CD13、CD33在BCR-ABL%2b急性淋巴细胞白血病患者骨髓中的表达及其与临床特征和预后的相关性.pdf
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1、phagy by oncogenes and tumor suppressor genesJ.Cell DeathDiffer,2009,16(1):87-93.13 HOPKINS BD,FINE B,STEINBACH N,et al.A secreted PTENphosphatase that enters cells to alter signaling and survivalJ.Science,2013,341(6144):399-402.14NAZIRI H,TAHAMTAN A,DADMANESH M,et al.Antitumoreffects of HPV DNA vac
2、cine adjuvanted with Beclin-1 as an au-tophagy inducer in a mice modelJ.Iran Biomed J,2019,23(6):388-394.15 RAHMATI M,EBRAHIM S,HASHEMI S,et al.New insights onthe role of autophagy in the pathogenesis and treatment of melano-maJ.Mol Biol Rep,2020,47(11):9021-9032.(编校:张西敏)CD13、CD33 在 BCR-ABL+急性淋巴细胞白血
3、病患者骨髓中的表达及其与临床特征和预后的相关性胡忠利1,杨艳丽1,张平平1,潘少君21蚌埠医学院第一附属医院血液科,安徽 蚌埠 233003;2上海交通大学转化医学研究院,上海 200240【摘要】目的:探讨髓系抗原 CD13、CD33 在 BCR-ABL+急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中的表达及其与临床特征和预后的相关性。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(real timequantitative-polymerase chain reaction,RQ-PCR)检测 119 例初诊 ALL 患者骨髓 BCR-ABL 表达水平
4、。用流式细胞学检查检测 ALL 的抗原表达水平。对照分析单纯 BCR-ABL+患者中 CD13+和 CD13-以及 CD33+和CD33-患者在初次诱导缓解率(initial-induction remission rate,CR1)和总生存率(overall survival rate,OS)的区别。结果:在 BCR-ABL+的 ALL 患者中,初诊时 CD13+患者较 CD13-患者具有较低的首次诱导缓解率,差异具统计学意义(P 0.05),但 CD33+患者较 CD33-患者首次诱导缓解率无统计学差异。CD13+组及CD33+的 OS 显著低于 CD13-组及 CD33-组(P 0.05
5、)。结论:BCR-ABL+ALL 患者中 CD13+及 CD33+提示预后不良。【关键词】急性淋巴细胞白血病;BCR-ABL;CD13;CD33;总生存率【中图分类号】R733 【文献标识码】A DOI:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.09.026【文章编号】1672-4992-(2023)09-1720-06Expression of CD13 and CD33 in bone marrow of patients with BCR-ABL+acute lym-phoblastic leukemia and their correlation with clini
6、cal features and prognosisHU Zhongli1,YANG Yanli1,ZHANG Pingping1,PAN Shaojun21Department of Hematology,the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College,Anhui Bengbu 233003,China;2School of BiomedicalEngineering,Shanghai Jiao Tong University,Shanghai 200240,China.【Abstract】Objective:To invest
7、igate the expression of myeloid antigens CD13 and CD33 in bone marrow of pa-tients with BCR-ABL+acute lymphoblastic leukemia and their correlation with clinical features and prognosis.Methods:RQ-PCR was used to detect the expression level of BCR-ABL in bone marrow of 119 patients with newlydiagnosed
8、 ALL,and the expression level of ALL antigen was detected by flow cytometry.The difference betweenCD13+and CD13-and CD33+and CD33-patients in CR1 and OS was analyzed.Results:In ALL patientswith BCR-ABL+,CD13+patients had a lower initial-induction remission rate than CD13-patients at initial diag-nos
9、is,and the difference was statistically significant(P 0.05),but there was no significant difference in the initial-induction remission rate between CD33+patients and CD33-patients.The OS of CD13+and CD33+groups were sig-nificantly lower than that of CD13-and CD33-groups(P 20%作为阳性。ALL 流式细胞图可见 CD45 阴性
10、到弱阳性区异常细胞增生明显,该群细胞表达 CD10、CD19、CD20、cCD22、CD24、CD33、CD34、CD38、HLA-DR,见图 2。1271现代肿瘤医学 2023 年 05 月 第 31 卷第 09 期 MODERN ONCOLOGY,May 2023,VOL 31,No 09图 2 BCR-ABL+ALL 流式细胞图R4 标注的粉红色细胞群为异常增生的原始幼稚细胞群。Fig.2 Flow cytometric analysis of BCR-ABL+acute lymphoblastic leukemia cellsR4 is the abnormally prolifera
11、ting primitive naive cell population.1.3.3 BCR-ABL(P190/P210/P230)基因的检测通过TRIzol提取物完成细胞的总 RNA 提取,并在-80 的温度下储存以用作备用。解冻上述 TRIzol 溶解后得到的白细胞,解冻完成后,需要用氯仿、异丙醇、DEPC-H2O+75%乙醇处理,并在 DEPC-H2O 中溶解至适当的浓度。制备 RNA 样品并在 MX3000 聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)仪器上扩增。同时定量检测标准参考品即看家基因 ABL 的绝对拷贝数,检测确定 P190、P210、P230
12、 的相对表达量(目的基因的绝对拷贝数与看家基因 ABL 绝对拷贝数的比值乘以十的二次方)。实时荧光定量 PCR 扩增曲线如下,见图 3。1.3.4 染色体核型检测骨髓细胞采用短期培养法,热变性 Giemsa R 条带法制备,中期细胞平均数为 15 20 个。核型分析符合国际人类细胞遗传学命名系统(ISCN1995)的规定。BCR-ABL+ALL染色体可见 9 号与 22 号染色体易位,如图 4,黑色箭头所示。1.4 统计学方法运用 SPSS 17.0 软件实现数据处理,针对本次研究所获得的部分计数资料应该通过 2检验,实现双侧检验,检验水准为:=0.05,P 0.05 为差异有统计学意义。BC
13、R-ABL数值分析采用秩和检验,P 0.05 示差异有统计学意义。采用 Kaplan-Meier 法绘制生存曲线,计算总生存率(overallsurvival rate,OS),并进行log-rank检验。检验水准 =0.05。图 3 BCR-ABL 基因实时荧光定量 PCR 检测扩增曲线图取 BCR-ABL 标准品,浓度值为:1 103(蓝线),1 104(红线),1 105(绿线),1 106(黄线),获取如上图所示荧光参数,绘制 BCR-ABL 标准曲线。Fig.3The amplification curve of BCR-ABL gene detected by RQ-RCRThe
14、fluorescence parameters were obtained by taking BCR-ABL standardsample with concentration values of 1 103(blue line),1 104(redline),1 105(green line),1 106(yellow line),and drawing BCR-ABL standard curve.2 结果BCR-ABL 基因也可在急性 混合表型 白 血 病(mixed2271胡忠利,等 CD13、CD33 在 BCR-ABL+急性淋巴细胞白血病患者骨髓中的表达及其与临床特征和预后的相关
15、性acute phenotype leukemia,MPAL)中表达,MPAL 的诊断标准如下。髓系:MPO 阳性或单核细胞分化标志(NSE、CD11c、CD14、CD64 和溶菌酶)至少两种阳性。T 系:CyCD3 阳性;或 sCD3 阳性(MPAL 中罕见阳性)。B 系:CD19 强阳性,伴 CD79a、CyCD22 和 CD10 至少一种强阳性;或 CD19 弱阳性,伴 CD79a、CyCD22 和 CD10 至少两种强阳性。MPAL 较为罕见,本文中探讨的病例为 BCR-ABL+的B-ALL。图 4 BCR-ABL+ALL 染色体图:46,XY,t(9;22)(q34;q11,2;q2
16、3)Fig.4 BCR-ABL+acute lymphoblastic leukemia karyotype:46,XY,t(9;22)(q34;q11,2;q23)2.1 BCR-ABL+在 ALL 中的表达情况B-ALL 按照免疫表型的不同,可分为三大类,即:Pro-B:CD19+、CD10-、CD34+/-、TdT+、CyIg-、SmIg-;Pre-B:CD19+、CD10+、CD34-/+、TdT+/-、CyIg+、SmIg-;Common-B:CD19+、CD10+、CD34+、TdT+、CyIg-、SmIg-。BCR-ABL 在各类型 B-ALL 中的表达具有差异性,在 Commo
17、n-B 中的表达率最高为 60%,Pro-B中的表达率为 42%,Pre-B中BCR-ABL的表达率为 15%,见表 2。表 2 BCR-ABL 基因在各类 B-ALL 患者中的表达Tab.2 The basic situation of BCR-ABL expressed in various types ofB-ALL patientsGroupnNo.of BCR-ABL+BCR-ABL(%)Common-B533260Pre-B47715Pro-B19842ALL11947392.2 CD13 和 CD33 在 BCR-ABL+ALL 中高表达比较 BCR-ABL+ALL 与 BCR-
18、ABL-ALL 患者 CD13与 CD33 的表达,BCR-ABL+ALL 中的 CD13 的表达率为34.0%,BCR-ABL-ALL 中 CD13 的表达率为 13.8%(P=0.042);BCR-ABL+ALL 的 CD33 表达率为 78.7%,BCR-ABL-ALL 的 CD33 表达率为20.8%(P=0.021),见表3。在47 例 BCR-ABL+ALL 中发现 CD13 与 CD33 共表达的病例有 6 例,72 例 BCR-ABL-ALL 患者中 CD13 与 CD33 共表达的病例有 2 例。2.3 BCR-ABL+伴 CD13、CD33 表达 ALL 各组患者的临床特征
19、对比分析BCR-ABL+ALL 患者中 CD13+与 CD13-组的临床特征相比,年龄、性别、初诊时血红蛋白、血小板计数以及骨髓中幼稚细胞百分比均无明显差异。CD13+组及 CD13-组的差异表现在初诊时的外周血白细胞计数上,CD13+组初诊时白细胞计数为(25.3 6.71)109/L,明显较 CD13-组(14.166.85)109/L 高(P=0.047)。此外 CD13+组初诊时BCR-ABL 表达量为(2.54 0.72)%,明显较 CD13-组(1.48 0.77)%高(P=0.038)。CD34 的阳性率在CD13+组中为 93%,明显高于 CD13-组的 74%,但差异不具有统
20、计学意义(P=0.069)。BCR-ABL+ALL 患者中 CD33+与 CD33-组的临床特征相比,年龄、性别、初诊时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数以及骨髓中幼稚细胞百分比均无明显差异。CD33+组及 CD33-组的差异表现在初诊时 BCR-ABL 基因的相对表达量上,CD33+组初诊时 BCR-ABL 表达量为(3.39 0.89)%,明显较 CD33-组(1.37 0.67)%高(P=0.029)。CD34 的阳性率在 CD33+组中为 94%,明显高于CD33-组的 30%(P=0.031),见表 4。表 3 ALL 患者 CD13 与 CD33 的表达特征 n(%)Tab.3
21、 Expression characteristics of CD13 and CD33 in ALL patientsn(%)BCR-ABLnCD13+CD33+BCR-ABL+4716(34.0)37(78.7)BCR-ABL-7210(13.8)15(20.8)注:与 BCR-ABL-组相比,P 0.05。Note:Compared with BCR-ABL-group,P 20%作为阳性。CD13+表达 10 例,中位生存期14 个月;CD13-表达18 例,中位生存期28 个月,总生存曲线差异有统计学意义(P=0.003 1),见图 5A。追踪单纯 BCR-ABL+ALL 患者 28
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