菲登斯菌属 菌属 生化特性3722- 25普通奇异摩根氏雷极氏产碱司徒氏 靛基质-/+ -/+ + - + + + + 甲基红-/+ +/- + + + + + + 反应-/+ -/+ - -/+ - - - - 西蒙氏枸橼d +/(+) d +/- + + + 酸盐(+) 硫化氢（三糖- - + + - - - - 铁） w 尿素酶d d + +/+ + - - (+) 氯化钾+/- +/- + + + + + + 动力+/- +/- + + +/- + + +/- 明胶()+/(+) + + - - - - 赖氨酸脱羧- - - - - - - - 酶 精氨酸双水- -/(+) - - - - - - 解酶 鸟氨酸脱羧- - - + + - - - 酶 苯丙氨酸脱- - + + + + + + 氨酶