LncRNA SNHG16通过靶向miR-421_MPC-1轴改善脓毒症诱导的肾炎和细胞凋亡.pdf

广西医科大学学报JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY2023Jul.40（7）LncRNA SNHG16通过靶向miR-421/MPC-1轴改善脓毒症诱导的肾炎和细胞凋亡*杨丹平，郭峻氚，刘艳，肖东（新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科，乌鲁木齐830000）摘要目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG16对脓毒症诱导的肾细胞炎症和细胞凋亡的改善作用与机制。方法：应用内毒素脂多糖（LPS）在体外诱导人近端肾小管上皮细胞（HRPTEC）构建脓毒症样肾细胞模型，细胞分为对照组和LPS组。将LPS组的HRPTEC分为SNHG16过表达组（LPSSNHG16组），过表达空载体组（LPSvector组），SNHG16过表达联合miR-421 拟似物处理组（LPSSNHG16miR-421 mimic组），SNHG16过表达联合线粒体丙酮酸载体-1（MPC-1）小干扰RNA（siR-NA）沉默处理组（LPSSNHG16si-MPC-1组）。应用荧光素酶报告基因检测验证miR-421序列与SNHG16序列的结合情况以及miR-421与MPC-1 3-UTR的结合情况。用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组HRPTEC中SNHG16和miR-421表达水平，western blotting检测各组HRPTEC中cleaved-caspase 3、Bcl-2、MPC-1的表达水平，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组HRPTEC的增殖率，流式细胞术检测细胞凋亡率。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组细胞培养上清中肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）的水平。结果：与对照组比较，LPS组的细胞增殖率降低（P0.05），细胞凋亡率增加（P0.05），细胞中miR-421、cleaved-caspase 3和Bcl-2的表达增加（均P0.05），而细胞中SNHG16和MPC-1的表达减少（均P0.05），细胞培养上清中TNF-、IL-1、IL-6的表达增加（均P0.05）。LPS处理联合SNHG16过表达增加了细胞增殖率（P0.05），减少了细胞凋亡（P0.05），抑制了细胞培养上清中TNF-、IL-1、IL-6的表达（均P0.05）。而SNHG16组的上述作用均被miR-421-mimic部分逆转（P0.05）。在LPS+SNHG16中加入si-MPC-1后，LPS+SNHG16组的上述作用均被si-MPC-1部分逆转（均P0.05）。结论：LncRNA SNHG16通过靶向miR-421/MPC-1轴改善脓毒症诱导的肾细胞炎症和细胞凋亡。关键词长链非编码RNASNHG16；微小RNA-421；线粒体丙酮酸载体1；脓毒症急性肾损伤；细胞凋亡中图分类号：R692文献标志码：A文章编号：1005-930X（2023）07-1107-09DOI：10.16190/ki.45-1211/r.2023.07.005LncRNA SNHG16 improving sepsis-induced nephritis and apoptosis by targeting miR-421/MPC-1 axisYang Danping,Guo Junchuan,Liu Yan,Xiao Dong.(Department of Critical Medicine,Peoples Hospital of Xinji-ang UygurAutonomous Region,Urumqi 830000,China)AbstractObjective:To investigate the effect and mechanism of long non-coding RNA(lncRNA)SNHG16 onsepsis-induced renal cell inflammation and apoptosis.Methods:Human renal proximal tubular epithelial cells(HRPTEC)was induced by lipopolysaccharide(LPS)in vitro to construct a sepsis-like renal cell model.The cellswere divided into control group and LPS group.HRPTEC in LPS group were divided into SNHG16 overexpres-sion group(LPS+SNHG16 group),overexpression empty vector group(LPS+vector group),SNHG16 overexpres-sion combined with miR-421 mimic group(LPS+SNHG16+miR-421 mimic group)and SNHG16 overexpressioncombined with mitochondrial pyruvate carrier-1(MPC-1)small interfering RNA(siRNA)silencing group(LPS+SNHG16+si-MPC-1 group).Luciferase reporter gene detection was used to verify the binding of miR-421 se-quence to SNHG16 sequence and the binding of miR-421 to MPC-1 3-UTR.Real-time fluorescence quantitativepolymerase chain reaction(RT-qPCR)was used to detect the expression levels of SNHG16 and miR-421 in HRPT-EC of each group,western blotting was used to de-tect the expression levels of cleaved-caspase 3,Bcl-2 and MPC-1 in HRPTEC of each group,cell count-ing kit-8(CCK-8)method was used to detect the*基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（No.2021D01C156）通信作者，E-mail：收稿日期：2023-01-13 1107广西医科大学学报2023 Jul.40（7）proliferation rate of HRPTEC of each group and the apoptosis rate was detected by flow cytometry.The levels oftumor necrosis factor-(TNF-),interleukin-1(IL-1)and interleukin-6(IL-6)in cell culture supernatant ofeach group were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results:Compared with the controlgroup,the cell proliferation rate of LPS group decreased(P0.05),the apoptosis rate increased(P0.05),andthe expressions of miR-421,cleaved-caspase 3 and Bcl-2 increased(all P0.05).However,the expressions ofSNHG16 and MPC-1 in cells decreased(all P0.05),and the expressions of TNF-,IL-1 and IL-6 in cell cul-ture supernatant increased(all P0.05).LPS treatment combined with SNHG16 overexpression increased thecell proliferation rate(P0.05),decreased the apoptosis(P0.05),and inhibited the expressions of TNF-,IL-1 and IL-6 in cell culture supernatant(all P0.05).However,the above effects of SNHG16 group were partial-ly reversed by miR-421-mimic(P0.05).The above effects of LPS+SNHG16 group were partially reversed bysi-MPC-1 after adding si-MPC-1 to LPS+SNHG16(all P0.05).Conclusion:LncRNA SNHG16 can improvesepsis-induced renal cell inflammation and apoptosis by targeting miR-421/MPC-1 axis.Keywordslong non-coding RNA SNHG16;small RNA-421;mitochondrial pyruvate carrier 1;sepsis-inducedacute kidney injury;apoptosis脓毒症引起的急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）是一种严重威胁患者生命健康的肾脏疾病1-3，过度炎症反应和肾细胞凋亡是脓毒性AKI的关键过程3。已知过度炎症浸润可直接影响肾实质，促进肾小管细胞凋亡，从而诱发AKI2,4。而减轻脓毒性AKI动物的过度炎症状态已被证明对脓毒性AKI有益，包括改善肾细胞的凋亡和炎症5。然而，关于调控脓毒性AKI炎症反应和细胞凋亡机制的研究仍然较少。长链非编码RNA（long noncoding RNAs，lncRNA）是一类长度大于200 bp的内源性RNA，已被多次报道在脓毒症和AKI疾病的诊断和治疗中具有重要意义6-8。小核仁 RNA 宿主基因 16（SN-HG16）是一种位于染色体 17q25.1 上的 lncRNA9，可通过靶向miR-15a/16表达在内毒素脂多糖（lipo-polysaccharide，LPS）诱导RAW264.7细胞炎症中发挥抗炎作用10。然而，并不清楚SNHG16对脓毒性AKI炎症和肾细胞凋亡的调控作用和机制。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁外壁的重要组成部分，目前广泛用于建立脓毒性AKI模型11。本研究利用LPS处理人近端肾小管上皮细胞（human renal proximal tu-bular epithelial cells，HRPTEC）在体外模拟脓毒性AKI 模型，并探讨过表达 SNHG16 对 LPS 诱导的AKI细胞模型中的炎症反应和细胞凋亡的作用和下游分子机制。1材料和方法1.1试剂与耗材HRPTEC 购于上海弘顺生物科技有限公司。10%胎牛血清（FBS）和杜尔贝科改良Eagle培养基（DMEM）购于美国HyClone公司。兔抗线粒体丙酮酸载体-1（mitochondrial pyruvate carrier 1，MPC-1）的一抗anti-MPC-1、兔抗切割模式的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3（cleaved-caspase 3）的一抗 anti-cleaved-caspase 3、兔抗凋亡蛋白Bcl-2的一抗anti-Bcl-2以及兔抗磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase,GAPDH）的 一 抗 anti-GAPDH 均购于美国 Cell Signaling Technology 公司。蛋白免疫印迹（western blotting）的二抗（山羊抗兔 IgG）购于赛默飞世尔科学公司。微小 RNA（microRNA，miR）-421 的拟似物（miR-421-mimic）以及阴性对照寡核苷酸（miR-NC）购于广州日博生物技术。LPS购于美国Sigma公司。细胞计数试剂盒（CCK-8）试剂盒、白细胞介素（IL）-6/肿瘤坏死因子-（TNF-）/IL-1的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒、Annexin V/碘化丙啶（PI）细胞凋亡染色试剂盒购于上海碧云天公司。重组的荧光素酶报告基因购于上海吉玛公司。SNHG16的pcDNA3.1过表达质粒（SNHG16）和空质粒（vector）、MPC-1小干扰 RNA（Small interfering RNA of MPC-1，si-MPC-1）及其阴性对照（si-NC）、Trizol试剂均购于美国In-vitrogen公司。Lipofectamine3000试剂购于美国Thermo Fisher Scientific公司。SYBR Green MasterMix和PrimeScript RT Reagent试剂盒购于日本Ta-kara公司。1.2细胞培养 1108将HRPTEC置于37、5%CO2的细胞培养箱中，于含10%FBS的DMEM培养基中培养。每24 h更换新鲜培养基，当细胞融合度达到80%，用胰蛋白酶以13的比例进行传代，将对数生长期23代的HRPTEC用于后续实验。1.3细胞转染和分组根据制造商的说明，使用Lipofectamine3000试剂进行HRPTEC转染。在6孔板（2105个细胞/孔）中，分别用6 g/mL SNHG16和6 g/mL vector，6 g/mL si-MPC-1和6 g/mL si-NC，或50 nmol/L的miR-421-mimic和miR-NC转染24 h。HRPTEC分为对照组和LPS组，在24孔板中，LPS组细胞（2105个/孔）以10 g/mL LPS处理细胞24 h，对照组不进行细胞处理。将 LPS 处理后的HRPTEC 分为 LPSSNHG16 组（10 g/mL LPS 和6 g/mL SNHG16转染处理细胞24 h），LPSvector组（10 g/mL LPS 和 6 g/mL vector 转染处理细胞24 h），LPSSNHG16miR-421 mimic 组（10 g/mL LPS 联合 6 g/mL SNHG16 和 50 nmol/L miR-421-mimic共转染处理细胞24 h），LPSSNHG16si-MPC-1 组（10 g/mL LPS 联合 6 g/mL SNHG16和6 g/mL si-MPC-1共转染处理细胞24 h）。收集细胞沉淀和培养物上清液对各组细胞进行后续分析。1.4定量PCR（qPCR）检测根据制造商说明使用Trizol试剂从各组HRPT-EC 中提取总 RNA。根据制造商说明使用 Prime-Script RT Reagent Kit反转录5 g总RNA从而合成cDNA。采 用 StepOnePlus 系 统 和 SYBR GreenMaster Mix进行qPCR。GAPDH作为内参基因，使样品中靶基因的表达水平的标准统一。用相对定量方法（2Ct）计算表达水平的倍数变化。本研究使用的引物由生工生物工程（上海）技术有限公司合成：MPC-1 正：5-CAT CTC AAA CAG ATG TCTGAC-3；MPC-1 反：5-TAA TGT CTC CGT GCACAG TCT T-3。SNHG16 正:5-CAG TCA GCCTCA GTT TCC AA-3；SNHG16 反:5-AGG CAGGGC TGC TGA T-3。miR-421 正:5-CGG CGGGGC CTC ATT AAA TGT T-3；miR-421 反:5-CAG TGC AGG GTC CGA GGT AT-3。GAPDH正:5-ATG ACT CTA CCC ACG GCAAG-3；GAP-DH 反:5-CTG GAA GAT GGT GAT GGG TT-3。U6 正：5-TTG ACT CCA CAA AAG GGA AGAAG-3，U6 反：5-TCC AGA GGT CTG TTG AATCCG-3。1.5双荧光素酶报告试验为证明SNHG16与miR-421之间的结合关系，将野生型结合位点的序列或含有突变型结合位点的序列分别克隆到表达萤火虫荧光素酶载体中。用 Lipofectamine3000 将 野 生 型 SNHG16（SN-HG16-WT）和突变型 SNHG16（SNHG16-MUT）荧光素酶报告载体分别与miR-421 mimic或miR-NC共转染到HRPTEC中（1105细胞/孔）；24 h后使用荧光素酶报告基因检测试剂盒评估荧光素酶活性。另外，用Lipofectaminee3000将野生型MPC-1 3-UTR（MPC-13-UTR-WT）和突变型MPC-1 3-UTR（MPC-13-UTR-MUT）的荧光素酶报告载体分别与miR-421 mimic或miR-NC共转染到HRPT-EC（1105个细胞/孔）中；24 h后使用荧光素酶报告基因检测试剂盒评估荧光素酶活性。1.6CCK-8细胞增殖实验将细胞以 1 500 个/孔的密度接种到 96 孔板中。根据“1.3项”中的处理方法，各组处理时长为0 h、24 h、48 h和72 h。每个时间点到后在培养细胞中加入CCK-8试剂（10 L/孔），在37 培养箱中再孵育2.5 h。光密度（OD）作为相对存活细胞数的指标，在450nm波长下用酶标仪读数。1.7 细胞凋亡检测根据“1.3项”中的分组，收集细胞并在1An-nexin V结合缓冲液中重悬。根据制造商说明细胞用Annexin V-FITC和PI进行染色，用流式细胞术进行检测。用Annexin V+细胞计数计算凋亡细胞的百分比。1.8Western blotting检测提取各组细胞蛋白样品用12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，随后转移到聚偏二氟乙烯膜上。用5%脱脂牛奶在室温下封闭1 h后，与 anti-MPC-1（1600）、anti-cleaved-caspase 3（1800）、anti-Bcl-2（11 000）、anti-GAPDH（110 000）孵育过夜（4）。清洗抗体后，用山羊抗兔二抗（15 000）室温孵育1.5 h。用增强型化学发光试剂盒令蛋白条带显色。使用 Image J 软件分析条带灰度值。GAPDH作为内参蛋白使样品中蛋白的表达水平的标准统一。1.9ELISA检测按“1.3项”中的分组，将细胞接种到96孔板中杨丹平，等.LncRNASNHG16通过靶向miR-421/MPC-1轴改善脓毒症诱导的肾炎和细胞凋亡 1109广西医科大学学报2023 Jul.40（7）24 h。收集细胞上清液，根据试剂盒提供的流畅取100 L上清液用相应的ELISA试剂盒测定 IL-1、IL-6和TNF-的浓度。1.10统计学方法采用GraphPad Prism 5.01进行数据录入和统计学分析，正态分布的计量资料采用均数标准差（x s）表示。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）和重复测量的方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1LPS诱导体外脓毒症样肾细胞炎症和细胞凋亡用LPS作为内毒素处理HRPTEC，在体外模拟脓毒症诱导的肾损伤和肾炎。用10 g/mL LPS处理HRPTEC后，与对照组（96.683.01）%比较，LPS组HRPTEC的增殖率（48.594.69）%被显著抑制（P0.05）（图1A）。与对照组（1.030.06）%比较，LPS组HRPTEC的凋亡率（36.190.21）%被显著上调（P0.05）（图 1B）。与对照组（1.000.12）比较，LPS 组的 cleaved-caspase 3 的蛋白水平（3.060.66）升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2水平（0.450.11）降低（图1C）。与对照组（1.000.14、1.000.03、1.000.06）比较，HRPTEC培养上清中TNF-、IL-1和IL-6水平（4.420.50、6.181.06、7.300.58）均升高（P0.05）。2.2SNHG16通过靶向抑制miR-421调控靶基因MPC-1用 Starbase（http:/ 测miR-421 和 SNHG16 碱 基 序 列 以 及 miR-421 和MPC-1碱基序列的结合。预测结果表明，miR-421是SNHG16的潜在靶点，miR-421与SNHG16序列具有高度的互补性（图2A），而且MPC-1是miR-421的潜在靶基因，miR-421与MPC-1序列也具有高度的互补性（图 2B）。与 miR-NC 组相比，miR-421mimic组抑制SNHG16-WT转染的HRPTEC的荧光素酶活性。而 miR-421 mimic 并未抑制 SNHG16-MUT转染的HRPTEC的荧光素酶活性（图2C）。另外，miR-421 mimic可以抑制MPC-1 3 UTR-WT荧光素酶活性，而未影响MPC-1 3 UTR-MUT的荧光素酶活性（图2D）。SNHG16过表达后miR-421表达水平降低（图2E），而miR-421在LPS诱导后表达显著升高（图 2F）。Western blotting 实验还证实，miR-421 mimic可明显抑制MPC-1的蛋白水平（图2G）。同时，SNHG16过表达对MPC-1表达水平的影响也被miR-421 mimic削弱（图2H）。2.3SNHG16通过靶向抑制miR-421减轻脓毒症样肾细胞炎症和细胞凋亡在肾细胞中成功过表达了SNHG16和miR-421（图 3A 和图 3B）。与 LPSvector 组比较，LPS SNHG16 组凋亡细胞比例明显降低（P0.05）（图3C），而经重复测量方差分析显示，与LPSvector组比较，LPSSNHG16组在处理48 h、72 h时细胞的增殖率都明显增加（P0.05）（图3D）。与LPSSNHG16组比较，LPSSNHG16miR-421 mimic组增加了凋亡细胞比例（P0.05）（图3C），重复测量方差分析显示，与LPSSNHG16组比较，LPSSNHG16 miR-421 mimic组在处理48 h、72 h时抑制了细胞的增殖率（P0.05）（图 3D）。与 LPSvector组比较，LPSSNHG16组的cleaved-caspase 3的蛋白水平明显降低（P0.05），而Bcl-2却明显增加（P0.05）（图3E）。与LPS SNHG16组比较，LPSSNHG16miR-421 mimic组抑制了Bcl-2的蛋白水平（P0.05），而提高了cleaved-caspase 3的蛋白水平（P0.05）（图3E）。与LPSvector组比较，LPSSNHG16组的细胞培养上清中TNF-、IL-1和IL-6水平明显降低（P0.05）（图3F3H）。与LPSSNHG16组比较，LPSSNHG16miR-421mimic 组 TNF-、IL-1和IL-6水平增加（P0.05）（图3F3H）。2.4MPC-1表达增加是SNHG16减轻脓毒症样肾细胞炎症和细胞凋亡的必要条件在肾细胞中成功沉默了 MPC-1（图 4A）。与LPS+SNHG16组比较，LPS+SNHG16+si-MPC-1组增加了凋亡细胞比例（P0.05）（图4B）。重复测量方差分析显示，与LPS+SNHG16组比较，LPS+SN-HG16si-MPC-1组处理48 h、72 h时抑制了细胞的增殖率（P0.05）（图4C）。与LPSSNHG16组比较，LPSSNHG16si-MPC-1 组 TNF-、IL-1 和IL-6水平提高（P0.05）（图4D4F）。1110A：LPS处理HRPTEC，24 h后用CCK-8细胞增殖实验量化活细胞比例；B：流式细胞术分析LPS处理HRPTEC后AnnexinV/PI染色的凋亡情况；C：Western blotting分析LPS诱导的cleaved-caspase 3和Bcl-2蛋白水平的变化；与对照组比较，*P0.05。图1内毒素LPS刺激对HRPTEC的增殖、凋亡率和凋亡因子表达的影响A：预测野生型SNHG16与miR-421序列的结合；B：MPC-1 3 UTR与miR-421序列的结合；C：SNHG16-WT和SNHG16-MUT的相对荧光素酶活性；D：MPC-1 3 UTR-WT和MPC-1 3 UTR-MUT的相对荧光素酶活性；E：RT-qPCR法检测SNHG16过表达对miR-421的影响；F：RT-qPCR法检测LPS对miR-421的影响；G：Western blotting法检测miR-421过表达对MPC-1的影响；H：Western blotting法检测LPS联合SNHG16过表达对MPC-1的影响，以及LPS联合SNHG16过表达加入miR-421 mimic后对MPC-1的影响；组间比较，*P0.05。图2SNHG16通过靶向抑制miR-421调控靶基因MPC-1杨丹平，等.LncRNASNHG16通过靶向miR-421/MPC-1轴改善脓毒症诱导的肾炎和细胞凋亡 1111广西医科大学学报2023 Jul.40（7）A：在HRPTEC中转染SNHG16过表达质粒后，通过RT-qPCR量化SNHG16的表达；B：在HRPTEC中转染miR-421 mimic后，通过qPCR量化miR-421的表达；C：Annexin V/PI染色的流式细胞术分析各组细胞的凋亡比例；D：CCK-8增殖实验检测各组细胞的增殖活性；E：Western blotting分析cleaved-caspase 3和Bcl-2蛋白的表达；F：ELISA检测细胞培养上清中炎性细胞因子TNF-的水平；G：ELISA检测细胞培养上清中炎性细胞因子IL-1的水平；H：ELISA检测细胞培养上清中炎性细胞因子IL-6的水平。组间比较，*P0.05。图3SNHG16通过靶向抑制miR-421减轻脓毒症样肾细胞炎症和细胞凋亡 11123讨论循环系统炎性细胞因子如IL-6和TNF-与AKI患者死亡风险的增加有关，而且肾细胞凋亡增加也是AKI的主要特征2。本研究用10 g/mL LPS显著促进了HRPTEC的凋亡和TNF-、IL-1和IL-6的表达水平，这些结果说明利用LPS诱导的HRPTEC的炎症和凋亡反应，能够在体外模拟脓毒性AKI 模型。研究表明，lncRNA对脓毒症相关疾病具有调控作用6-8。如lncRNA TUG1可通过调节miR-34b-5p/GAB1轴抑制脓毒性急性肺损伤诱导的炎症和凋亡12。SNHG16通过靶向miR-15a/16表达在LPS诱导RAW264.7细胞炎症中发挥抗炎作用10。本研究也观察到LPS明显抑制了SNHG16的表达，而过表达SNHG16通过抑制miR-421促进MPC-1蛋白表达，从而抑制了 LPS 诱导下 HRPTEC 的凋亡和IL-1、IL-6和TNF-的表达水平。表明LPS通过抑制SNHG16调控HRPTEC的炎症和凋亡反应，而过表达SNHG16可以治疗抑制LPS诱导的炎症和凋亡反应。miRNA是长度为1925个核苷酸的小型双链RNA。通过调控mRNA的翻译抑制或降解增强调节转录后基因表达，在肾损伤和修复中扮演重要角色13。miR-421是一种促癌基因，可通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡调控肾细胞癌的发展14。另外，miR-421 已被报道可加重多种疾病的炎症反应15，如支气管肺发育不良16和类风湿关节炎17。在本研究中，LPS处理HRPTEC中miR-421水平升高，而这种升高可被SNHG16抑制。另外，miR-421靶基因 MPC-1 的水平被 SNHG16 增加，但过表达miR-421可逆转SNHG16的作用从而发挥促凋亡和促炎症反应的作用。表明SNHG16通过降低miR-421的表达来抑制LPS刺激下形成的AKI。作为线粒体丙酮酸载体复合物之一，MPC-1被报道可调控细胞的活力、凋亡和炎症反应等生物学过程18-19。早期发现，酵母中MPC-1缺失导致生长A：在HRPTEC中转染MPC-1的小干扰RNA质粒后，通过Western blotting量化MPC-1的表达；B：Annexin V/PI染色的流式细胞术分析各组细胞的凋亡比例；C：CCK-8增殖实验检测各组细胞的增殖活性；D：ELISA检测细胞培养上清中炎性细胞因子TNF-的水平；E：ELISA检测细胞培养上清中炎性细胞因子IL-1的水平；F：ELISA检测细胞培养上清中炎性细胞因子IL-6的水平。组间比较，*P0.05。图4SNHG16通过上调MPC-1减轻脓毒症样肾细胞炎症和细胞凋亡杨丹平，等.LncRNASNHG16通过靶向miR-421/MPC-1轴改善脓毒症诱导的肾炎和细胞凋亡 1113广西医科大学学报2023 Jul.40（7）出现缺陷20，而抑制或敲除MPC-1严重阻碍了小鼠的胚胎发育21-22。本研究表明，LPS刺激后HRPTEC中MPC-1的表达降低，而MPC-1可被SNHG16过表达正向调控，也可被miR-421过表达抑制。在LPS刺激的HRPTEC细胞中，敲低MPC-1抑制了过表达SNHG16引起的细胞增殖活性增加，并重新提高细胞凋亡率和炎症因子表达。因此，这些数据表明SNHG16 通过调节 miR-421/MPC-1 轴促进 MPC-1减缓LPS诱导的AKI。综上所述，本研究表明在AKI细胞模型中，SN-HG16过表达能抑制细胞凋亡和炎症反应，增强细胞增殖活性。SNHG16直接可抑制miR-421，并引起miR-421靶基因MPC-1的激活，最终减轻肾脏细胞炎症和细胞凋亡。因此，SNHG16 是通过调节miR-421/MPC-1轴缓解了脓毒性AKI，这可为脓毒性AKI的诊断和治疗提供有意义的靶点。参考文献：1LEE S A,NOEL S,SADASIVAM M,et al.Role of im-mune cells in acute kidney injury and repairJ.Nephron,2017,137(4):282-286.2 DELLEPIANE S,MARENGO M,CANTALUPPI V.Det-rimental cross-talk between sepsis and acute kidney inju-ry:new pathogenic mechanisms,early biomarkers and tar-geted therapiesJ.Critical care,2016,20(1):1-11.3 金魁,王玉兰,汪跃国,等.不同感染部位脓毒症急性肾损伤发生率及相关死亡风险分析J.临床急诊杂志,2021,22(7):445-452.JIN K,WANG Y L,WANG Y G,et al.Risk factors andoutcomes of acute kidney injury among septic patientswith different infection sites J.Journal of clinical emer-gency,2021,22(7):445-452.4PEERAPORNRATANA S,MANRIQUE-CABALLEROC L,GMEZ H,et al.Acute kidney injury from sepsis:current concepts,epidemiology,pathophysiology,preven-tion and treatmentJ.Kidney international,2019,96(5):1083-1099.5WANG J,XIONG M,FAN Y,et al.Mecp2 protects kid-ney from ischemia-reperfusion injury through transcrip-tional repressing IL-6/STAT3 signalingJ.Theranostics,2022,12(8):3896-3910.6 CHANDRA GUPTA S,NANDAN TRIPATHI Y.Potentialof long noncoding RNAs in cancer patients:from bio-markers to therapeutic targetsJ.International journal ofcancer,2017,140(9):1955-1967.7WANG S M,LIU G Q,XIAN H B,et al.LncRNANEAT1 alleviates sepsis-induced myocardial injury byregulating the TLR2/NF-B signaling pathwayJ.Europe-an review for medical and pharmacological sciences,2019,23(11):4898-4907.8 JIANG Z J,ZHANG M Y,FAN Z W,et al.Influence of ln-cRNA HOTAIR on acute kidney injury in sepsis ratsthrough regulating miR-34a/Bcl-2 pathwayJ.Europeanreview for medical and pharmacological sciences,2019,23(8):3512-3519.9HAN W,DU X M,LIU M,et al.Increased expression oflong non-coding RNASNHG16 correlates with tumor pro-gression and poor prognosis in non-small cell lung cancerJ.International journal of biological macromolecules,2019,121(1):270-278.10 WANG W Y,LOU C Y,GAO J,et al.LncRNA SNHG16reverses the effects of miR-15a/16 on LPS-induced in-flammatory pathwayJ.Biomedicine&pharmacothera-py,2018,106(1):1661-1667.11 LI H,ZHANG X,WANG P,et al.Knockdown of circ-FANCAalleviates LPS-induced HK2 cell injury via target-ing miR-93-5p/OXSR1 axis in septic acute kidney injuryJ.Diabetology&metabolic syndrome,2021,13(1):1-14.12 QIU N,XU X,HE Y.LncRNA TUG1 alleviates sepsis-in-duced acute lung injury by targeting miR-34b-5p/GAB1J.BMC pulmonary medicine,2020,20(1):1-12.13 LIU Z,WANG Y,SHU S,et al.Non-codi