HIV-1免疫印迹试验不确定_阴性样本病毒载量检测结果分析.pdf

贵州医药2 0 2 3年8 月第47 卷第8 期:1179论著HIV-1免疫印迹试验不确定/阴性样本病毒载量检测结果分析李梅1袁薇1.2杨敬源1刘勇?（1.贵州医科大学，贵州贵阳550 0 2 5；2.贵州省临床检验中心，贵州贵阳550 0 0 2）摘，要目的分析HIV-1核酸定量试验对HIV-1抗体不确定/阴性结果的诊断价值，为及时诊断HIV感染提供参考依据。方法收集贵州省2 个市（州）2 0 2 1年1月一5月HIV初筛抗体有反应性样本进行免疫印迹试验（WB)，WB检测结果为HIV-1抗体不确定/阴性的样本进行VL试验，并对不确定样本随访追踪，随访追踪到WB结果依旧为不确定的样本再次进行VL检测，同时对TMT试剂WB结果呈阴性、VL5000 copies/mL样本采用麦克莱金HIV抗体确诊检测试剂进行试验，将结果纳入统计分析。结果1440 例初筛有反应性样本经WB诊断HIV-1抗体阳性1142 例、阴性159 例、不确定139 例。男性WB抗体阳性确证率高于女性,2 5岁以下人群阳性确诊率低于其他年龄人群，阴性率显著高于年龄人群。139例不确定样本经VL检测后VL5000copies/mL有36例、VL 50 0 0.c o p-ies/mL样本在50 岁及以上男性占比较高。WB不确定样本p24是主要带型。159 例WB阴性样本经VL检测有6例（3.8%）VL5000copies/mL、未检出153例（96.2%）。139例WB不确定样本追踪到2 2 例，最终10 例转阳，6例转阴，6 例结合VL检测值综合判定为阴性，VL和WB二者诊断结果具有一致性。结论WB出现抗体不确定/阴性时应立即联合HIV-1核酸定量检测，避免WB检测技术窗口期造成漏诊。关键词免疫印迹试验；病毒载量；抗体不确定/阴性Analysis of viral load test results of HIV-1 western blotting tests in uncertain/negative samplesLi Mei,Yuan Weil.2,Yang Jingyuan,Liu Yong:1.Guizhou Medical University,Guiyang 550025,Guizhou,China;2.Guizhou Clinical Laboratory Center.Guiyang 550002,Guizhou,China.Abstract Objective To analyze the diagnostic value of HIV-i nucleic acid quantitative test(VL)in the uncer-tain/negative results of HIV-1 antibody,and provide a reference basis for the detection of HIV infection.MethodsThe reactive samples of HIV primary screening antibody in two cities and prefectures of Guizhou Province from Jan-uary to May 202i were collected for western blot test(WB).The samples with uncertain/negative WB test resultswere subjected to VL test,and the uncertain samples were followed up.The samples with uncertain WB results werefollowed up for VL test again,and at the same time,samples with negative WB result of TMT reagent and VL5ooo copies/ml were tested with microgen HIV antibody diagnostic test reagent,and the results were included in sta-tistical analysis.Result 1440 primary screening reactive samples were diagnosed as HIV-1 antibody positive in 1142cases,negative in 159 cases and uncertain in 139 cases by WB.The positive confirmation rate of WB antibody in menwas higher than that in women,the positive confirmation rate of people under the age of 25 was lower than that inother age groups,and the negative rate was significantly higher than that in age groups.After VL detection of 139uncertain samples,there were 36 cases with VL5000 copies/ml,1 case with VL 5000 copies/ml were mainly found in men aged 50 and over.WB uncertain sample p24 was the main band type.Among159 WB negative samples,6 cases that account for 3.8%had VL5000 copies/ml and 153 cases that account for96.2%were not detected.In 139 cases of WB uncertain samples,22 cases were traced,and finally 10 cases turnedpositive,6 cases turned negative,and 6 cases were judged to be negative combined with VL test value.The diagnosticresults of VL and WB were consistent.Conclusion WB antibody is uncertain/negative,HIV-1 nucleic acid quantitativedetection should be combined immediately to avoid missed diagnosis caused by WB detection technology window.KeywordsWestern blot;中图分类号：R512.91免疫印迹蛋白法（westernblot，WB)是诊断艾滋病感染的确证试验之二i，但由于急性期/早期HIV感染者处于窗口期其体内抗体滴度较低、晚期艾滋病患者消耗了大量抗体、老年人免疫失衡产生交叉性抗体等原因 2-3，容易出现抗体不确定的结果，导致WB不确定样本的感染者诊断被延迟。病毒载量（Viral Load，V L)试验具有高灵敏性和高特异性，检测结果窗口期短于WB,适用于初筛有反应性，WB抗体不确定/无特异性条带及流行病学史有意义的样本检测，其结果已经被作为HIV感染的诊断依据之二。本研究对HIV-1抗体不确定/阴性样本补充VL检测，为及时诊断HIV感染提供参考。报告如下。1资料与方法1.1一般资料选择2 0 2 1年1月一5月贵州省2 个市（州）初筛实验室抗体筛查有反应性的血清样本，经贵州省临床检验中心艾滋病确证实验室进行WB,诊断为HIV-1抗体不确基金项目：贵州省卫健委科技基金项目（gzwjkj2020-1-198）通信作者，E-Viral load;文献标识码：AAntibody uncertainty/negative文章编号：10 0 0-7 44X（2 0 2 3)0 8-117 9-0 3定样本进行HIV-1核酸定量实验检测，并收集样本个案信息，包括年龄，性别等。本研究通过贵州省临床检验中心伦理委员会批准（编号：2 0 2 10 0 1）。1.2研究方法1.2.1HIV-1抗体补充试验免疫印迹蛋白法（WB)：仪器为瑞士TeCan免疫印迹仪、德国CYblot蛋白印迹仪、英国BeeBlot48全自动免疫印迹仪。试剂盒来源于上海英曼泰（I M T）生物技术有限公司和德国麦克莱金公司生产的人类免疫缺陷病毒（HIV1十2 型）抗体确证试剂。1.2.2HIV-1VL检测使用StreamSP96全自动核酸提取仪和ABI7500扩增仪，人类免疫缺陷病毒（HIV1十2 型）核酸提取试剂和扩增试剂均来源于中山大学达安基因股份有限公司。1.2.3结果判定实验结果按照全国艾滋病检测技术规范（2 0 2 0 年修订版）和试剂盒说明书进行判定，实验过程严格遵守标准操作程序进行，每批次VL试验均进行室内质量控制，定期参加国家临床检验中心室间质评，结果合格。（1)IMT试剂结果判定：阴性：无病毒特异性条带出现；阳性：有以下两个或更多的条带显著存在：gp160/gp120、g p 41、p24,其他的HIV-1蛋白条带可能出现也可能不出现；不.1180确定：既不符合阳性条带模式，又不符合阴性条带模式标准的任意条带。（2)麦克莱金试剂结果判定：阴性：无检测线临界值、gp120或/和gp105临界值；阳性：同种HIV类型的两个ENV检测线临界值（gp120+gp41或者gp105十gp36）、1个ENV检测线（仅gp41或者gp36）和至少1个GAG检测线（p24、p 17)或1个POL检测线（p31、p 51)临界值；不确定：根据条带结果无法做出阴性或者阳性的判断。（3)VL最低检测线为2 50 copies/mL。V L 50 0 0 c o p-ies/mL即可判断为HIV感染、低于检测下限和未检出不能排除HIV感染。1.3统计学方法使用Excel2016对数据整理和输入，实验结果用SPSS20.0进行统计学分析。检验水准=0.05，单侧检验，定性资料使用x检验和Fisher确切概率法，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1WB检测结果分析1440 例HIV初筛有反应性的样本经过WB检测,HIV抗体阳性1142 例、阴性159 例、不确定139 例。从性别分布来看，男性初筛阳性有9 53例，WB确诊阳性率8 5.4%（8 14/9 53）；女性初筛阳性48 7 例，WB阳性率为6 6.7%（32 5/48 7）。根据样本信息将年龄分为4组，从年龄分布来看，WB确证阳性的感染者年龄在48 7 岁之间，507 5岁之间检测出HIV感染人数最多，2 550 岁年龄组之间次之，小于2 5岁和大于7 5岁HIV感染者较少，分别只有53例和7 6 例。2 5岁年龄组WB确证阳性率为52.0%低于其他组，但阴性率确明显高于其余各年龄组，差异有统计学意义（x=25.9,P0.01)。见表1。表1不同性别、年龄段初筛阳性样本的WB确证情况性别初筛阳性数(n=1440),阳性数阳性率阴性数阴性率不确定数不确定(n=1142)（%）(n=159)（%）(n=139)率(%)男953女487年龄/岁2510225-5054550-7569576982.2139例HIV-1抗体不确定带型及VL值分布情况139例不确定样本带型以p24占50.4%（7 0/139）、p17占14.4%（2 0/139）、p 2 4+p 17 占12.2%（17/139）为主，这3种类型在所有带型中共占7 7%（10 7/139）。对139 例抗体不确定样本进行VL试验，3 6 例可判定为HIV感染所占比例达25.9%、1例VL5000copies/mL的阳性样本中，VL高于检测上限(110 copies/mL)2例，8 6.15%（31/36)的不确定样本VL值范围为110 51X10copies/mL。不确定样本中男性出现阳性比例高于女性，差异有统计学意义（x=11.4,P0.01)、以50 岁为感染HIV医学晚年年龄分组，50 岁以上人群阳性占比高于50岁以下人群（=11.3,P5000不确定阳性率因素确定数率（%）份数(n=36)（%）(n=139)性别男性70女性69年龄/岁5000copies/mL样本使用麦克莱金试剂检测结果分析，159 例WB阴性样本经VL检测，有153例（9 6.2%）VL未检出，6 例（3.8%）VL5000copies/mL，判断为HIV感染。对这6 例样本使Guizhou Medical Journal,2023,Vol.47,No.8用麦克莱金人类免疫缺陷病毒（HIV1十2 型）抗体确证试剂盒进行检测，有5例样本条带判定为阴性、1例样本gp41检测值临界值，两种试剂检测结果的一致性较好。见表3。表36 例IMT阴性样本使用麦克莱金试剂复核结果判定情况IMT结果麦克莱结果判定序号年龄/岁带型判定金带型1512673354745206712.4追踪139 例抗体不确定者的转归情况139 例抗体不确定样本追踪到2 2 例（15.8%），随访时间为2 2 4周，其中10例VL5000 copies/mL样本，随访后WB检测结果转阳；6 例VL未检出样本，WB结果转为无特异性条带；6 例VL未检出样本，其WB带型无进展，随即对这6 例样本再次进行VL检测，VL值均为未检出，结合2 次WB带型和2 次VL检测结果、电话回访询问其流行病学史等因素分析，最终排除了这6 例样本HIV感染的可能性。3讨论本研究发现，男性HIV阳性检出率高于女性，该结果与刘建礼研究结果类似5，也符合贵州省艾滋病疫情流行分布 6 ,2 5岁以下人群阳性率低于其他年龄组，阴性率也明显高于其他年龄组，推测这可能是年轻人更容易到接受健康教育，认识到合理使用安全套有利于预防艾滋病感染，危险性WB检测结果行为后主动寻求检测有关。本研究中不确定带型以p24出现的比例较高，这与有关报道一致 7-8 ，单独的p24条带存在于随访后WB转阳的样本中，提示可能为早期感染的带型 9,p24在VL未检出时也会大量出现，推测存在特异性反81485.432566.85352.041876.659276.17677.6copies/mL50.42849.6853.2846.828VL(copies/mL)一阴性阴性阴性阴性-阴性gp41阴性707.48918.22726.56912.8527.51111.2值P值11.40.0140.011.611.31.0X108阴性5.4X107阴性1.1X107阴性2.9X105不确定3.0X107阴性2.0X107697.27315.02221.55810.6517.31111.2应 3-4.9，另外专业检测技术人员判读条带习惯也是P24带型过多的原因之一，因此无法通过p24带型预测WB不确定样本的归转情况。此外，本研究显示，WB不确定样本经VL检测后，发现50 岁及以上人群WB不确定样本阳性检出比例高于50 岁以下人群，提示年龄可能是影响WB不确定结果的重要因素之一,该结论与黎雅娟研究道相似 10 1，目前我国老年人艾滋病感染率已经达到1.6 8%，高于全人群HIV感染率0.0 58%11，随着我国老年人群性观念逐渐开放，发生危险性行为时更容易引起HIV传播或感染 12 ，未来50 岁以上老年人群或将成为艾滋病检测、监控、防治重点人群 13。因此，为了老年人晚年生存质量有保证，当该人群WB结果为不确定，随访时应将该人群作为重点人群加以关注或直接进行VL检测。HIV感染人体后，病毒开始大量复制、而抗体的产生需要一定时间 14，在急性感染窗口期未产生足够抗体或者艾滋病晚期抗体即将消耗殆尽时WB表现出HIV-1抗体不确定结果 15，对不确定样本可选择进行核酸试验或者2 4周以后随访WB检测。鉴于我国不同地区艾滋病流行强度，受检人群感染率不同，通过VL检测WB不确定样本判断为HIV感染的比例也各有不同，本研究中139 例不确定样本中病毒载量试验VL5000copies/mL占比2 5.9%，与朱晓娟等人研究结果相似16 ，高于田文等人研究的结果3.96%17，说明在不确定样本中进行VL检测确实可提高HIV感染确诊率，及时发现HIV感染者，避免漏诊造成HIV进一步传播。本研究随访到位比例为15.8%，虽略高于其他研究10.2 6%17，但仍处于较低水平，一方面是HIV受检者人员流动性大，对其进行随访追踪存在一定局限性，另一方面是VL确诊后部分单位不再继续送样进行WB检测。WB阴性结果如果疑似“窗口期”感染或者有流行病学史、建议核酸或者随访。本研究首次在贵州省部分市(州)对所有WB抗体阴性结果开展核酸定量检测试点工作，评价病毒载量试验对WB阴性样本诊断价值，为相关人员及时判定受检者感染情况提供数据参考，最大程度避免漏诊对个人和社会造成影响。同时对IMT试剂结果阴性、VL高值的样本用麦克莱金HIV抗体诊断试剂盒进行WB复检，排除了试剂影响因素。本研究中检测到3.7%（6/159)WB带型阴性、VL值是高病毒载量的样本，在未经诊断后治疗的情况下，这常见于感染后病毒非常活跃的窗口期，若无法及时对此类HIV感染者进行干预，这可能导致HIV感染者自身疾病进（下转第118 3页）贵州医药2 0 2 3年8 月第47 卷第8 期阴阳，扶正祛邪。针刺的起效机制包含了即时效应和积累效应，治疗过程中可能受到中枢神经系统的介导 15。在针刺之中，头针的应用最为广泛，中医学认为ASD病位在脑，其行为障碍、语言障碍等多与脑窍失神有关，头针疗法可以通过刺激头部穴位达到通经活络、益髓健脑的作用 16 。头部为诸阳之会，针刺头穴可协调机体阴阳平衡，亦可通经活络、安神醒脑。当头穴取穴对应大脑皮质相应功能区时，针刺该区，可改善局部供血，达到一定刺激量时还可促进神经功能重组，改善相应功能障碍17。我们选取选穴为百会、四神针、神庭、本神、顶题前斜线下2/5、语言二区、语言三区、脑户等穴。经过治疗后，大多数患儿智力提高，理解力、反应力、社会适应能力提高，异常行为程度及种类均有不同程度的减轻，临床取得一定的疗效。穴位注射又称水针，是将药物注人有关穴位以治疗疾病的一类新型针刺手法。它将针刺刺激和药物的性能及对穴位的渗透作用相结合，发挥其综合效应 5。其中选用小牛血清去蛋白注射液进行穴位注射，此药物直接作用于细胞代谢,促进细胞对氧及葡萄糖的摄取和利用，增加ATP的产生，改善细胞氧缺乏与能量的供给，增加机体能量代谢作用，促进细胞生物合成及能量转化，提高脑细胞抗缺氧能力，对脑损伤的保护作用，促进大脑成熟和改善记忆，促进细胞生长，增加心、脑、肝等脏器血流量 18。本文结果显示，研究治疗总有效率高于对照组；治疗后，研究组的ABC评分中感觉能力、交往能力、运动能力、语言能力、自理能力和总分明显的低于对照组；治疗后,研究组的 CARS评分显著低于对照组，C-PEP评分明显的高于对照组。表明，药物和穴位注射相结合之后，整体调理之后使得此类患儿整体兴奋性增强，精神旺盛，面部表情较前丰富，为进一步提高患儿社交主动性做好铺垫。我们结合现代康复的优势，在ICF-CY框架之下，以应用行为分析（ABA)为理论依据，采用个训及小组形式，以游戏互动为基础，发挥患儿视觉优势，将孤独症患儿以物为导向转化为以人为导向，发挥患儿的长板效应，共同提高此类患儿的社交、认知及生活自理能力。通过大家的共同努力与合作，对于此类孤独症患儿症状的改善上取得了一定的疗效。通过研究以及观察我们发现此类方法在孤独型孤独症患儿的社交主动性、认知及生活自理方面均有不同程度的改善，也得到了家长的认可。综上所述，针刺结合穴位注射（小牛血清去蛋白注射液）在改善孤独型孤独症谱系障碍的言语认知、社交方面有较好的疗效，值得推广。:1183:参考文献1李晓捷，唐久来，杜青.儿童康复学 M.北京：人民卫生出版社,2 0 18:18 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