微生物限度标准2005课件.ppt

一、一、2005年版微生物限度标准的控制项目年版微生物限度标准的控制项目杂菌数：细菌数、霉菌和酵母菌数。杂菌数：细菌数、霉菌和酵母菌数。控制菌（致病菌）：大肠埃希菌、大肠菌控制菌（致病菌）：大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌。球菌、梭菌。l l二、二、2005年版微生物限度标准的制订原则年版微生物限度标准的制订原则l20002000年版：细菌数、酵母菌数和霉菌数按剂型制订；年版：细菌数、酵母菌数和霉菌数按剂型制订；控制菌（致病菌）按给药途径制订。控制菌（致病菌）按给药途径制订。20052005年版：均按给药途径制订。年版：均按给药途径制订。制制定定原原则则：非非无无菌菌药药品品的的微微生生物物限限度度标标准准是是基基于于药药品品的给药途径、及对患者健康潜在的的给药途径、及对患者健康潜在的危害而制订的。危害而制订的。修修订订理理由由：同同一一剂剂型型有有不不同同的的给给药药途途径径；新新的的剂剂型型不不断出现；国外药典的限度标准制订原则统一。断出现；国外药典的限度标准制订原则统一。三、三、2005年版微生物限度标准的应用年版微生物限度标准的应用本版药典明确指出本版药典明确指出:药品的生产、贮存、销药品的生产、贮存、销售过程中的检验，原料及辅料售过程中的检验，原料及辅料(中药提取物中药提取物)的检验，新药标准制订、进口药品标准复的检验，新药标准制订、进口药品标准复核、考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，核、考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。其微生物限度均以本标准为依据。3.局部给药制剂局部给药制剂用于手术、烧伤及严重损伤的局部给药制剂用于手术、烧伤及严重损伤的局部给药制剂用于表皮或黏膜不完整的含药材原粉的局部给药制剂用于表皮或黏膜不完整的含药材原粉的局部给药制剂用于表皮或黏膜完整的含药材原粉的局部给药制剂用于表皮或黏膜完整的含药材原粉的局部给药制剂眼部给药制剂眼部给药制剂耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂耳、鼻及呼吸道吸入给药制剂阴道、尿道给药制剂阴道、尿道给药制剂直肠给药制剂直肠给药制剂其它局部给药制剂其它局部给药制剂l含动物组织（包括提取物提取物)及动物类原药材及动物类原药材（蜂蜜、王浆、动物角、阿胶除外）的口服给（蜂蜜、王浆、动物角、阿胶除外）的口服给药制剂：每药制剂：每10g或或10ml还不得检出沙门。有兼还不得检出沙门。有兼用途径的制剂，应符合各给药途径的标准。用途径的制剂，应符合各给药途径的标准。霉变、长螨者以不合格论。霉变、长螨者以不合格论。原料（中药原料（中药提取物）及敷料，参照相应制剂的提取物）及敷料，参照相应制剂的微生物限度标准执行。微生物限度标准执行。五、2005版制剂通则项下的 微生物限度要求2005版化学药制剂通则项下的微生物限度要求版化学药制剂通则项下的微生物限度要求无菌检查：注射剂、植入剂*、冲洗剂*。无菌检查及微生物限度检查：软膏剂、乳膏剂*、糊剂*、眼用制剂、气雾剂、喷雾剂、散剂、耳用制剂、鼻用制剂*、凝胶剂*、洗剂、灌肠剂*。微生物限度检查：局部用片剂*、酊剂*、栓剂*、糖浆剂*、膜剂*、粉雾剂、口服溶液剂、口服混悬剂、口服乳剂、搽剂、涂剂*、涂膜剂*、贴剂*。原则性要求：丸剂、口服片剂、胶囊剂、颗粒剂。新增的无菌检查化学药品制剂新增的无菌检查化学药品制剂鼻用制剂：用于手术或创伤的鼻用制鼻用制剂：用于手术或创伤的鼻用制剂剂。凝胶剂：用于严重创伤的凝胶剂。凝胶剂：用于严重创伤的凝胶剂。乳膏剂：用于烧伤或严重创伤的乳膏乳膏剂：用于烧伤或严重创伤的乳膏剂。剂。l2005版中药制剂通则项下的微生物限度要求版中药制剂通则项下的微生物限度要求无菌检查：注射剂。无菌检查及微生物限度检查：散剂*、软膏剂*、眼用制剂*、鼻用制剂*、气雾剂*、喷雾剂*。微生物限度检查：丸剂、颗粒剂、片剂、锭剂、煎膏剂、胶剂、糖浆剂、贴膏剂*、合剂、滴丸剂、胶囊剂、酒剂、酊剂、流浸膏剂、浸膏剂、凝胶剂*、露剂、茶剂、搽剂*、洗剂*、涂膜剂*、栓剂。不要求：膏药新增的无菌检查中药制剂新增的无菌检查中药制剂散剂：用于烧伤或严重创伤的外用散散剂：用于烧伤或严重创伤的外用散剂剂。软膏剂：用于烧伤或严重创伤的软软膏剂：用于烧伤或严重创伤的软膏剂膏剂。眼用制剂：用于伤口的眼用制剂。眼用制剂：用于伤口的眼用制剂。鼻用制剂：用于严重创伤的鼻用制鼻用制剂：用于严重创伤的鼻用制剂。剂。气雾剂、喷雾剂：用于烧气雾剂、喷雾剂：用于烧伤或严重创伤的气雾剂、喷雾剂。伤或严重创伤的气雾剂、喷雾剂。l2005版三部制剂通则项下的微生物版三部制剂通则项下的微生物限度要求限度要求无菌检查：注射剂、外用溶液剂、灌洗无菌检查：注射剂、外用溶液剂、灌洗剂。微生物限度检查：剂。微生物限度检查：片剂*、栓剂、胶囊剂*、散剂、颗粒剂*、气雾剂。无菌检查或微生物限度检查：软膏剂、无菌检查或微生物限度检查：软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、喷雾剂、眼用制剂、乳膏剂、凝胶剂、喷雾剂、眼用制剂、鼻用制剂。鼻用制剂。l六、品种项下的微生物限度要求 敷料：乳糖、淀粉、糊精、玉米、精致玉米油等。纯化水：微生物限度检查微生物限度检查取本品，采用薄膜过取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录滤法处理后，依法检查（附录XIJ），细菌、），细菌、霉菌、和酵母菌总数每霉菌、和酵母菌总数每1mL不得过不得过100个。个。注注射用水：微生物限度检查射用水：微生物限度检查取本品至少取本品至少200mL，采用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录，采用薄膜过滤法处理后，依法检查（附录XIJ），细菌、霉菌、和酵母菌总数每），细菌、霉菌、和酵母菌总数每100mL不得过不得过10个。个。l微生物限度检查法微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受微生物污染程度的方法，检查项目包括染菌量及控制菌检查。起草的指导思想起草的指导思想:完善检查法完善检查法.增加试验的可操作性增加试验的可操作性.使方法更具科学性，保证检验使方法更具科学性，保证检验结果的准确性结果的准确性.微生物限度检查法微生物限度检查法 增、修订内容（增、修订内容（1）-总则总则操作环境洁净度：100级单向流空气区域，环境10000级。定期检测:医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌、和沉降菌的测试方法。霉菌、酵母菌培养温度为2328。细菌培养温度为3035。结果报告：以1g、1ml、10g、10ml 或10cm2为单 位报告。增、修订内容（增、修订内容（2）-检验量检验量随机抽取不少于检验量（两个以上最小包装单位）的3倍。贵重、微量样品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加 10g或10ml。增、修订内容（增、修订内容（3）-供试液制备供试液制备表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。供试液的体积：100ml。非水溶性供试品：增加“十四烷酸异丙酯法”。结肠溶制剂供试品：用pH7.6无菌磷酸盐缓冲液溶解。增、修订内容（增、修订内容（4）灭菌灭菌培养基及稀释剂等灭菌:采用验证合格的灭菌程序进行灭菌。增、修订内容（增、修订内容（5）稀释剂稀释剂稀释剂：稀释剂：pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲溶液蛋白胨缓冲溶液pH6.8pH6.8无菌磷酸盐缓冲液无菌磷酸盐缓冲液 pH7.6pH7.6无菌磷酸盐缓冲液无菌磷酸盐缓冲液 增、修订内容（增、修订内容（6）-细菌、霉菌细菌、霉菌及酵母菌计数及酵母菌计数计数方法：平皿法、计数方法：平皿法、薄膜过滤法。薄膜过滤法。目的目的：增加试验方法的完整性、保证检验结：增加试验方法的完整性、保证检验结果的可果的可靠性。靠性。何时验证何时验证：建立供试品的微生物限度检查法：建立供试品的微生物限度检查法时；供试品的组分或原检验条件发生改变时；供试品的组分或原检验条件发生改变可能可能影响检验结果时影响检验结果时。试验菌株：试验菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、枯草杆菌。色念珠菌、黑曲霉、枯草杆菌。细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证证菌液制备菌液制备:5050100cfu/ml100cfu/ml。验证方法：验证方法：试验组、菌液组、供试品对照试验组、菌液组、供试品对照 组、稀释剂对照组。组、稀释剂对照组。结果判断：结果判断：供试品组的菌回收率、对照组的供试品组的菌回收率、对照组的 菌回收率。均不低菌回收率。均不低70%70%。细菌、霉菌、酵母菌计数细菌、霉菌、酵母菌计数-平皿法平皿法培养时间培养时间霉菌和酵母菌计数霉菌和酵母菌计数菌数报告规则菌数报告规则细菌、霉菌、酵母菌计数细菌、霉菌、酵母菌计数-薄膜过滤法薄膜过滤法方法方法菌数报告规则菌数报告规则增、修订内容（增、修订内容（7）-控制菌检查控制菌检查沙门菌检查法：用培养基直接制成供试液沙门菌检查法：用培养基直接制成供试液进行增菌培养。进行增菌培养。大肠菌群检查法大肠菌群检查法梭菌检查法梭菌检查法控制菌检查法的验证目的：目的：增加试验方法的完整性保证检验结果的可靠性。增加试验方法的完整性保证检验结果的可靠性。何时验证：何时验证：建立供试品的微生物限度检查法时；供试建立供试品的微生物限度检查法时；供试品组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时品组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时。试验菌株：试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。阴性菌对照菌株阴性菌对照菌株控制菌检查法的验证菌液制备菌液制备:5050100cfu/ml100cfu/ml。验证方法：验证方法：试验组、阴性菌对照组。试验组、阴性菌对照组。结果判断：结果判断：试验组应检出、阴性菌对试验组应检出、阴性菌对照组不得检出。照组不得检出。微生物限度检查法l检验量检检验验量量即即一一次次试试验验所所用用的的供供试试品品量量（g、ml或或cm2）。）。一般应随机抽取不少于检验用量（两个一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的以上最小包装单位）的3倍量供试品。倍量供试品。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为50cm2；化学膜剂为50cm2贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或10ml。供试液的制备供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试品制备方法1.液体供试品液体供试品2.固体供试品固体供试品3.特殊供试液制备方法特殊供试液制备方法（1）非水溶性供试品）非水溶性供试品司盘80十四烷酸异丙酯 （2）非水溶性膜剂供试品非水溶性膜剂供试品l肠溶及结肠溶供试品肠溶及结肠溶供试品l气雾剂、喷雾剂供试品气雾剂、喷雾剂供试品 （3）具抑菌活性的供试品具抑菌活性的供试品当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌活性后，再依法检查。常用的方法有：加大培养基量稀释法离心沉淀集菌法薄膜过滤法中和法细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证1、计数方法的验证、计数方法的验证当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认该计数方法的可靠性。若供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，应进行计数方法可靠性的再验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。菌种菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），以保证试验菌株的生物学特性。应采用适宜的保存技术，防止试验菌株发生变异。方法验证方法验证lCPBPUSPJP菌株大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠球菌黑曲霉大肠埃希菌金黄色葡萄球菌白色念珠球菌枯草芽孢杆菌大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠球菌黑曲霉大肠埃希菌金黄色葡萄球菌沙门菌加入菌量（cfu)50100100105-106103检验方法中和法平皿法稀释法离心沉淀法薄膜过滤法中和法平皿法稀释法薄膜过滤法中和法平皿法稀释法薄膜过滤法平皿法稀释法平板表面涂抹法薄膜过滤法菌液制备菌液制备菌液制备菌液制备用无菌0.9%氯化钠溶液制成每1ml含50100cfu的菌悬液和50100cfu的孢子悬液。菌种培养基培养温度（）培养时间（h）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠球菌黑曲霉营养肉汤培养基改良马丁培养基353723281824244857（天）黑曲霉菌液的制备新鲜培养的黑曲霉斜面中加入35ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数5000cfu的孢子悬液。验证方法验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。试验组：平皿计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液，加入50100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株菌平行制备2个平板，按菌落计数方法测定其菌数。薄膜过滤法计数时，应在最后一次的冲洗液中加入试验菌。菌液组：测定所加的试验菌数。供试品对照组：测定供试品本底菌数。稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化，中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50100cfu。结果判定结果判定在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组、试验组的回收率均不低于70%，若任一次试验中回收率低于70%，应采用稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新验证。验证试验可与供试品的细菌，霉菌及酵母菌计数同时进行。检查法检查法计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。取按已验证方法制备的均匀供试液或原药液，用pH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲溶液蛋白胨缓冲溶液稀释成1102、1103等稀释级。平皿法平皿法薄膜过滤法薄膜过滤法阴性对照试验阴性对照试验培养和计数培养和计数控制控制菌检查菌检查控制菌检查方法的验证控制菌检查方法的验证当建立药品的微生物限度检查法时，应进行控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于供试品的控制菌检查。若供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，检查方法应重新验证。验证时，依各供试品微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应验证的菌株，验证大肠菌群检查法时，应采用大肠埃希菌作为验证菌株。按供试液的制备和控制菌检查法的规定及下列要求进行。菌液制备菌液制备菌液制备菌液制备用无菌0.9%氯化钠溶液制成每1ml含10100cfu的菌悬液菌种培养基培养温度（）培养时间（h）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌生孢梭菌营养肉汤硫乙醇酸盐流体35371824 验证方法验证方法试验组：取规定量供试液及10100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。当采用薄膜过滤法时，试验菌应加在最后一次冲洗液中，冲洗后，接入增菌培养基中。阴性菌对照试组：设立阴性菌对照试是为了验证该控制菌检查方法的特异性，控制菌检查方法的特异性，方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠群、沙门菌检查法时的群、沙门菌检查法时的阴性菌对照采用金黄色球菌，验证铜绿假单胞菌、金黄色球菌、梭菌检查法时的阴检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。大肠埃希菌。阴性对照菌不的检出。结果判断阴性菌对照组不得检出阴性菌。若试验组检出试验菌，按此供试液制备方法和控制菌检查法进行控制菌检查；若试验组检未出试验菌，应采取有效方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。验证试验也可与供试品的控制菌检查同时进行。结果判断结果判断1、供试品检出控制菌或其它致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。2、供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数。3、眼用制剂检出霉菌和酵母菌时，须以两次复试结果均不得长菌，方可判供试品的霉菌和酵母菌数符合该品种项下的规定。4、若供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种的规定，判供试品不符合规定。大肠埃希菌大肠埃希菌lCPBPUSPJP方法MUG法IMVICIMVICIMVIC检验量（g或ml）1111稀释剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液pH7.6磷酸盐缓冲液pH6.8pH6.8无菌磷酸盐缓冲液无菌磷酸盐缓冲液乳糖肉汤培养基乳糖液体培养基乳糖液体培养基预增菌+增菌胆盐乳糖35371824hMUG.524hMac肉汤43451824h乳糖液体培养基35371824hEC液体培养基45+-0.224h分离EMB琼脂平版35371824hMac琼脂平版43451824hEMB、Mca琼脂平版35372448hEMB琼脂平版3524h生化试验+铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌lCPBPUSPJP检验量（g或ml）1110稀释剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液pH7.6磷酸盐缓冲液pH6.8pH6.8无菌磷酸盐缓冲液无菌磷酸盐缓冲液pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液pH7.2磷酸盐缓冲液大豆蛋白消化培养基增菌胆盐乳糖35371824h大豆蛋白消化培养基353724h大豆蛋白消化培养基353724484h分离溴化铵十六烷基三甲基琼脂培养基35371824h溴化铵十六烷基三甲基琼脂培养基溴化铵十六烷基三甲基琼脂培养基生化试验+金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌lCPBPUSPJP检验量（g或ml）11101稀释剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液pH7.6磷酸盐缓冲液pH6.8pH6.8无菌磷酸盐缓冲液无菌磷酸盐缓冲液pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液大豆蛋白消化培养基SCD增菌营养肉汤(或含亚碲酸钾培养基35371824h大豆蛋白消化培养基353724h大豆蛋白消化培养基353724484hSCD30352448h分离甘露醇氯化钠琼脂平板卵黄氯化钠琼脂平板353724724hBP琼脂平板353724484h甘露醇氯化钠琼脂平板BP琼脂平板353724484h7.5%SCD琼脂平板353724484h凝固酶试验+沙门菌沙门菌lCPBPUSPJP检验量（g或ml）10101010稀释剂乳糖肉汤培养基乳糖液体培养基乳糖液体培养基增菌营养肉汤培养基35371824h乳糖肉汤培养基3537524h乳糖液体培养基35372448h乳糖液体培养基30352472h二次增菌TTB液体培养基35371824hTTB液体培养基424318244hSC、TTB液体培养基353724484hTTB液体培养基35371224h分离EMB、MacDHL（或沙门、志贺菌属琼脂）平板35371824hDC、XLD琼脂平板43452448hBG、XLD、BC琼脂平板35372448hXLD及亚硫酸铋琼脂平板、亮绿琼脂平板、30352448h生化试验+梭菌梭菌l检验量（g或ml）10ml（相当于供试品1gml)2份稀释剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液增菌0.1%新鲜疱肉100ml0.1%新鲜疱肉100ml36180保温10分钟迅速冷却7296h3617296h分离含庆大霉素的哥伦比亚琼脂平板3614872h生化试验过氧化氢酶梭菌的检验程序梭菌的检验程序供试品供试液10ml(相当于供试品1g、1ml)8010min迅速冷却|100ml0.1%疱肉培养基3537厌氧7296h产气、碎肉消化恶臭不产气、无消化碎肉，无恶臭0.2ml涂抹含庆大霉素的哥伦比亚琼脂平板3537厌氧4872h报告有菌落生长无菌落生长过氧化氢酶试验，镜检报告过氧化氢酶阴性，革兰阳性梭菌非左述反应报告检出报告未检出大肠菌群大肠菌群l方法试管法检验量（g或ml）0.1、0.01、0.001稀释剂pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液增菌胆盐乳糖10m3支分离EMB琼脂（麦康凯琼脂）平版确认试验乳糖发酵大肠菌群最可能数 大肠菌群检查程序供试液10ml胆盐乳糖发酵管35371824h不产酸、不产气产酸、产气大肠菌群阴性曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板报告35371824h无典型菌落革兰阴性无芽孢杆菌报告乳糖发酵管35371824h产气不产气大肠菌群阳性大肠菌群阴性报告报告 表3大肠菌群最可能数表各供试品量的检出结果最可能的大肠菌群数N（个/g或ml）0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml0.001g或0.001ml+103+-102N103+-1N102-10注：+检出大肠菌群。未检出大肠菌群。根据大肠菌群的检出管数，按表3报告1g或1ml供试品的大肠菌群数。l菌种的保存菌种的保存对微生物实验来说菌种是特殊的标准品对微生物实验来说菌种是特殊的标准品应给予相同于化学标准品的管理（溯源应给予相同于化学标准品的管理（溯源性、质量的原始性）外，还有安全性方性、质量的原始性）外，还有安全性方面的管理。面的管理。l菌种的收集、贮藏、保存、确认试验的菌种的收集、贮藏、保存、确认试验的记录。记录。1.溯源性溯源性(菌种的来源菌种的来源)：药品微生物实：药品微生物实验室的标准菌种应来自中国药品生物照验室的标准菌种应来自中国药品生物照片检定所医学菌种保藏中心（片检定所医学菌种保藏中心（ChinaMedicalCultureCollectionCMCC）系列。或美国药典收载的美国菌种保藏系列。或美国药典收载的美国菌种保藏中心（中心（AmericanTypeCultureCollectionATCC）系列等国际法定）系列等国际法定菌种保藏中心。菌种保藏中心。l2.菌种的质量控制：对选择性培养基菌种的质量控制：对选择性培养基上培养的典型菌落进行鉴定。形态、上培养的典型菌落进行鉴定。形态、染色镜检、纯度、必要时应做生化染色镜检、纯度、必要时应做生化鉴定试验，一旦出现偏差，应做进鉴定试验，一旦出现偏差，应做进一步的调查，所有被确认受到污染一步的调查，所有被确认受到污染或变异的菌种应及时销毁，不得用或变异的菌种应及时销毁，不得用于常规实验用。于常规实验用。l3.菌种管的标签要求；菌种管的标签要求；名称、编名称、编号、代数、有效期、制备日期号、代数、有效期、制备日期菌种记录：名称、编号、来源、菌菌种记录：名称、编号、来源、菌落形态特征、培养特性、生化与血落形态特征、培养特性、生化与血清学鉴定、传代数、培养基及培养清学鉴定、传代数、培养基及培养条件、保藏方法、贮存条件及保藏条件、保藏方法、贮存条件及保藏库址。库址。l4.菌种保藏方法有多种，但对不同的菌种保藏方法有多种，但对不同的微生物应通过保藏试验来选择最适微生物应通过保藏试验来选择最适宜保藏方法。一般多用琼脂斜面低宜保藏方法。一般多用琼脂斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、干燥温保藏法、液体石蜡保藏法、干燥沙土保藏方法、冷冻真空保藏法、沙土保藏方法、冷冻真空保藏法、浓氮超低温保藏法等。浓氮超低温保藏法等。l琼脂斜面低温保藏方法实验室多琼脂斜面低温保藏方法实验室多采用此法一般在采用此法一般在4保存。铜绿假单保存。铜绿假单孢菌在室温保存。孢菌在室温保存。l液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法本法是用石蜡将培本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理、养物与空气隔绝，以降低菌种的生理、升化水平，延长菌种保藏时间。升化水平，延长菌种保藏时间。方法：液体石蜡方法：液体石蜡121高压灭菌高压灭菌30min或或110-170烘箱烘箱1-2h干燥去掉水分。干燥去掉水分。取经培养的高层半固体菌管加入石蜡，取经培养的高层半固体菌管加入石蜡，高出培养基面高出培养基面1cm为宜，放入为宜，放入4保藏。保藏。l冷冻真空保藏法冷冻真空保藏法保护剂多种多用保护剂多种多用脱脂牛奶。将牛奶煮沸、静止、冷脱脂牛奶。将牛奶煮沸、静止、冷却除去上面一层脂肪，重复却除去上面一层脂肪，重复3次用脱次用脱脂面过滤，脂面过滤，113高压灭菌高压灭菌30min，接入菌种，培养后低温、冷冻、真接入菌种，培养后低温、冷冻、真空干燥置空干燥置-35保存。保存。