微生物的实验室培养(人教版).ppt

2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组课题目标：课题目标：1.1.了解了解有关微生物种类、培养方法和培养基有关微生物种类、培养方法和培养基的基础知识。的基础知识。2 2进行进行无菌技术的操作。无菌技术的操作。3 3进行微生物的培养。进行微生物的培养。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组生物技术实践：生物技术实践：微生物培养与利用：微生物培养与利用：利用微生物进行发酵生产特定的产物。利用微生物进行发酵生产特定的产物。生物学研究中的科学思想和一般方法：生物学研究中的科学思想和一般方法：设计可行的实验方案和实验装置设计可行的实验方案和实验装置 对简单的实验方案做出恰当的评价和修订对简单的实验方案做出恰当的评价和修订考试说明考试说明从近年情况看，这部分知识在各区的模从近年情况看，这部分知识在各区的模拟考查中多次涉及！尤其是关于拟考查中多次涉及！尤其是关于灭菌方法灭菌方法和和接种方法接种方法的选择是高频考点的选择是高频考点2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（一）微生物的类群（一）微生物的类群（1 1）原核生物界：例如细菌、蓝藻）原核生物界：例如细菌、蓝藻（2 2）真菌界：例如酵母菌）真菌界：例如酵母菌（3 3）原生生物界：例如草履虫、变形虫、）原生生物界：例如草履虫、变形虫、衣藻衣藻（4 4）病毒：例如艾滋病病毒、）病毒：例如艾滋病病毒、SARSSARS病毒病毒目前已经知道的微生物约有目前已经知道的微生物约有1010万种，分布在万种，分布在以下各界中：以下各界中：一、基础知识一、基础知识2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组材料一：如果将杆菌接入浓度为材料一：如果将杆菌接入浓度为0.2mol/L0.2mol/L的蔗糖的蔗糖等渗溶液和盛有玻璃珠的三角瓶中加以摇动，可等渗溶液和盛有玻璃珠的三角瓶中加以摇动，可以使细胞壁破裂，细胞内含物流出，这样就可以以使细胞壁破裂，细胞内含物流出，这样就可以得到细胞壁的空壳。空壳成杆状，而细胞内含物得到细胞壁的空壳。空壳成杆状，而细胞内含物却是圆的。却是圆的。材料二：如果将细菌用材料二：如果将细菌用溶菌酶溶菌酶处理，除去细胞壁，处理，除去细胞壁，并接入到低渗溶液中，这时没有细胞壁的细胞膜并接入到低渗溶液中，这时没有细胞壁的细胞膜就会破裂，原因是细胞过度吸水膨胀使细胞膜胀就会破裂，原因是细胞过度吸水膨胀使细胞膜胀裂。用纤维素酶和果胶酶处理则无此现象。裂。用纤维素酶和果胶酶处理则无此现象。（1 1）细菌的细胞壁）细菌的细胞壁2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组由材料分析细胞壁的功能？由材料分析细胞壁的功能？细菌细胞壁的主要功能：细菌细胞壁的主要功能：保护和维持细胞保护和维持细胞形状形状细菌细胞壁的主要成分：细菌细胞壁的主要成分：肽聚糖肽聚糖（1 1）细菌的细胞壁）细菌的细胞壁2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（2 2）细胞膜）细胞膜成分：成分：脂质脂质和和蛋白质蛋白质功能特性：功能特性：选择性透过性选择性透过性膜上含有膜上含有呼吸作用呼吸作用等能量代谢的酶系统，等能量代谢的酶系统，是细胞的产能场所，如可发生是细胞的产能场所，如可发生有氧呼吸有氧呼吸。(3)(3)拟核拟核(无成形的细胞核无成形的细胞核)含有含有一个一个DNADNA分子，分子，DNADNA分子不缠绕组蛋白，分子不缠绕组蛋白，不形成染色体不形成染色体2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌（4 4）细胞质）细胞质核糖体核糖体：蛋白质合成场所：蛋白质合成场所质粒质粒：小型环型：小型环型DNADNA，含有，含有抗药性抗药性基因、基因、固氮固氮基因、基因、抗生素抗生素 生成生成基因基因贮藏性颗粒贮藏性颗粒：淀粉粒、：淀粉粒、硫粒硫粒2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌（5 5）荚膜）荚膜作用：作用：防止细菌丢失水分；防止细菌丢失水分；防止被真核生物吞防止被真核生物吞噬；噬；防止噬菌体的侵袭。防止噬菌体的侵袭。成分：主要为水分、成分：主要为水分、多糖多糖、多肽、多肽2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2.2.细菌的结构细菌的结构 知识梳理：细菌知识梳理：细菌 某些细菌在其生长发育后期，在细胞内某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、形成一个圆形或椭圆形、厚壁厚壁、含水量极低含水量极低、抗逆性极强抗逆性极强的的休眠体休眠体，称为芽孢，称为芽孢(内生孢子）。内生孢子）。能够使细菌度过不良的环境。能够使细菌度过不良的环境。每一个细菌形每一个细菌形成一个芽孢，所以其成一个芽孢，所以其没有没有繁殖功能。繁殖功能。（6 6）芽孢）芽孢2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2.2.细菌的结构细菌的结构（6 6）芽孢）芽孢2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2.2.细菌的结构细菌的结构（7 7）鞭毛）鞭毛参与某些细菌运动参与某些细菌运动u荚膜、芽孢等荚膜、芽孢等不是不是细胞生活的必要结构，细胞生活的必要结构，但它对细菌在环境中的生存但它对细菌在环境中的生存有利有利。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组 知识梳理：细菌知识梳理：细菌3 3、细菌的繁殖：、细菌的繁殖：细菌的主要繁殖方式：细菌的主要繁殖方式：分裂生殖（二分裂）分裂生殖（二分裂）分裂中的链球菌分裂中的链球菌分裂中的大肠杆菌分裂中的大肠杆菌过程包括：过程包括：1 1、细胞增大、伸长、细胞增大、伸长2 2、DNADNA分子复制分子复制3 3、细胞中部的细胞膜和、细胞中部的细胞膜和细胞壁向内生长形成隔细胞壁向内生长形成隔膜，细胞质一分为二，膜，细胞质一分为二，形成二个子细胞形成二个子细胞2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组4.4.菌落菌落（高三考查较多）高三考查较多）（1 1）定义：是）定义：是单个或少数细菌单个或少数细菌在在固体培养基固体培养基上大量繁殖，形成肉眼可见具有一定形态结上大量繁殖，形成肉眼可见具有一定形态结构的构的子细胞群体子细胞群体。举例：有荚膜细菌：菌落光滑。举例：有荚膜细菌：菌落光滑。S S型型 无荚膜细菌：菌落粗糙。无荚膜细菌：菌落粗糙。R R型型（2 2）特征：表现在菌落的）特征：表现在菌落的大小、形状、光泽大小、形状、光泽度、颜色、硬度透明度度、颜色、硬度透明度等方面。等方面。（3 3）功能：菌落特征是）功能：菌落特征是鉴别菌种鉴别菌种的重要依据的重要依据 知识梳理：细菌知识梳理：细菌2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组p如何培养细胞微生物（大肠杆菌）？如何培养细胞微生物（大肠杆菌）？p如何培养病毒（噬菌体）？如何培养病毒（噬菌体）？u思考：思考：用特定的培养基用特定的培养基用特定的活宿主细胞用特定的活宿主细胞标记标记3535S S的噬菌体的噬菌体用含用含3535S S培养基培养细菌培养基培养细菌用用3535S S物质配制培养基物质配制培养基用噬菌体侵染含用噬菌体侵染含3535S S的细菌的细菌3232P P3232P P3232P P3232P P2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u细胞微生物细胞微生物要利用要利用培养基培养基可以培养，但由可以培养，但由于于病毒病毒（非细胞微生物）是营专性寄生生活（非细胞微生物）是营专性寄生生活的生物，只能利用的生物，只能利用活细胞培养活细胞培养。u由于病毒对寄主的选择有专一性，因此在由于病毒对寄主的选择有专一性，因此在培养不同的病毒时，所利用的活细胞类型要培养不同的病毒时，所利用的活细胞类型要不同。不同。u植物病毒要用植物细胞培养，噬菌体就要植物病毒要用植物细胞培养，噬菌体就要用细菌培养，而流感病毒（动物病毒）一般用细菌培养，而流感病毒（动物病毒）一般都用鸡胚细胞培养。都用鸡胚细胞培养。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基1.1.培养基概念：培养基概念：人工配制人工配制的用于培养微生物（或动物、植的用于培养微生物（或动物、植物的细胞、组织）的物的细胞、组织）的营养物质营养物质。2.2.培养基的成分：培养基的成分：微生物的元素组成：微生物的元素组成：C C、H H、O O、N N、P P、S S营养来源：自然界中的无机物、有机物营养来源：自然界中的无机物、有机物微生物生长需要的物质微生物生长需要的物质营养要素营养要素 (碳源、氮源、无机盐、水碳源、氮源、无机盐、水)2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（1 1）碳源）碳源n概念：能为微生物提供所需碳元素的营养概念：能为微生物提供所需碳元素的营养 物质，需要量物质，需要量最大最大。n种类：种类：无机碳源无机碳源 COCO2 2、NaHCONaHCO3 3 有机碳源有机碳源(有机物有机物)糖类糖类、脂肪酸等、脂肪酸等 有机物；有机物；(天然成分混合物天然成分混合物)花生粉饼花生粉饼 石油等石油等l常用的碳源：常用的碳源：糖类（尤其是糖类（尤其是葡萄糖葡萄糖）2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（1 1）碳源）碳源n功能：功能：构成微生物的细胞质和一些代谢产物；构成微生物的细胞质和一些代谢产物；异养微生物异养微生物主要能源物质主要能源物质2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考：思考：糖类（葡萄糖）；花生粉饼等糖类（葡萄糖）；花生粉饼等1.1.大肠杆菌，硝化细菌，蓝细菌，乳酸菌分大肠杆菌，硝化细菌，蓝细菌，乳酸菌分别选用哪种碳源？别选用哪种碳源？2.2.实验室培养微生物和工业生产微生物代谢实验室培养微生物和工业生产微生物代谢产物时，分别选用哪种碳源？产物时，分别选用哪种碳源？糖类，二氧化碳，二氧化碳，糖类糖类，二氧化碳，二氧化碳，糖类2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（2 2）氮源）氮源n概念：能为微生物提供所需氮元素的营养概念：能为微生物提供所需氮元素的营养 物质物质n种类：种类：无机氮源：无机氮源：N N2 2、NHNH3 3、铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、尿素；尿素；有机氮源：有机氮源：牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组l常用的氮源：常用的氮源：铵盐、硝酸盐铵盐、硝酸盐自养型自养型生物生物-绿色植物绿色植物(铵盐、硝酸盐铵盐、硝酸盐)异养型异养型生物生物-动物、大量异养微生物动物、大量异养微生物 （“含含C C、H H、O O、N”N”的有机物常是的有机物常是异养异养微生物微生物的的能源、碳源兼氮源能源、碳源兼氮源）(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：（2 2）氮源）氮源n功能：合成功能：合成蛋白质蛋白质、核酸核酸以及含氮的代谢以及含氮的代谢 产物产物2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组p培养根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分培养根瘤菌、大肠杆菌、硝化细菌时分别需要哪一类氮源？别需要哪一类氮源？u思考：思考：N N2 2，铵盐或硝酸盐，铵盐或硝酸盐，NHNH3 32011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基2.2.培养基的成分：培养基的成分：u注意：关于能源物质注意：关于能源物质自养型：自养型：光能自养：太阳光光能自养：太阳光 化能自养：无机物（氧化放能）化能自养：无机物（氧化放能）【例例】硝化细菌硝化细菌 氨的氧化氨的氧化异养型：异养型：有机物（氧化分解放能）有机物（氧化分解放能）（3 3）水）水（4 4）无机盐）无机盐2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考思考p若乳酸菌、根瘤菌、固氮蓝藻、硝化细菌若乳酸菌、根瘤菌、固氮蓝藻、硝化细菌混合在一起，我们配制什么样的培养基可以混合在一起，我们配制什么样的培养基可以将三种微生物分离？将三种微生物分离？碳源碳源氮源氮源能源能源(物质物质)乳酸菌乳酸菌根瘤菌根瘤菌固氮蓝藻固氮蓝藻硝化细菌硝化细菌光能光能糖类等含糖类等含碳有机物碳有机物N N2 2有机物有机物 COCO2 2铵盐、硝酸盐、铵盐、硝酸盐、有机氮有机氮糖类等含糖类等含碳有机物碳有机物有机物有机物氨氨氨氨COCO2 2N N2 22011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基3.3.满足微生物生长的条件：满足微生物生长的条件：培养基除培养基除要提供上述几种主要营养物质外，要提供上述几种主要营养物质外，还还满足微生物生长的满足微生物生长的 pH pH、特殊营养物质特殊营养物质 和和氧气氧气 等要求。等要求。pHpH：真菌：真菌 5.06.0 细菌细菌 6.57.5 放线菌放线菌 7.58.52011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基3.3.满足微生物生长的条件：满足微生物生长的条件：特殊营养物质特殊营养物质 n概念：微生物生长不可缺少的概念：微生物生长不可缺少的微量有机物微量有机物 n添加原因添加原因：微生物自身：微生物自身缺乏合成这些物质缺乏合成这些物质的酶的酶或或合成能力有限合成能力有限n种类：各种种类：各种维生素维生素、氨基酸氨基酸、碱基碱基等等n功能：功能：酶酶、核酸核酸的组成成分的组成成分n例如：培养乳酸菌时需要添加例如：培养乳酸菌时需要添加维生素维生素n但不是所有的微生物培养时都需要外源添但不是所有的微生物培养时都需要外源添加。加。生长因子生长因子2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基4.4.培养基的配制培养基的配制原则：原则：（1 1）目的明确选材料（代谢特征、用途）目的明确选材料（代谢特征、用途）（2 2）营养协调）营养协调 （注意营养物质的（注意营养物质的浓度浓度和和比例比例）（3 3）pHpH适宜适宜2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基（1 1）按物理性质划分：）按物理性质划分：5.5.培养基的种类：培养基的种类：u（固体、半固体培养基需添加（固体、半固体培养基需添加凝固剂凝固剂，如如琼脂琼脂；两者的差别是添加量的；两者的差别是添加量的多、少多、少）液体培养基液体培养基半固体半固体培养基培养基固体培养基固体培养基（用于工业生产）（用于工业生产）（用于观察微生物的运动、（用于观察微生物的运动、鉴定菌种）鉴定菌种）（用于微生物的（用于微生物的分离、计数分离、计数）微生物在其表面生长可形成菌落微生物在其表面生长可形成菌落2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：（2 2）按化学成分划分：）按化学成分划分：合成合成培养基培养基 天然天然培养基培养基 用化学成分已知的化合物用化学成分已知的化合物配制配制含化学成分不明的天然物含化学成分不明的天然物质，如酵母膏质，如酵母膏前者前者常用于实验室中对微生物的常用于实验室中对微生物的分类、鉴分类、鉴别；别；后者后者常用于常用于大规模工业生产大规模工业生产。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组进行选择培养可以进行选择培养可以增增加所需目的菌的浓度加所需目的菌的浓度(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：选择培养基：选择培养基：鉴别培养基：鉴别培养基：加入加入某化学物质某化学物质，以，以抑制抑制不需要的微生物不需要的微生物的生长，的生长，促进促进所需要微生物的生长。所需要微生物的生长。加入某种加入某种指示剂或化学药品指示剂或化学药品配制而成的，配制而成的，用以用以鉴定鉴定不同种类的微生物。不同种类的微生物。特定菌种显色，特定菌种显色，其他菌种其他菌种不受抑制不受抑制、但不显色。、但不显色。（3 3）按用途划分：）按用途划分：（作用：（作用：分离微生物、分离微生物、进行选择培养进行选择培养）（作用：（作用：鉴别微生物鉴别微生物）2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组青霉素青霉素抗青霉素基因抗青霉素基因选择培养基选择培养基在基因工程中，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选在基因工程中，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组伊红美蓝伊红美蓝鉴别培养基鉴别培养基A AA AB BB BC CC CD DD D大肠杆菌大肠杆菌在在伊红美蓝伊红美蓝培养基上菌落呈现培养基上菌落呈现黑色黑色 2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u常见的选择培养基举例：常见的选择培养基举例：（1 1）添加：）添加：青霉素青霉素 ：抑制细菌、放线菌抑制细菌、放线菌保留（分离）真菌，如霉菌、酵母菌保留（分离）真菌，如霉菌、酵母菌高浓度高浓度NaClNaCl：抑制多种细菌，：抑制多种细菌，分离分离金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：（3 3）按用途划分：）按用途划分：2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u常见的选择培养基举例：常见的选择培养基举例：（2 2）缺少：）缺少：培养基培养基缺少有机碳源缺少有机碳源分离分离自养型微生物自养型微生物（利用（利用COCO2 2 ）培养基培养基缺少氮源缺少氮源分离分离固氮微生物固氮微生物（利用（利用N N2 2 ）(二二)微生物培养基微生物培养基5.5.培养基的种类：培养基的种类：（3 3）按用途划分：）按用途划分：2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（三）无菌技术（三）无菌技术1.1.获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键(目的）是目的）是 防止外防止外来杂菌的入侵来杂菌的入侵 。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（三）无菌技术（三）无菌技术2.2.无菌技术包括：无菌技术包括：（1 1）对实验操作空间、操作者的衣着和手）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行进行 清洁和消毒清洁和消毒 ；（2 2）将培养器皿、接种用具和培养基等器）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行具进行 灭菌灭菌 ；（3 3）为避免周围微生物污染，实验操作应）为避免周围微生物污染，实验操作应在在 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 旁进行；旁进行；（4 4）避免已灭菌处理的材料用具与）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物周围物品品 相接触。相接触。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考思考p无菌技术除了防止培养物被污染外，还具无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？有什么目的？有效避免操作者自身被微生物感染有效避免操作者自身被微生物感染u思考：思考：p消毒和灭菌的区别？哪一个更彻底？消毒和灭菌的区别？哪一个更彻底？p什么时候需要消毒，什么时候需要灭菌？什么时候需要消毒，什么时候需要灭菌？2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组消毒消毒是指使用较为温和的物理或化学方法是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的仅杀死物体表面或内部的部分微生物营养体部分微生物营养体（不包括（不包括芽孢和孢子芽孢和孢子）。）。灭菌灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内是指使用强烈的理化因素杀死物体内外外所有的微生物所有的微生物，包括芽孢和孢子。，包括芽孢和孢子。灭菌灭菌效果更彻底，用于各种效果更彻底，用于各种金属、金属、玻璃器玻璃器具具。消毒消毒用于各种用于各种实验操作空间、操作者的实验操作空间、操作者的衣衣着和手着和手。（三）无菌技术（三）无菌技术2.2.无菌技术包括：无菌技术包括：2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（三）无菌技术（三）无菌技术3.3.消毒方法：消毒方法：（1 1）日常生活经常用到的是）日常生活经常用到的是 煮沸煮沸 消毒法；消毒法；（2 2）对一些不耐高温的液体，则使用）对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏巴氏 消毒法，如牛奶。消毒法，如牛奶。（3 3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，等溶液以增强消毒效果，然后使用然后使用 紫外线紫外线 进行物理消毒。进行物理消毒。（4 4）实验操作者的双手使用）实验操作者的双手使用70%70%酒精酒精 进行消进行消毒。毒。（5 5）饮水水源用）饮水水源用 氯气氯气 进行消毒。进行消毒。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（三）无菌技术（三）无菌技术4.4.灭菌方法：灭菌方法：（1 1）灼烧灼烧灭菌法：用于金属用具（灭菌法：用于金属用具（接种环、接种环、接种针接种针）、）、试管口和瓶口试管口和瓶口的灭菌；的灭菌；2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（三）无菌技术（三）无菌技术4.4.灭菌方法：灭菌方法：（2 2）干热干热灭菌法：用于玻璃器皿、金属用具灭菌法：用于玻璃器皿、金属用具的灭菌的灭菌 ，所用设备是，所用设备是 干热灭菌箱干热灭菌箱 ；160170，12小时小时2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（三）无菌技术（三）无菌技术4.4.灭菌方法：灭菌方法：（3 3）高压蒸汽高压蒸汽灭菌法：用于灭菌法：用于培养基、无菌水、培养基、无菌水、玻璃器皿等的灭菌玻璃器皿等的灭菌 ，所用设备是，所用设备是 高压蒸汽高压蒸汽灭菌锅灭菌锅 。高压灭菌锅高压灭菌锅121121，100kPa100kPa，15-3015-30分钟分钟2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组【补充补充】消毒和灭菌的比较（见消毒和灭菌的比较（见5+35+3P.263P.263表）表）2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组二、实验操作二、实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨（一）制备牛肉膏蛋白胨固体固体培养基培养基1.1.计算：计算：2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：加水定容，调加水定容，调pHpH4.4.灭菌：灭菌：5.5.倒平板：（或搁置斜面）倒平板：（或搁置斜面）包好再高压蒸汽灭菌（包好再高压蒸汽灭菌（121121，100100kPakPa，15-3015-30分钟）。斜面培养基需先分钟）。斜面培养基需先分装分装，加，加棉塞棉塞，再包好、灭菌。，再包好、灭菌。培养基冷却到培养基冷却到5050 ，酒精灯火焰酒精灯火焰旁操作。旁操作。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组称量称量2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组调调pHpH2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组培养基分装培养基分装2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组1/51/52011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组加棉塞加棉塞2/32/32011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组包扎包扎灭菌灭菌2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组搁置斜面搁置斜面斜面不超过试管总长的斜面不超过试管总长的1/21/22011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组倒平板倒平板夹夹倒倒灼灼倒倒2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考：思考：（1 1）培培养养基基灭灭菌菌后后，需需要要冷冷却却到到5050左左右右时时，才能用来倒平板。可用才能用来倒平板。可用_的办法估计培养基的温度。的办法估计培养基的温度。（2 2）为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？）为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？灼烧灭菌，防止瓶口被微生物污染。灼烧灭菌，防止瓶口被微生物污染。感觉盛有培养基感觉盛有培养基的锥形瓶不烫手的锥形瓶不烫手2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组(3)(3)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也较高，将平板倒后的培养基表面的湿度也较高，将平板倒置，置，既可以使培养基表面的水分更好地挥既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。u思考：思考：2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考：思考：(4)(4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？用来培养微生物吗？为什么？不能；空气中的微生物可能在皿盖与皿底不能；空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。之间的培养基上滋生。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组【提醒关于斜面培养的问题提醒关于斜面培养的问题】l配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是目的是保持通气并防止杂菌感染保持通气并防止杂菌感染。l试管培养基形成斜面的作用是试管培养基形成斜面的作用是增大接种增大接种面积面积。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：1.1.纯化培养技术：纯化培养技术：自然环境中，微生物混在一起生长，要想自然环境中，微生物混在一起生长，要想纯培养，首先要纯培养，首先要将单个细胞与其他细胞分离将单个细胞与其他细胞分离开，进而培养成可见的群体（即菌落）开，进而培养成可见的群体（即菌落）。2.2.常见接种方法：常见接种方法：（高频考点）（高频考点）平板划线法平板划线法：主要用于纯化培养主要用于纯化培养稀释涂布平板法稀释涂布平板法：主要用于分离菌种并计数主要用于分离菌种并计数2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：其他接种方法：其他接种方法：斜面接种、穿刺接种斜面接种、穿刺接种这些技术的操作方法各不相同，但其这些技术的操作方法各不相同，但其核心都是：核心都是：_防止杂菌污染，保证培养物的纯度防止杂菌污染，保证培养物的纯度2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：2.2.常见接种方法：常见接种方法：(1)(1)平板划线法：平板划线法：通过接种环在通过接种环在固体固体培养基表面培养基表面连续划线连续划线操操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在表面。在数次划线数次划线后培养，可分离到由后培养，可分离到由一个一个细胞细胞繁殖而来的菌落。繁殖而来的菌落。此法此法主要用于主要用于纯化培养纯化培养接种环接种环2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组模拟平板划线：模拟平板划线：1 12 23 34 45 52011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组 平板划线平板划线2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：2.2.常见接种方法：常见接种方法：(1)(1)平板划线法：平板划线法：p接种过程中哪些步骤保证了无菌操作？接种过程中哪些步骤保证了无菌操作？对接种环、瓶对接种环、瓶(皿皿)口及时进行灼烧灭菌；口及时进行灼烧灭菌；迅速进行操作；迅速进行操作；将划线后的平板倒置。将划线后的平板倒置。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考思考为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环吗？为什么？第一步灼烧：第一步灼烧：消灭接种环上的微生物避免污染培消灭接种环上的微生物避免污染培养物；养物；每次划线前灼烧：每次划线前灼烧：为了杀死上一次划线结束后，为了杀死上一次划线结束后，接种环残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的接种环残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。便得到菌落。操作结束后灼烧：操作结束后灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境及感染操作者。免细菌污染环境及感染操作者。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考思考在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？避免接种环温度太高，杀死菌种避免接种环温度太高，杀死菌种在作第二次及其后的划线操作时，为什么在作第二次及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组（二）纯化大肠杆菌：（二）纯化大肠杆菌：2.2.常见接种方法：常见接种方法：(2)(2)稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：将将菌液菌液进行进行一系列的梯度稀释一系列的梯度稀释后，分别涂后，分别涂布到布到固体固体培养基表面。稀释度足够高时，能培养基表面。稀释度足够高时，能培养出培养出单个菌落单个菌落。主要用于主要用于分离菌种并计数分离菌种并计数。涂布器涂布器2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组n系列稀释系列稀释9ml 稀释液稀释液1ml9ml 稀释液稀释液1ml10-110-29ml 稀释液稀释液9ml 稀释液稀释液9ml 稀释液稀释液9ml 稀释液稀释液1ml1ml1ml1ml10-310-410-510-62011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组n涂布平板涂布平板滴滴灼灼试试涂涂2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组u思考：思考：对涂布器、瓶对涂布器、瓶(皿皿)口及时进行灼烧灭菌；口及时进行灼烧灭菌；吸管头不要接触任何物体；吸管头不要接触任何物体；在火焰周围迅速操作。在火焰周围迅速操作。p接种过程中如何进行无菌操作？接种过程中如何进行无菌操作？2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组三、结果分析与评价三、结果分析与评价u思考：思考：若将接种后的培养基和一个未接种的培养基若将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放在都放在37 37 恒温箱中，培养一天，观察到如恒温箱中，培养一天，观察到如下结果，请分析可能的原因。下结果，请分析可能的原因。1.1.在培养时，培养皿是否需要倒置？在培养时，培养皿是否需要倒置？需要需要2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组三、结果分析与评价三、结果分析与评价未接种培养基的作用未接种培养基的作用是是对照对照，应该没有菌，应该没有菌落生长，落生长，若有菌落若有菌落，说明培养基灭菌不彻底说明培养基灭菌不彻底或被污染或被污染。2.2.未接种的培养基表面有菌落生长，说明了未接种的培养基表面有菌落生长，说明了什么？什么？2011201220112012学年学年 171171中学高三生物备课组中学高三生物备课组三、结果分析与评价三、结果分析与评价3 3在培养基上观察到了不同形态的菌落，在培养基上观察到了不同形态的菌落，可能的原因是？可能的原因是？不同的