PD-1、PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义.pdf

49JOURNAL OF RARE AND UNCOMMON DISEASES,AUG.2023,Vol.30,No.8,Total No.169【第一作者】陈薇，女，主要研究方向：乳腺疾病的临床诊治。E-mail：【通讯作者】陈薇论著PD-1、PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义 陈 薇*李思荣 温丽珊五华琴江医院综合外科(广东 梅州 514400)【摘要】目的 探讨PD-1、PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义。方法 随机纳入我院2020年1月至2021年1月78例乳腺癌患者，按照免疫组化结果分为对照组和观察组各39例，对照组为非三阴性乳腺癌，观察组为三阴性乳腺癌，收集患者手术切除的乳腺癌组织，采用免疫组化法检测乳腺癌组织PD-1，PD-L1的表达，并对免疫组化结果和患者的各种临床特征进行对比分析。结果 观察组中PD-1、PD-L1的阳性表达率分别为33.33%和52.78%，均明显高于对照组(P0.05)，但在低分化组和TNM期患者中PD-1，PD-L1表达的表达又明显升高(P0.05)。结论 三阴性乳腺癌中存在明显的PD-1，PD-L1高表达，并与分化程度和临床分期相关，检测PD-1，PD-L1的表达对三阴性乳腺癌的早期诊断有积极意义，可以将PD-L1信号通路作为三阴性乳腺癌治疗的新靶点进行研究。【关键词】三阴性乳腺癌；PD-L1；免疫治疗【中图分类号】R737.9【文献标识码】A DOI:10.3969/j.issn.1009-3257.2023.08.020Expression and Clinical Significance of PD-1 and PD-L1 in Triple-Negative Breast CancerCHEN Wei*,LI Si-rong,WEN Li-shan.Traditional Chinese Medicine of Meizhou Tian Ka-ping Hospital,Meizhou 514400,Guangdong Province,ChinaAbstract:Objective To investigate the expression and clinical significance of PD-1 and PD-L1 in triple-negative breast cancer.Methods 78 patients with breast cancer in our hospital from January 2020 to January 2021 were randomly included and divided into control group and observation group with 39 cases in each group according to immunohistochemical results.The control group was non-triple-negative breast cancer,and the observation group was triple-negative breast cancer.The breast cancer tissues surgically removed from patients were collected and PD-1 tissues were detected by immunohistochemical method.The expression of PD-L1 was analyzed,and the immunohistochemical results and various clinical characteristics of patients were compared.Results The positive expression rates of PD-1 and PD-L1 in the observation group were 33.33%and 52.78%,respectively,which were significantly higher than those in the control group(P0.05),but the expressions of PD-1 and PD-L1 were significantly increased in the poorly differentiated group and TNM stage III patients(P0.05)。纳入标准：符合中国癌症协会发布的中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2019版)中三阴性乳腺癌的诊断标准，并经病理组织学检查确诊。术前未进行放疗或化疗。排除标准：合并多种实体肿瘤。免疫系统功能障碍的患者。严重基础疾病，肝肾功能障碍者；伴有其他恶性肿瘤的患者。本研究获医院伦理委员会批准。1.2 实验方法 1.2.1 乳腺癌组织中PD-1、PD-L1表达水平 对手术切除的乳腺癌组织的PD-L1表达使用免疫组化的方法进行检测。具体方法：收集患者之前手术所取的用于病理检查的石蜡组织切片，石蜡组织切片进行脱蜡和水化使用二甲苯和乙醇，抗原修复使用柠檬酸盐修复液，完成抗原修复之后再使用过氧化氢溶液再次处理石蜡组织切片，加入兔抗人PD-L1及PD-1抗体进行孵育，孵育过后显色使用3，3-二氨基联苯胺，完成显色之后需要梯度酒精脱水并且干燥，还需要透明以及封固。使用高倍镜观察细胞膜和细胞质的染色情况。1.3 观察指标 PD-1、PD-L1表达水平的判定标准是：细胞膜和细胞质中出现棕黄色或者棕褐色的颗粒为细胞着色，细胞着色程度小于5%定义为阴性，细胞着色比例大于5%为定义为阳性，细胞着色比例是指在高倍镜下着色细胞数与总细胞数比值，随机选取50罕少疾病杂志 2023年8月 第30卷 第 8 期 总第169期5个视野进行计数，最终取平均值7。1.4 统计学方法 使用SPSS 20.0软件进行数据分析。计量资料组间比较选择t检验；计数资料组间比较选择2检验或Fisher确切概率法，P0.05)，但在低分化组和TNM 期患者中PD-1、PD-L1表达的表达又明显升高P0.05)，(表2)。图1 PD-1、PD-L1蛋白在三阴乳腺癌组织中的阳性表达(图1A：PD-1，图1B：PD-L1)。图2 PD-1、PD-L1蛋白在非三阴乳腺癌组织中的弱阳性表达(图2A：PD-1，图2B：PD-L1)。表1 两组PD-1、PD-L1蛋白表达情况的比较组别 例数 PD-1的表达 PD-L1的表达 阳性(例)阴性(例)阳性(例)阴性(例)观察组 39 13 26 19 20对照组 39 5 34 7 322值 5.034 6.543P 0.046 0.011表2 不同临床特征的三阴性乳腺癌患者乳腺癌组织中PD-1，PD-L1的表达情况临床特点 病例数 PD-1阳性率n(%)2值 P PD-L1阳性率n(%)2值 PTNM分期 期 15 3(20.00)6.321 0.000 6(40.00)4.231 0.010 期 24 10(41.66)13(54.16)组织学分化 中-高分化 17 4(23.52)7.165 0.000 7(41.17)8.233 0.000 低分化 22 9(40.90)12(54.54)淋巴结转移 无 26 9(34.61)2.154 0.055 13(50.0)2.669 0.058 有 13 4(30.77)6(46.15)绝经情况 是 20 6(30.00)1.256 0.121 10(50.00)1.235 0.336 否 19 7(36.84)9(47.37)年龄 36岁 7 3(42.86)0.366 0.052 3(42.86)1.874 0.451 36岁 32 10(31.25)16(50.00)1A1B2A2B3 讨 论乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，在我国，乳腺癌的发病率也逐年上升8。乳腺癌晚期可发生远处转移，出现其他器官的转移癌可危及生命。随着对乳腺癌的研究的深入，目前在乳腺癌早期诊断及治疗都取得了令人瞩目的成就，乳腺癌治疗的不断进步使乳腺癌成为治疗效果最好的肿瘤之一9。乳腺癌有多种分类方法，目前多种类型乳腺癌的治疗已经获得不菲的成就10。由于三阴性乳腺癌远处转移风险更高愈后较其他病理类型更差并且对常规的内分泌治疗及靶向治疗并不敏感，目前除系统的放化疗尚无其他更佳的治疗方法。NCCN进行的12000 名乳腺癌患者临床表现及治疗效果的研究显示，TNBC 患者比非TNBC患者2 年生存率、总体生存率更低11。所以寻找TNBC相关特异性分子有益于其早期诊断及治疗。PD-1/PD-L1作为近年来肿瘤免疫靶向治疗中的热门通路靶点，已被FDA批准用于多种肿瘤的治疗12。PD-1和PD-L1可以使肿瘤细胞获得免疫逃逸，而阻断PD-1/PD-L1通路可达抗肿瘤的目的，与放化疗相比，免疫治疗特异性更强，破坏性更低，具有更好的疗效及更少的并发症13。但是目前PD-1、PD-L1在三阴性乳腺癌治疗中的临床意义尚未明确，仍有很大的研究意义。本研究目的是探讨PD-L1在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义，为临床治疗提出指导。目前 PD-1表达水平的检测主要有：免疫组化、流式细胞术检测T细胞表面的PD-1、ELISA 法以及 RT-PCR等方法。本研究通过对病灶组织的PD-1/PD-L1进行免疫组化，免疫组化结果表明，观察组 PD-1的表达水平33.33%明显高于对照组的12.82%，PD-L1的表达水平43.58%明显高于对照组的17.94%。结果表明PD-L1与PD-1表达具有一致性，并且可以通过相应的靶向免疫治疗获益。同时还研究了PD-1，PD-L1的表达与临床特征关系，结果显示不同的TNM分期，组织学分级，年龄，绝经情况下PD-1，PD-L1表达的差异无统计学意义，提示PD-1，PD-L1可能与病情的进展无关,这与Qin14等的研究结果基本相一致。综上所述，三阴乳腺癌组织中存在明显的 PD-1/PD-L1通路蛋白表达上调，阻断PD-1/PD-L1通路蛋白可能对三阴乳腺癌的早期诊断和治疗效果评价有一定的临床意义。参考文献1Yu J,Qin B,Moyer AM,et al.DNA methyltransferase expression in triple-negative breast cancer predicts sensitivity to decitabineJ.J ClinInvest,2018,128(6):2376-23882中国抗癌协会乳腺癌专业委员会.中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2019版)J.中国癌症杂志,2019,29(8):609-680.3乳腺癌雌、孕激素受体免疫组织化学检测指南编写组.乳腺癌雌、孕激素受体免疫组织化学检测指南J.中华病理学杂志,2018,44(4):237-2394Ohaegbulam KC,Assal A,Lazarmolnar E,et al.Human cancer immunotherapy with antibodies to the PD-1 and PD-L1 pathwayJ.Trends Mol Med,2015,21(1):24-335Spranger S,Koblish HK,Horton B,et al.Mechanism of tumor rejection with doublets of CTLA-4,PD-1/PD-L1,or IDO blockade involves restored IL-2 production and proliferation of CD8+T cells directly within the tumor microenvironmentJ.J Immunother Cancer,2014,2:3.6Li X,Yang J,Peng L,et al.Triple-negative breast cancer has worse overall survival and cause-specific survival than non-triple-negative breast cancerJ.Breast Cancer Res Treat.2017,161(2):279-287 7ZHANG Li,LIU Fangfang,FU Li.Significance and evaluation method of interstitial infiltrating lymphocytes in breast cancerJ.Chin J Pathol,2016,45(4):282-284张丽,刘芳芳,付丽.肿瘤间质浸润淋巴细胞在乳腺癌中的意义及评价方法J.中华病理学杂志,2016,45(4):282-2848Qin BD,Jiao XD,Zang YS.Tumor mutation burden to tumor burden ratio and prediction of clinical benefit of anti-PD-1/PD-L1 immunotherapyJ.Med Hypotheses,2018,116:111-113.9Kim C,Gao R,Sei E,et al.Chemoresistance Evolution in Triple-Negative Breast Cancer Delineated by Single-Cell SequencingJ.Cell.2018,173(4):879-893.10张亚,彭成浩.免疫共刺激分子PD-1与PD-L1在乳腺癌中的表达及意义J.医学综述,2018,21(24):4547-454911骆丽,杨清麟,胡艳萍,等.PD-1及PD-L1在三阴性乳腺癌中差异性表达及与临床病理特征关系的研究J.现代肿瘤医学,2019,27(20):3628-363312Lin NU,Vanderplas A,Hughes ME,et al.Clinicopathologic features,patterns of recurrence,and survival among women with triple-negative breast cancer in the National Comprehensive Cancer NetworkJ.Cancer,2012,118(22):5463-5472.13Li X,Yang J,Peng L,et al.Triple-negative breast cancer has worse overall survival and cause-specific survival than non-triple-negative breast cancerJ.Breast Cancer Res Treat.2017,161(2):279-287.14Qin BD,Jiao XD,Zang YS.Tumor mutation burden to tu-mor burden ratio and prediction of clinical benefit of anti-PD-1/PD-L1 immunotherapyJ.Med Hypotheses,2018,116:111-113.(收稿日期：2021-07-25)(校对编辑：姚丽娜)