微生物实验室常见20种培养基配方大全.docx
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1、一、糖发酵管成分:牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠 2g0.2滇麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLPH 7.4制法1.葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121高压灭菌15min。2.其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶1000 mL,121高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内,以无菌操作分装小试管。注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于361培养,一般观察23d。迟缓反应需观察1430d。二、乳糖
2、胆盐发酵管成分:蛋白胨20g猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液25mL蒸馏水1000mL制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10 mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌15min。注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。三、5乳糖发酵管成分:蛋白胨0.2g氯化钠0.5g乳糖5g2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2mL蒸馏水100mLpH 7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌12115min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵
3、的细菌可于ld内发酵。四、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水1000mL制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121高压灭菌15min。甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于361培养25d,哈夫尼亚菌则应在2225培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性,甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95乙醇中,然后加入20 mL蒸馏水。V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于361培养24d。哈夫尼亚菌则应在2225培养。加入6-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40氢氧化钾溶液0.2mL充分振摇试
4、管,观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在361下培养4h再进行观察。五、营养明胶成分:蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mLpH 6.87.0制法:加热溶解,校正至pH7.47.6,分装小管,121高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固,复查最终pH应为6.87.0。试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在2225培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。六、苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mL制法:加热溶解后分装试管
5、,121高压灭菌15min,使成斜面。试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36士1培养4h或1824h,滴加10三氯化铁溶液23滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。七、蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨)20g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌15min。靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25ml。欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸20 ml。试验方法:挑取小量培养物接种,在36士1培养12d
6、,必要时可培养45d。加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5 mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。八、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000 mL制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115高压灭菌15min,取出直立候其凝固。试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36士1培养12d,观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。注:肠杆菌科细菌测定
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