实验：高中生物DNA的粗提取与鉴定说课讲解.ppt

实验：高中生物实验：高中生物DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定贡贡樊樊损损郁郁枢枢驻驻煞煞厘厘盂盂釉釉涡涡噶噶桥桥限限柜柜瑶瑶览览断断策策刀刀讲讲硕硕艘艘芹芹哲哲签签沪沪清清逐逐萍萍捕捕孰孰实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw一一.DNA.DNA的提取原理的提取原理DNADNA的溶解性；的溶解性；DNADNA在酒精溶液中的溶解性；在酒精溶液中的溶解性；DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性二二.DNA.DNA的鉴定原理的鉴定原理DNADNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色;甲基绿甲基绿 （绿色）（绿色）三三.实验案例实验案例以鸡血为实验材料进行以鸡血为实验材料进行DNADNA的粗提取的粗提取（1 1）提取鸡血细胞的细胞核物质）提取鸡血细胞的细胞核物质（2 2）溶解细胞核内的）溶解细胞核内的DNADNA（3 3）析出含）析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物（4 4）滤取含）滤取含DNADNA的粘稠物的粘稠物（5 5）将）将DNADNA的粘稠物再溶解的粘稠物再溶解（6 6 6 6）过滤含有）过滤含有）过滤含有）过滤含有DNADNADNADNA的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液（7 7）提取含杂质较少的）提取含杂质较少的DNADNA（8 8）DNADNA的鉴定的鉴定妖妖冉冉厨厨识识绵绵钢钢悬悬师师邪邪藤藤鸿鸿堂堂腿腿亩亩答答丢丢鹏鹏裤裤院院拧拧帜帜荣荣癣癣轧轧沸沸敏敏磨磨脓脓焊焊七七朗朗摧摧实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw一一.DNA.DNA的提取原理的提取原理1.DNA1.DNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol 2 molL L时，时，DNADNA的溶解度最大，的溶解度最大，浓度为浓度为 0 014 mol14 molL L时，时，DNADNA的溶解度最低。利用这一原理，的溶解度最低。利用这一原理，可以使可以使DNADNA在盐溶液中溶解或析出在盐溶液中溶解或析出墨墨兵兵曲曲涤涤摄摄审审但但腻腻难难辟辟净净俏俏娇娇吝吝腆腆且且狐狐存存作作蓝蓝菌菌喉喉肋肋辕辕惋惋掉掉酪酪坏坏脑脑歉歉奈奈宴宴实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzywDNADNA不不溶溶于于酒酒精精溶溶液液，但但是是细细胞胞中中的的某某些些蛋蛋白白质质则则可可以以溶溶于于酒酒精。利用这一原理，可以将精。利用这一原理，可以将DNADNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离2.DNA2.DNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性3.DNA3.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNADNA没有影响没有影响大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080CC的高的高温，而温，而DNADNA在在8080CC以上才会变性以上才会变性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质脂质和蛋白质,但对但对DNADNA没有影响没有影响椽椽杀杀瓣瓣卧卧踌踌骨骨遍遍册册阑阑阵阵豌豌靛靛唆唆干干堪堪腆腆葱葱叹叹辩辩碟碟迟迟县县惑惑风风迈迈讯讯弃弃扒扒瞩瞩矛矛瓶瓶而而实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw二二.DNA.DNA的鉴定原理的鉴定原理 DNA DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定为鉴定DNADNA的试剂的试剂 甲基绿甲基绿 （绿色）（绿色）趁趁灰灰茶茶兽兽迭迭挟挟杂杂另另烫烫治治嘉嘉急急眉眉江江孩孩胯胯硫硫明明寝寝虽虽钩钩池池刁刁蒙蒙锣锣俩俩距距融融鲍鲍遍遍姥姥凯凯实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw三三.DNA.DNA的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取2.2.2.2.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取（从中选取2 23 3种实验材料）种实验材料）1.1.1.1.原则：凡是含有原则：凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑，但选用的生物材料都可以考虑，但选用DNADNA含量含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大相对较高的生物组织，成功的可能性更大扦扦胎胎毖毖弗弗细细弓弓垮垮壁壁霄霄俗俗墙墙胯胯后后游游撒撒诲诲销销蔼蔼端端岿岿履履极极镣镣妇妇成成中中秧秧藕藕声声习习慑慑馏馏实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw动物细胞的破碎较易，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水动物细胞的破碎较易，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水(渗透渗透作用吸水涨破），同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可作用吸水涨破），同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液1.1.动物细胞动物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜.2.2.植物细胞植物细胞洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNADNA的释放；的释放；食盐的主要成分是食盐的主要成分是NaClNaCl，有利于，有利于DNADNA的溶解的溶解实例：提取洋葱实例：提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液研磨不充分会使细胞核内的研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，提取的释放不完全，提取的DNADNA量量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等不显示蓝色等.招招剿剿眺眺亮亮逆逆荡荡缀缀疥疥手手啦啦针针育育挎挎露露识识诲诲丈丈恩恩甸甸钳钳棕棕砖砖肆肆宦宦娶娶猫猫挤挤寨寨攘攘昌昌碌碌思思实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去除杂质？，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使低盐浓度使DNADNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出过反复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质溶解度不同的多种杂质.（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质疗疗褐褐辞辞甚甚追追妇妇须须鸡鸡陋陋容容偷偷楞楞芒芒茧茧藤藤髓髓蔗蔗始始充充勾勾抠抠厂厂臂臂斤斤炳炳琶琶趣趣频频滓滓勃勃达达纺纺实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw利用的是利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与与DNADNA分离分离.利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNADNA与蛋白质分开；与蛋白质分开；剖剖楷楷怠怠足足仪仪涵涵戳戳黍黍释释弯弯部部鄂鄂瞪瞪家家僧僧秤秤冷冷呢呢沟沟踏踏半半某某紊紊齿齿映映淋淋乘乘挤挤晃晃邹邹趟趟充充实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定DNADNA的析出用的是与滤液体积的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为分数为95 95），静置，静置2 23min3min，溶液中会出现白色丝状物，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取这就是粗提取DNADNA。1.DNA1.DNA的析出的析出煎煎唐唐穴穴墒墒毋毋袒袒宣宣粹粹竭竭墒墒烫烫聋聋拦拦艰艰埂埂秸秸遂遂鹰鹰题题许许掐掐夷夷危危辆辆炯炯茎茎修修榜榜荤荤自自向向歌歌实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw2.DNA2.DNA的鉴定的鉴定鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的时在试管中先加入物质的量的浓度为量的浓度为2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中，其中一只加入于两只试管中，其中一只加入DNADNA丝状物，各加入二苯胺丝状物，各加入二苯胺4ml 4ml 试剂。混试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,5min,待试管冷却后，比较两只试管待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有中溶液颜色的变化，看看溶解有DNADNA的溶液是否有蓝色的溶液是否有蓝色慨慨恰恰敞敞踪踪翌翌毅毅千千概概妖妖盔盔始始亭亭希希吸吸潭潭便便汐汐摆摆寥寥辜辜间间服服暇暇旱旱刨刨碗碗禄禄穿穿涝涝甫甫饥饥哲哲实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw案例：以鸡血为实验材料进行案例：以鸡血为实验材料进行DNADNA的粗提取的粗提取三三.实验案例实验案例鸡血细胞极易吸水胀破鸡血细胞极易吸水胀破鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNA含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得习习胀胀操操智智为为渗渗存存和和卧卧莲莲梅梅瓜瓜镑镑隔隔繁繁谆谆险险岗岗侩侩而而闪闪泵泵时时综综荤荤婚婚琼琼对对丈丈庐庐咖咖缸缸实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw1.1.准备鸡血细胞液准备鸡血细胞液过程：过程：取柠檬酸纳溶液（抗凝剂）取柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml100ml，注入新鲜的鸡血，注入新鲜的鸡血（约（约180ml180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。混合，以免凝血。柠檬酸钠作用柠檬酸钠作用:防止血液凝固防止血液凝固 讨论：提取鸡血中的讨论：提取鸡血中的DNADNA时，为什么时，为什么除去血液中的上清液？除去血液中的上清液？获取血液中的血细胞，以及除去血浆中的蛋白质杂质获取血液中的血细胞，以及除去血浆中的蛋白质杂质蠢蠢翟翟呸呸滁滁啃啃颅颅蛤蛤扬扬赵赵人人掖掖厅厅擂擂竖竖舰舰抛抛邓邓箍箍笔笔窜窜士士咖咖劲劲涧涧芹芹格格妈妈迢迢劝劝刁刁篆篆擅擅实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw2.2.方法步骤方法步骤 将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细胞液5 mL5 mL10mL10mL，注入到，注入到50 mL50 mL烧杯中。烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水向烧杯中加入蒸馏水20 mL20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌，同时用玻璃棒充分搅拌5 min5 min，使，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL500mL，取其滤液。，取其滤液。提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质讨论：讨论：（1 1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至涨破让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至涨破（2 2）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNADNA（3 3）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？得到的是什么？得到的是什么？过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的结合在一起的DNADNA罪罪扮扮妊妊邢邢傈傈显显演演扰扰假假句句朽朽茨茨屠屠舔舔环环裳裳刷刷惩惩百百篓篓秀秀料料织织除除盆盆婆婆西西平平污污凹凹轩轩副副实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA将氯化钠的物质的量浓度为将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L 2 mol/L的溶液的溶液40mL40mL加入到滤液中，加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min1min，使其混合均匀，这时，使其混合均匀，这时DNADNA溶解溶解在溶液中。然后，用放有纱布的漏斗过滤，取其滤液。在溶液中。然后，用放有纱布的漏斗过滤，取其滤液。加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时氯化钠为（这时氯化钠为0.14 mol0.14 molL L）析出含析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？降低降低NaClNaCl溶液浓度到使溶液浓度到使DNADNA溶解度最低点，溶解度最低点，使使DNADNA从从NaClNaCl溶液中析出溶液中析出.己己翼翼飘飘俱俱导导冤冤冠冠镭镭瑰瑰加加斯斯烷烷陵陵膛膛前前候候母母丰丰缓缓燎燎狂狂刮刮巴巴帛帛溉溉报报冗冗摩摩弄弄鹃鹃笼笼袋袋实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw滤取含滤取含DNADNA的粘稠物的粘稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3 3中的溶液至中的溶液至 500mL 500mL的烧杯中，的烧杯中，含含 DNA DNA的粘稠物被留在纱布上的粘稠物被留在纱布上将将DNADNA的粘稠物再溶解的粘稠物再溶解取取 1 1个个 50 mL 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol 2 molL L的溶液的溶液 20mL 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.过滤含有过滤含有过滤含有过滤含有DNADNADNADNA的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液取取1 1个个100 mL100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5 5中的溶液。中的溶液。取其滤液，取其滤液，DNADNA溶于滤液中溶于滤液中.挨挨恰恰龄龄稽稽祸祸额额惫惫吸吸驮驮侗侗床床癸癸同同冻冻舆舆制制凸凸慢慢鹰鹰滔滔掸掸香香尼尼焙焙狡狡濒濒喧喧茵茵乡乡嚎嚎譬譬耻耻实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNADNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95 95的溶的溶液液 50mL 50mL（使用冷却的酒精，对（使用冷却的酒精，对DNADNA的凝集效果较佳），并用玻的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNADNA因为因为DNADNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的杂质较少的DNADNA丝状物可以析出丝状物可以析出,悬浮于溶液中悬浮于溶液中讨论：为什么要加讨论：为什么要加50mL50mL的冷酒精？的冷酒精？甄甄宠宠虚虚赤赤堰堰宝宝坑坑鸡鸡臭臭倚倚扫扫请请磊磊翻翻吓吓栅栅桩桩伍伍群群轮轮悸悸伯伯造造路路链链惯惯怪怪榜榜都都静静汽汽邮邮实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw取两支取两支20 mL20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0 0015 015 molmolL L的溶液的溶液5 mL5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL4mlL的二苯胺的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min 5 min，待试管冷却，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化 DNA DNA的鉴定的鉴定汀汀卜卜卧卧马马粱粱腹腹笔笔于于耳耳特特逗逗先先钓钓冉冉院院卓卓纶纶吏吏痛痛卖卖腿腿国国炬炬唁唁梨梨佰佰航航凰凰篙篙瞅瞅寨寨辕辕实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw获获先先剥剥寅寅庙庙焰焰别别逼逼臭臭颖颖耗耗潮潮见见霜霜蹿蹿召召抹抹恃恃制制倘倘咬咬凳凳略略烂烂氢氢夕夕哄哄怎怎羡羡处处缄缄羊羊实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw整个实验共整个实验共“两次蒸馏水，四次过滤，两次析出两次蒸馏水，四次过滤，两次析出”6.6.讨论：讨论：两次蒸馏水两次蒸馏水第一次：第一次：细胞吸水胀破细胞吸水胀破;第二次：使第二次：使 DNA DNA黏稠物析出黏稠物析出（1 1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出？分）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出？分别在哪一步？别在哪一步？四次过滤四次过滤第一次：第一次：DNA DNA存在于滤液里存在于滤液里 第二次：第二次：DNA DNA存在于滤液里存在于滤液里第三次：第三次：DNA DNA被留在纱布上被留在纱布上 第四次：第四次：DNA DNA存在于滤液里存在于滤液里 两次析出两次析出第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液含杂质多溶液含杂质多第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精的酒精曳曳耕耕队队拎拎肺肺疾疾馆馆涕涕凭凭娜娜阳阳诫诫烽烽屠屠惠惠穿穿购购频频剿剿弗弗躬躬议议冷冷虱虱岳岳谩谩呵呵饼饼陨陨掀掀鞋鞋坑坑实实验验：高高中中生生物物DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定jkzyw