地龙药材中黄曲霉毒素B_%281%29、B_%282%29、G_%281%29、G_%282%29的含量检测.pdf
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1、化学工程师Sum335No.8ChemicalEngineerDO1:10.16247/ki.23-1171/tq.20230834分析测试2023年第8 期地龙药材中黄曲霉毒素B1、B2、G I、G 2 的含量检测*李正刚1,程焱1,王丹或1,赵艳,马或1(1.四平市食品药品检验所,吉林四平136 0 0 0 2.吉林省药品检验研究院,吉林长春130 0 0 0)摘要:目的建立超声萃取免疫亲和柱净化柱后光化学衍生法高效液相色谱法同时测定地龙药材中黄曲霉毒素B1、B2、G 1、G 2 含量的测定方法。方法样品粉碎过12 0 目筛后,采用7 0%甲醇超声处理30 min,经免疫亲和柱净化、高效液
2、相色谱分离、光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定4种黄曲霉毒素的含量。结果线性范分别为:黄曲霉毒素B:0.01040.0520ng(r=0.9 9 9 9)黄曲霉毒素B20.00380.0190ng(r=0.9998)、黄曲霉毒素Gl0.01080.0540ng(r=0.9 9 9 8)、黄曲霉毒素G20.00380.0190ng(r=0.9 9 9 8),线性关系良好。检出限分别为0.43、0.15、0.43、0.15gkg。回收率在9 0.42 9 9.47%之间,RSD3.2%(n=6)。结论该方法操作简便,灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于地龙中黄曲霉毒素含量的测定。关键词:超声提取;
3、免疫亲和柱;光化学衍生;黄曲霉毒素;地龙中图分类号:R286.0LI Zheng-gang,CHENG Yan,WANG Dan-yu,zZHAO Yan,MA Yui(1.Siping Institute for Food and Drug Control,Siping 13600,Chinai2.jilin Institutes for Drug Control,Changchun 130000,China)Abstract:OBJECTIVE To establish HPLC method for the simultaneous determination of aflatoxin
4、Bi,B2,Giand G2 in Pheretima by ultrasonic extraction-immunoaffinity column clean-up and post-column photochemicalderivatization.METHOD The sample was crushed and passed through a 120-mesh sieve and extracted with 70%methanol for tiirty minutes and purification by immunoaffinity columns,aflatoxin Bi,
5、B2,Gi and G,in samples wereanlyzed by HPLC-FLD with post-column photochemical derivatization.RESULTS The linearity of aflatoxin Bi wasat 0.01040.0520ng(r=0.9999),aflatoxin B2 was at 0.00380.0190ng(r=0.9998),Aflatoxin Gi was at 0.01080.0540ng(r=0.9998),Aflatoxin G2 was at 0.00380.0190ng(r=0.9998),the
6、 detection limits were 0.43、0.15、0.43.0.15g kg-,respectively.The recoveries ranged from 90.42%to 99.47%with the RSD 3.2%(n=6).CONCLUSION The method is simple,sensitive,reproducible and accurate,This method is suitable for thedetermination ofAFinPheretima,Key words:ultrasonic extraction;immunoaffinit
7、y column;photochemical derivatization;aflatoxin;Pheretima黄曲霉毒素主要包括黄曲霉毒素B1、B2、G i、G 2,是目前已知最强致癌物之一1。其毒性远高于氰化物、重金属及有害元素等,对人类健康危害极大12.31。当微量持续摄人,可造成慢性中毒、生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。当摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞收稿日期:2 0 2 2-0 6-0 4基金项目:吉林省地方中药炮制规范(No.JLPZGF-2020-052)作者简介:李正刚(19 8 2-),男,医药工程师,2 0 0 6 年毕业于沈阳药
8、科大学中药学专业,硕士研究生,研究方向:药品检验和质量控制研究。通信作者:马或(19 7 1-),男,主任药师,硕士研究生,研究方向:药品检验和质量控制研究。文献标识码:ADetection of aflatoxins Bi,Bz,Gi,G2 in Pheretima materials*脂肪变性和胆管增生14,51。根据被检测样品的基质性质、检测仪器设备情况以及检测时限要求等,黄曲霉毒素有多种检测分析方法,包括酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、胶体金快速定量法、实时荧光PCR方法、高效液相色谱串联质谱法等 6,7 1,但以上方法均需要多种分析试剂及仪器,操作复杂,并且如质谱分析仪器多为进口国外
9、产品,价格较为昂贵,因此,开发更加简便快捷、低成本的方法仍然是现阶段分析工作者需要努力解决的问题。地龙为钜蚓科动物参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓或栉盲环毛蚓的干燥体。具有清热定惊、通络、平喘、利尿的功效。前3种习称“广地龙”,后1种2023年第8 期习称“沪地龙”。临床常用于高热神昏、惊痫抽搐、关节痹痛、肢体麻木、半身不遂、肺热喘咳、水肿尿少等病症的治疗。地龙保存不当非常容易出现黄曲霉毒素超标。本文建立了超声提取-免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生,高效液相色谱-荧光检测法进行多产地、多批次地龙药材中黄曲霉毒素B1、B2、G 1、G 2 的含量测定。经方法学验证,该方法操作简便、灵敏度高、重复性
10、好、结果准确,所用仪器简单,可用于地龙中黄曲霉毒素含量的测定。1实验部分1.1仪器AgilentLC1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);AgilentLC1260II型荧光检测器(美国安捷伦科技有限公司);KRC-25型光化学柱后衍生器(青岛普瑞邦生物工程有限公司);KQ-350VDB型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);PriboFastIAC免疫亲和柱(青岛普瑞邦生物科技有限公司)。1.2玄药材和试剂黄曲霉毒素(AF)混合对照品溶液(BI、B2、G I、G 2标示浓度分别为1.0 4gmL-1、0.38 gmL-1、1.0 8 gmL-1、0.38 gmL-1),批
11、号:6 10 0 0 1-2 0 2 0 0 6,来源为中国食品药品检定研究院。NaCI(AR上海国药化学试剂公司);甲醇(色谱纯美国赛默飞世尔科技有限公司);实验用水为超纯水。本次收集到不同产地和批次的地龙药材共10批,基本信息见表1。表1地龙药材样品基本信息Tab.1Basic information of Pheretima samples药材编号产地广地龙海南DL1DL2DL3DL4DL5DL6DL7DL8DL9DL10李正刚等:地龙药材中黄曲霉毒素B1、B2、G I、G 2 的含量检测*仪器工作条件色谱柱:Agilent ZORBAX SB-Ci。(5m,504.6mm);流动相:甲
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