circNT5E靶向调控miR-152-3p对胃癌细胞生物学行为的影响.pdf

第5 2卷第4期第5 2 5页2 0 2 3年8月 华中科技大学学报(医学版)A c t aM e dU n i vS c iT e c h n o lH u a z h o n g V o l.5 2 N o.4 P.5 2 5A u g.2 0 2 3*河南省高等学校重点科研项目(N o.1 6 A 3 1 0 0 2 4)陈 希,女,1 9 8 8年生,初级技师,E-m a i l:h n d x b l k 0 3 0 41 6 3.c o mc i r c NT 5 E靶向调控m i R-1 5 2-3 p对胃癌细胞生物学行为的影响*陈 希1,齐永利1,张金宁1,姚亚辉1,张海龙21河南大学淮河医院病理科,开封 4 7 5 0 0 02河南大学基础医学院,开封 4 7 5 0 0 4摘要:目的 探讨c i r c N T 5 E对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法 采用q R T-P C R法检测胃癌组织、癌旁组织与人胃黏膜上皮细胞G E S-1、人胃癌细胞HG C 2 7中c i r c N T 5 E、m i R-1 5 2-3 p的表达量。双荧光素酶报告基因实验检测m i R-1 5 2-3 p过表达对野生型载体w t-c i r c N T 5 E、突变型载体m u t-c i r c N T 5 E荧光素酶活性的影响。以HG C 2 7细胞为研究对象进行体外细胞实验,实验分组为s i-N C组、s i-c i r c N T 5 E组、s i-c i r c N T 5 E-N C组、s i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 p组。C C K-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与T r a n s w e l l实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭能力。W e s t e r nb l o t检测B a x、B c l-2蛋白表达量。结果 与癌旁组织和G E S-1细胞相比,c i r c N T 5 E在胃癌组织和细胞中表达量升高(均P0.0 5),m i R-1 5 2-3 p的表达量降低(均P0.0 5);进一步机制分析提示m i R-1 5 2-3 p是c i r c N T 5 E的靶基因。功能实验表明敲除c i r c N T 5 E抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭的能力,诱导细胞凋亡(均P0.0 5)。敲除m i R-1 5 2-3 p可逆转c i r c N T 5 E表达降低对细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用和对凋亡的促进作用(均P0.0 5)。结论 c i r c-N T 5 E可通过调控m i R-1 5 2-3 p介导胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。关键词:胃癌;c i r c N T 5 E;m i R-1 5 2-3 p;细胞增殖;迁移;侵袭;凋亡中图分类号:R 7 3 5.2 D O I:1 0.3 8 7 0/j.i s s n.1 6 7 2-0 7 4 1.2 0 2 3.0 4.0 1 4T h eE f f e c t o f c i r c N T 5 Eo nt h eB i o l o g i c a lB e h a v i o ro fG a s t r i cC a n c e rC e l l sb yT a r g e t i n gm i R-1 5 2-3 pC h e nX i,Q iY o n g l i,Z h a n gJ i n n i n ge t a lD e p a r t m e n t o fP a t h o l o g y,H u a i h eH o s p i t a l o fH e n a nU n i v e r s i t y,K a i f e n g4 7 5 0 0 0,C h i n aA b s t r a c t O b j e c t i v e T os t u d yt h ee f f e c to fc i r c N T 5 Eo nt h eb i o l o g i c a lb e h a v i o ro fg a s t r i cc a n c e rc e l l sa n di t sp o s s i b l em e c h a n i s m.M e t h o d s T h eq R T-P C Rw a su s e dt od e t e c t t h ee x p r e s s i o no f c i r c N T 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 p i ng a s t r i cc a n c e r t i s s u e s,a d j a c e n t t i s s u e s,h u m a ng a s t r i cm u c o s a l e p i t h e l i a l c e l lG E S-1,a n dh u m a ng a s t r i c c a n c e r c e l lHG C 2 7.D u a l-l u c i f e r a s e r e p o r t e r e x-p e r i m e n tw a su s e dt od e t e c t t h ee f f e c to fm i R-1 5 2-3 po v e r e x p r e s s i o no nt h e l u c i f e r a s ea c t i v i t yo fw i l d-t y p ev e c t o rw t-c i r c N T 5 Ea n dm u t a n tv e c t o rm u t-c i r c N T 5 E.I nv i t r oc e l l e x p e r i m e n t sw e r ep e r f o r m e du s i n gHG C 2 7c e l l s,a n dt h ec e l l sw e r ed i v i d e di n t os i-N Cg r o u p,s i-c i r c N T 5 Eg r o u p,s i-c i r c N T 5 E-N Cg r o u p,a n ds i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 pg r o u p.T h eC C K-8m e t h o d,p l a t ec o l o n yf o r-m a t i o ne x p e r i m e n t,f l o wc y t o m e t r ya n dT r a n s w e l l e x p e r i m e n tw e r eu s e d t od e t e c t c e l l p r o l i f e r a t i o n,c o l o n y f o r m a t i o n,a p o p t o s i s,m i g r a t i o na n di n v a s i o na b i l i t y,r e s p e c t i v e l y.W e s t e r nb l o tw a su s e dt od e t e c tt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fB a xa n dB c l-2.R e s u l t sC o m p a r e dw i t ha d j a c e n t t i s s u e sa n dG E S-1c e l l s,t h ee x p r e s s i o no fc i r c N T 5 Ei ng a s t r i cc a n c e rt i s s u e sa n dc e l l sw a si n c r e a s e d(b o t hP0.0 5),w h i l e t h ee x p r e s s i o no fm i R-1 5 2-3 pw a sd e c r e a s e d(b o t hP0.0 5).F u r t h e rm e c h a n i s ms t u d ys u g g e s t e dt h a tm i R-1 5 2-3 pw a s t h e t a r g e t g e n eo f c i r c N T 5 E.F u n c t i o n a l t e s t s s h o w e dt h a tk n o c k d o w no f c i r c N T 5 Ei n h i b i t e dt h ep r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n d i n v a s i o no f g a s t r i c c a n c e r c e l l s a n d i n d u c e dc e l l a p o p t o s i s(a l lP0.0 5).R e s c u e e x p e r i m e n t c o n f i r m e d t h a t k n o c k-d o w no fm i R-1 5 2-3 pc o u l dr e v e r s e t h e i n h i b i t o r ye f f e c to fc i r c N T 5 Es i l e n c i n go nc e l lp r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o na n di n v a s i o n,a n dt h ep r o m o t i n ge f f e c to nc e l la p o p t o s i s(a l lP0.0 5).C o n c l u s i o n c i r c N T 5 Ec a nm e d i a t ep r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n,i n v a s i o na n da p o p t o s i so fg a s t r i cc a n c e rc e l l sb yr e g u l a t i n gm i R-1 5 2-3 p.K e yw o r d s g a s t r i cc a n c e r;c i r c N T 5 E;m i R-1 5 2-3 p;c e l l p r o l i f e r a t i o n;m i g r a t i o n;i n v a s i o n;a p o p t o s i s 胃癌是我国常见的一种恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势,随着医疗技术的进步,胃癌患者治愈率与生存期明显改善,然而,胃癌的症状无特异性,转移率高,大多数患者常在晚期确诊,预后较差1。随着分子靶向治疗的发展,寻找胃癌发生发展相关靶基因成为研究重点,已有研究表明环状R NA(c i r c u-l a rR NA,c i r c R NA)在胃癌中差异表达,c i r c R NA稳定性高,高度保守,具有组织及发育阶段特异性的特征,已被证实在胃癌发生发展中发挥着重要的潜在作用2-3。此 外,c i r c R NA可 通 过 吸 附 微 小R NA(m i R NA)而抑制其表达从而调节胃癌细胞生物学行为,进而在胃癌发生及发展过程中发挥重要调控作用4。在Y a n g等5关于膀胱癌的研究中发现,c i r c NT 5 E通过充当m i R-5 0 2-5 p的海绵分子促进膀胱癌病情进展及恶性肿瘤细胞增殖行为。然而,关于c i r c NT 5 E在胃癌发展中的作用及潜在机制鲜见报道。本次实验通过S t a r b a s e生物信息学预测发现m i R-1 5 2-3 p与c i r c NT 5 E存在互补序列。m i R-1 5 2-3 p在胃癌中降低,其过表达可抑制胃癌细胞生长6。但c i r c NT 5 E是否通过靶向调节m i R-1 5 2-3 p参与调节胃癌的发生发展尚未被探索。因此,本研究主要探讨m i R-1 5 2-3 p是否是c i r c NT 5 E的功能靶标,以及c i r c NT 5 E/m i R-1 5 2-3 p轴在胃癌生长和转移中的生物学作用。1 材料与方法1.1 实验材料与试剂本次实验共招募4 7例经病理学诊断确诊为胃癌的患者(2 0 2 0年2月2 0 2 0年6月,男2 7例,女2 0例,年龄4 86 6岁),手术过程中收集所有患者的癌组织及相应癌旁组织。本次实验已获得患者的知情同意,并经伦理委员会批准,根据 赫尔辛基宣言 进行的。人胃黏膜上皮细胞G E S-1、人胃癌细胞HG C 2 7购自美国AT C C公司;DMEM培养液、胎牛血清、双荧光素酶报告基因载体、转染试剂购自上海碧云天生物技术有限公司;q R T-P C R试剂盒、s i-N C、s i-c i r c NT 5 E、a n t i-m i R-N C、a n t i-m i R-1 5 2-3 p、m i R-N C、m i R-1 5 2-3 pm i m i c s由北京天根生化公司提供;细胞凋亡检测试剂、C C K-8试剂、T r a n s w e l l小室、M a t r i g e l基质胶购自美国C o r n i n g公司;B a x、B c l-2抗体与内参GA P DH抗体由美国C S T公司提供;HR P标记的二抗由美国A b c a m公司提供。1.2 方法1.2.1 实验分组 G E S-1和HG C 2 7细胞置于含有1 0%胎牛血清、1 0 0g/m L链霉素与1 0 0U/m L青霉素的DMEM培养液中,3 7、5%C O2条件下培养。取对数生长期HG C 2 7细胞采用脂质体转染法进行转染,分别记为s i-N C组、s i-c i r c NT 5 E组、a n t i-m i R-N C组、a n t i-m i R-1 5 2-3 p组,s i-c i r c NT 5 E-N C组、s i-c i r c NT 5 E-1 5 2-3 p组。1.2.2 q R T-P C R检测 采用T r i z o l试剂提取组织或细 胞 系 的 总R NA,经 紫 外 分 光 光 度 计 测 定R NA浓 度 后 将R NA反 转 录 为c D NA,用A B IS t e p O n e P l u s系 统 进 行q R T-P C R分 析。GA P DH和U 6分别作为内参对照。用2-C t法计算相对基因表达量。1.2.3 双荧光素酶报告基因实验 S t a r b a s e预测c i r c NT 5 E和m i R-1 5 2-3 p互补的序列。与m i R-1 5 2-3 p互补序列的c i r c NT 5 E片段以及没有m i R-1 5 2-3 p结合位点的c i r c NT 5 E突变体序列经P C R扩增后插入荧光素酶报告载体,构建野生型载体和突变型荧光素酶载体,分别命名为w t-c i r c NT 5 E和m u t-c i r c NT 5 E。将HG C 2 7细胞接种于2 4孔板中2 4h,随后转染w t-c i r c NT 5 E,m u t-c i r c NT 5 E与m i R-N C或m i R-1 5 2-3 pm i m i c s。2 4h后,根据制造商的说明,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定荧光素酶活性。1.2.4 C C K-8实验 将各组细胞接种于9 6孔板,接种后4 8h进行C C K-8测定。每孔添加1 0 0LC C K-8试剂,将培养板在培养箱内孵育2h。空白孔调零,采用酶标仪检测4 5 0n m波长处吸光度(A)值。1.2.5 平板克隆形成实验 收集各组HG C 2 7细胞,重悬细胞后接种于6孔板中(2 0 05 0 0个细胞/每孔)。3 7、5%C O2条件下培养12周,用显微镜检测菌落,以单个细胞克隆所含细胞数大于5 0为终止细胞培养的条件。用5 0 0L甲醇固定细胞2 0m i n,然后每孔加入1%结晶紫染色。最后,对细胞进行冲洗、干燥、拍照和记录。1.2.6 流式细胞术检测 收集各组HG C 2 7细胞,用冷磷酸缓冲盐水(P B S)冲洗,随后分别与5LA n n e x i n-F I T C和1 0LP I避光染色1 5 m i n。最后,用流式细胞术测定凋亡细胞的数量。1.2.7 T r a n s w e l l实验 迁移实验:将各组约1 1 05HG C 2 7细胞悬浮于1 0 0L无血清培养液中,然后接种于T r a n s w e l l小室上室。下室添加6 0 0L含有1 0%F B S的DMEM培养液。3 7培养2 4h后,弃去上室细胞,下室细胞用P B S洗涤,甲醛固定2 0m i n后,P B S洗涤,然后用0.1%结晶紫染色2 0m i n。随机挑选5个区域,显微镜下计数染色细胞,观察迁移细胞数。侵袭实验:细胞在接种于上室的前1d,将M a t r i g e l基质胶稀释液包被到小室的上室(4 0L/孔),后续过程与细胞迁移实验一致。1.2.8 W e s t e r nb l o t检测 首先取适量的R I P A裂解液,将其缓慢地加入细胞,加入细胞后对总蛋白进行相应的提取操作。蛋白经S D S-P AG E电泳、转膜、封闭后,使用脱脂奶粉封闭孵育2h,加B a x(11 0 0 0)、B c l-2(11 0 0 0),GA P DH(13 0 0 0)抗体,于625华中科技大学学报(医学版)2 0 2 3年8月第5 2卷第4期4孵育过夜,加二抗稀释液(15 0 0 0)室温孵育2h,滴加E C L试剂在P V D F膜上,使用I m a g eJ分析蛋白条带灰度值,以GA P DH作为内参。1.3 统计学方法采用S P S S2 1.0统计软件分析数据,计量资料以(xs)表示,两组间均数比较采用独立样本t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析,以P0.0 5为差异具有统计学意义。2 结果2.1 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p表达情况相较于癌旁组织,c i r c NT 5 E在胃癌组织中高表达(P0.0 5),而m i R-1 5 2-3 p低表达(P0.0 5),见图1 A、1 B。同时,相较于G E S-1细胞,c i r c NT 5 E在HG C 2 7胃癌细胞中含量升高(P0.0 5),而m i R-1 5 2-3 p的含量降低(P0.0 5),见图1 C、1 D。A:c i r c NT 5 E在胃癌组织中高表达;B:m i R-1 5 2-3 p在胃癌组织 中低表达;C:c i r c N T 5 E在HG C 2 7细胞 中高表达;D:m i R-1 5 2-3 p在HG C 2 7细胞中低表达;与癌旁组比较,*P0.0 5;与G E S-1组比较,#P0.0 5图1 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p在胃癌组织和细胞中表达的检测F i g.1D e t e c t i o no f c i r c NT 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 pe x p r e s s i o n i ng a s t r i cc a n c e r t i s s u e sa n dc e l l s2.2 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p转染效率的检测与s i-N C组比较,s i-c i r c NT 5 E组c i r c NT 5 E的表达量降低(P0.0 5);与a n t i-m i R-N C组比较,a n t i-m i R-1 5 2-3 p组m i R-1 5 2-3 p的表达量降低(P0.0 5),见图2。表明转染效果良好并可用于后续实验。A:沉默c i r c N T 5 E处理后c i r c N T 5 E表达的检测;B:抑制m i R-1 5 2-3 p后m i R-1 5 2-3 p表达的检测;与s i-N C组比较,*P0.0 5;与a n t i-m i R-N C组比较,#P0.0 5图2 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p表达的检测F i g.2D e t e c t i o no f c i r c N T 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 pe x p r e s s i o n2.3 m i R-1 5 2-3 p是c i r c N T 5 E的靶基因c i r c NT 5 E和m i R-1 5 2-3 p存在互补序列,见图3 A。双荧光素 酶 报 告 基 因 实 验 表 明m i R-1 5 2-3 pm i m i c s显著降低w t-c i r c NT 5 E组的荧光素酶活性(P0.0 5),见图3 B。此外,c i r c NT 5 E敲除导致细胞中m i R-1 5 2-3 p含量升高(P0.0 5),见图3 C。A:c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p结合位点;B:双荧光素酶报告基因实验分析c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p结合关系;C:c i r c N T 5 E敲低对m i R-1 5 2-3 p表达的影响;与m i R-N C组比较,*P0.0 5;与s i-N C组比较,#P0.0 5图3 m i R-1 5 2-3 p是c i r c N T 5 E的靶基因F i g.3m i R-1 5 2-3 pw a s i d e n t i f i e da sa t a r g e tm i R NAo f c i r c N T 5 E725陈 希等.c i r c N T 5 E靶向调控m i R-1 5 2-3 p对胃癌细胞生物学行为的影响2.4 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p对胃癌H G C 2 7细胞增殖的影响相较于s i-N C转染,转染s i-c i r c NT 5 E可抑制HG C 2 7细胞的增殖以及减弱克隆形成能力(均P0.0 5);此外,m i R-1 5 2-3 p下调可逆转s i-c i r c NT 5 E对细胞增殖以及克隆形成能力的抑制作用(均P0.0 5),见表1。表1 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p对胃癌HG C 2 7细胞增殖的影响(xs,n=9)T a b l e1 E f f e c t so f c i r c N T 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 po nt h ep r o l i f e r a t i o no fg a s t r i cc a n c e rHG C 2 7c e l l s(xs,n=9)分组抑制率(%)克隆数(个)s i-N C0.0 00.0 01 1 2.0 05.8 5s i-c i r c N T 5 E4 5.0 71.7 2*5 7.2 23.0 5*s i-c i r c N T 5 E-N C4 4.9 82.6 45 7.5 64.1 9s i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 p2 1.1 81.4 0#9 9.4 46.5 7#与s i-N C组比较,*P0.0 5;与s i-c i r c N T 5 E-N C组比较,#P0.0 52.5 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p对胃癌H G C 2 7细胞凋亡的影响相较于s i-N C转染组,转染s i-c i r c NT 5 E可导致HG C 2 7细胞凋亡率以及促凋亡蛋白B a x的升高(均P0.0 5),和抗凋亡蛋白B c l-2的降低(P0.0 5);相 较 于s i-c i r c NT 5 E-N C组,s i-c i r c NT 5 E-1 5 2-3 p组可逆转s i-c i r c NT 5 E诱导的细胞凋亡率和促凋亡蛋白B a x的升高(均P0.0 5),以及抗凋亡蛋白B c l-2的降低(P0.0 5),见图4、表2。1:s i-N C;2:s i-c i r c N T 5 E;3:s i-c i r c NT 5 E-N C;4:s i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 p;A:胃癌HG C 2 7细胞凋亡的检测;B:胃癌HG C 2 7细胞中凋亡相关蛋白表达的检测图4 胃癌HG C 2 7细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达分析F i g.4A n a l y s i so f a p o p t o s i sa n da p o p t o s i s-r e l a t e dp r o t e i ne x p r e s s i o n i nHG C 2 7c e l l so fg a s t r i cc a n c e r表2 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p对胃癌HG C 2 7细胞凋亡的影响(xs,n=9)T a b l e2 E f f e c t so f c i r c N T 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 po nt h ea p o p t o s i so fg a s t r i cc a n c e rHG C 2 7c e l l s(xs,n=9)分组凋亡率(%)B a xB c l-2s i-N C7.4 70.7 40.1 60.0 20.6 60.0 7s i-c i r c N T 5 E2 0.9 81.1 7*0.6 10.0 5*0.2 40.0 2*s i-c i r c N T 5 E-N C2 0.9 11.4 70.6 20.0 70.2 50.0 2s i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 p1 1.7 81.2 0#0.2 70.0 3#0.5 10.0 5#与s i-N C组比较,*P0.0 5;与s i-c i r c N T 5 E-N C组比较,#P0.0 52.6 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p对胃癌H G C 2 7细胞迁移、侵袭的影响 s i-c i r c NT 5 E组细胞迁移及侵袭相较于s i-N C组显著降低(均P0.0 5);s i-c i r c NT 5 E-1 5 2-3 p组迁移及侵袭细胞数相较于s i-c i r c NT 5 E-N C组增多(均P0.0 5),见表3。表3 c i r c N T 5 E和m i R-1 5 2-3 p对胃癌HG C 2 7细胞迁移、侵袭的影响(xs,n=9)T a b l e3 E f f e c t so f c i r c N T 5 Ea n dm i R-1 5 2-3 po nt h em i g r a t i o na n d i n v a s i o no fHG C 2 7c e l l s(xs,n=9)分组迁移数(个)侵袭数(个)s i-N C2 0 7.8 98.6 91 5 7.8 98.4 0s i-c i r c N T 5 E9 0.4 45.1 4*6 9.2 24.9 4*s i-c i r c N T 5 E-N C9 0.6 74.2 46 8.5 64.9 9s i-c i r c N T 5 E-1 5 2-3 p1 5 9.8 98.1 8#1 2 2.7 86.3 0#与s i-N C组比较,*P0.0 5;与s i-c i r c N T 5 E-N C组比较,#P0.0 53 讨论c i r c R NA不具有5 端帽子结构与3 端多聚腺苷酸尾巴结构,其结构稳定,可通过参与转录后调控过程,如吸附m i R NA s,参与调节胃癌细胞增殖、转移级联和发展7。c i r c R NA在胃癌中表达上调或下825华中科技大学学报(医学版)2 0 2 3年8月第5 2卷第4期调,并可通过靶向结合m i R NA而阻止m i R NA对靶基因的抑制作用从而在胃癌发生过程中发挥癌基因或抑癌基因作用,还可能作为胃癌靶向治疗的潜在靶点8-1 0。c i r c NT 5 E是一个功能c i r c R NA,近年来的研究揭示了c i r c NT 5 E在肿瘤发生中的重要作用,提示c i r c NT 5 E可能是癌症的诊断和治疗靶点。例如,c i r c NT 5 E在非小细胞肺癌细胞中表达水平升高,并可促进非小细胞肺癌细胞生长1 1。c i r c NT 5 E在胶质母细胞瘤中高表达,其含量下调可破坏癌细胞的生长和转移1 2-1 3。因此,研究c i r c NT 5 E在胃癌发生发展的分子机制,对于寻找有效的治疗靶点,提高胃癌患者的预后具有重要意义。在本次实验中,我们发现c i r c NT 5 E在胃癌组织和细胞中成高表达趋势,进一步功能实验表明c i r c NT 5 E敲除可抑制胃癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。B a x、B c l-2作为细胞凋亡的调控因子,B a x和B c l-2及其比值被认为是多种癌症的预 后标志物1 4。本次实 验发现c i r c-NT 5 E下调伴随着B c l-2表达的降低以及B a x表达的升高,提示c i r c NT 5 E可以通过调节B a x和B c l-2及其比值影响胃癌细胞的凋亡。同时本研究结果显示,干扰c i r c NT 5 E表达可减弱胃癌细胞的迁移及侵袭能力,提示c i r c NT 5 E高表达可促进胃癌细胞迁移及侵袭进而促进胃癌发展进程。进一 步 机 制 分 析 表 明,c i r c NT 5 E直 接 靶 向m i R-1 5 2-3 p,并通过靶向作用抑制m i R-1 5 2-3 p的表达。有研究表明,m i R-1 5 2-3 p过表达可抑制胃癌细胞生 长1 5。敲 低c i r c_R NA P VT 1可 通 过 促 进m i R-1 5 2-3 p表达 而 增 强 胃 癌 细 胞 对 顺 铂 的 敏 感性1 6。在胶质瘤中,m i R-1 5 2-3 p过表达可抑制细胞糖酵解,增殖以及转移1 7-1 8。本研究发现m i R-1 5 2-3 p在胃癌组织和细胞中呈低表达趋势,进一步敲除m i R-1 5 2-3 p可逆转c i r c NT 5 E下调对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用和对凋亡的促进作用。因此,c i r c NT 5 E在上游通过吸附下游m i R-1 5 2-3 p进而影响胃癌细胞的生物学功能。综上 所 述,c i r c NT 5 E可 通 过 靶 向 抑 制 下 游m i R-1 5 2-3 p表达从而促进胃癌进展,并促进胃癌细胞的恶性增殖及抑制凋亡。当前的实验表明c i r c-NT 5 E可能是治疗胃癌的潜在靶点。但c i r c NT 5 E是否可通过调控其他m i R NA s而参与胃癌发展仍需进一步研究。参 考 文 献1 X i aT,P a nZ,Z h a n gJ.C i r c S MC 3r e g u l a t e sg a s t r i cc a n c e r t u-m o r i g e n e s i sb yt a r g e t i n gm i R-4 7 2 0-3 p/T J P 1a x i sJ.C a n c e rM e d,2 0 2 0,9(1 2):4 2 9 9-4 3 0 9.2 L i uP,C a iS,L iN.C i r c u l a rR NA-h s a-c i r c-0 0 0 0 6 7 0p r o m o t e sg a s t r i cc a n c e rp r o g r e s s i o nt h r o u g ht h em i c r o R NA-3 8 4/S I X 4a x i sJ.E x pC e l lR e s,2 0 2 0,3 9 4(2):1 1 2 1 4 1-1 1 2 1 5 1.3 L u oZ,R o n gZ,Z h a n gJ,e ta l.C i r c u l a rRNAc i r c C C D C 9a c t sa sam i R-6 7 9 2-3 ps p o n g et os u p p r e s st h ep r o g r e s s i o no fg a s-t r i cc a n c e rt h r o u g hr e g u l a t i n g C AV 1e x p r e s s i o nJ.M o lC a n c e r,2 0 2 0,1 9(1):8 6-9 7.4 Y a n gF,H uA,L iD,e t a l.C i r c-H u Rs u p p r e s s e sH u Re x p r e s-s i o na n dg a s t r i c c a n c e rp r o g r e s s i o nb y i n h i b i t i n gC N B Pt r a n s-a c t i v a t i o nJ.M o lC a n c e r,2 0 1 9,1 8(1):1 5 8-1 6 9.5 Y a n gJ,L i uX,D a iG,e t a l.c i r c N T 5 Ep r o m o t e s t h ep r o l i f e r a-t i o na n dm i g r a t i o no fb l a d d e r c a n c e rv i as p o n g i n gm i R-5 0 2-5 pJ.JC a n c e r,2 0 2 1,1 2(8):2 4 3 0-2 4 3 9.6 M aP,L iL,L i uF,e t a l.HN F 1 A-i n d u c e d l n c R NAHC G 1 8f a-c i l i t a t e sg a s t r i cc a n c e rp r o g r e s s i o nb yu p r e g u l a t i n gD NA J B 1 2v i am i R-1 5 2-3 pJ.O n c oT a r g e t sT h e r,2 0 2 0,1 3(1):7 6 4 1-7 6 5 2.7 L iC,T i a nY,L i a n gY,e ta l.C i r c_0 0 0 8 0 3 5c o n t r i b u t e s t oc e l lp r o l i f e r a t i o na n di n h i b i t sa p o p t o s i sa n df e r r o p t o s i s i ng a s t r i cc a n c e rv i am i R-5 9 9/E I F 4 A 1a x i sJ.C a n c e rC e l l I n t,2 0 2 0,2 0(1):8 4-9 4.8 D i n gL,Z h a oY,D a n gS,e ta l.C i r c u l a rR NAc i r c-D ON S ONf a c i l i t a t e sg a s t r i cc a n c e rg r o w t ha n d i n v a s i o nv i aNUR Fc o m-p l e xd e p e n d e n ta c t i v a t i o no ft