宫颈膜式液基细胞学检查在宫颈癌前病变早期筛查中的临床应用.pdf
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1、山东省医学科学院 硕士学位论文宫颈膜式液基细胞学检查在宫颈癌前病变早期筛查中的临床应_ _ _姓名:王宏_ _申请学位级别:硕士_ _专业:肿瘤学_ _揖导教师:盛修堡_ 2010030120KF 5-26宫颈膜式液恭细胞学检杳在宫颈媚前病变早期筛劣中的临床应用宫颈膜式液基细胞学检查在宫颈癌前病变早期筛查中的临床应用专 业:肿瘤学研究生:王宏 导 师:盛修贵研究员中文摘要目的:评价宫颈膜式液基细胞学(ThinPreP Cytology Test TCT)检查在宫颈 上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia CIN)的早期筛查中 的应用价值,评价细胞学
2、(TCT)和HPV检测在筛查宫颈癌中的作用,同时调查我市 宫颈上皮内瘤样病变患者的疾病构成及年龄分布特征。方法:2009年6月2009年12月,选取就诊章丘市妇幼保健院妇产科行宫颈膜 式液基细胞学检查(TCT)的600名患者,均为无宫颈椎切和子宫切除史、从未参加 过细胞学普查的已婚妇女,制片后剩余在保存液小瓶中的标本行13种(16、18、31、33、35、39、45 51、52、56、58、59、68)肿瘤相关HPV DNA检测(液基标 本HPV检测)。对细胞学阳性患者或细胞学虽阴性但临床高度可疑患者40例共计 101例患者行电子阴道镜检查,在阴道镜下异常图像处或图像正常者于宫颈3、6、9、1
3、2四点定位活检,以病理结果作为金标准,评价宫颈膜式液基细胞学检查(TCT)在临床的应用价值,评价细胞学(TCT)和HPV检测在筛查宫颈癌中的一致性,同时 调查本市宫颈上皮内瘤样病变的疾病构成及患者年龄分布特征、临床特征。结果:TCT检查采用TBS(The Bethesda System)分类,600例患者中共检出细 胞学阳性涂片61例,占10.17%,其中不典型鳞状上皮细胞(Atypical Squamous Cells Of Undetermined significance ASCUS)35 例(5.8%);不典型腺细胞(Atypical glandular cell AGC)3例(0.5
4、%);低度鳞状上皮内病变(Low Grade Squamous Intraepithelial Lesion LSIL)15例(2.5%);高度鳞状上皮内病变(High Grade Squamous Intraepithelial Lesion HSIL)5例(0.83%);鳞状细胞癌(Squamous Cell Carcinoma SCC)3例(0.5%);腺癌(Adenoeareinoma AC)1 例(0.17%).细胞学与阴道镜下活组织病理诊断符合率分别为LSIL:60%(9/15),1山东省医学科学院硕士论文HSIL:80%(4/5),SCC:100%(3/3),就诊本院患者中宫颈上
5、皮内瘤样病变占5.09%,3045岁的妇女为宫颈上皮内瘤样病变(CIN)的高发年龄阶段,占70.5%(43/61)o 有液基标本HPV检测结果者101例(4例标本不满意未做检测),阳性者95例,敏感性 是 94.15%.结论:采用TCT检查可以提高宫颈上皮内瘤样病变的阳性诊断率,细胞学阳性 或临床可疑患者应配合阴道镜检查及镜下活检进一步明确诊断及治疗,重视宫颈 上皮内瘤样病变的规范化筛查。细胞学(TCT)和HPV检测在筛查宫颈癌中具有一致 性,TCT联合HPV亚型检测能够提高CIN和宫颈癌的检出率。章丘市宫颈上皮内瘤 样病变的疾病构成比不高,因地制宜选择有效筛查手段早期发现与治疗宫颈上皮 内瘤
6、样病变。关键词:TCT;宫颈上皮内瘤样病变;早期筛查;阴道镜检查;HPV检测22010-5-26宫颈膜式液基细胞学检查在宫颈离前病变早期筛位中的临床应用Value of Liquid一based Cytologyin The ScreeningForCervical intraePithelial NeoPlasiaAuthor:Wang HongTutor:Researcher Sheng XiuguiAbstractObjective:to evuate the value ofTCT in the screening for CIN and to investigate the dise
7、ase constitute and the age structure of CIN in the hospital,to evuate the concordance between thinprep cytology and HPV testing for screening cervical carcinoma.Methods:F rom July 2009 to Decenber 2009,600 cases were detected by TCT in the hospital,the positive results or the negative results but hi
8、ghly suspected patients in clinic amount to 101 cases were detected with colposcope and taken cervical biopsy under guidance of colposcopic for pathological examination.if colposcope was normal,taken cervical biopsy at 3、6、9、12 Ocolck.to compare cytological results with paghlolgical results,and eval
9、uate the value of TCT.Cervical samples were collected into a liquid buffer and utilized for both cytologic screening using and HPV testing of residual liquid-based cytologic samples.At the same time,to investigate the disease constitute and the age structure and clinic symptom of cervical CIN in the
10、 hospital.Results:the cytological diagnosis criteria were based on the bethesda system.61 positive cases were detected with the rate of 10.17%,35 cases were found with ASCUS,3 cases AGC,15 cases with LSIL,5 cases with HSIL,3 cases with SCC and 1 case with AC with the detective rate of 5.8%,0.5%,2.5%
11、0.83%,0.5%,and o.l7%.The ratio of consistent results between cytology and pathology was:60%for LSIL(9/15),80%for HSIL(4/5),100%for SCC(3/3).There were nosignificant difference for the sensitivity between Thinprep cytology and HPV testing residual(P0.05).The specificity of Thinprep cytology was signi
12、ficant greater than the specificity of HPV testing(P0.05)0液基标本HPV检测敏感性高,如和TCT结和起来只需一次取材就能完成 这两种检查且诊断敏感性能显著提高。子宫颈癌主要危害那些无法得到或充分利用筛查的妇女口叫与发达国家相 比,发展中国家因财力、技术的缺乏仅有少数妇女能够得到宫颈癌前病变的筛查,致使85%的子宫颈癌患者死亡。在我国,目前可应用的宫颈癌前病变筛查方法有 肉眼检查,传统巴氏细胞学涂片法,液基细胞学法,HPV检测法,阴道镜检查及 子宫颈摄片,荧光镜检法等等。每种筛查方法的筛查效力及经济花费有着很大的 差别。东西部地区经济发展
13、的不平衡制约着宫颈病变早期筛查在我国的推广实 施。当东南部经济发达地区早已开展液基细胞学检查结合HPV检测高效率的筛查 宫颈病变的同时,在中西部经济不发达地区,有些地方缺乏专业的细胞学技术人 员,尚不能开展简单的传统巴氏涂片的筛查,无法进行规范化的“三阶梯”方案 筛查,致使广大妇女直接面临宫颈癌的威胁。自巴氏涂片问世以来,在全球范围内已减少了70%90%的子宫颈癌,但在诊 断上存在较高的假阴性率,假阴性原因有50%90%产生于标本的缺陷主要有 7山东省医学科学院硕I:论文以下两种:(1)取材器上的病变细胞没有被转移到玻片上。传统巴氏涂片有80%以 上细胞随取材器被丢弃。(2)涂片质量差:过厚、
14、过多的粘液、血液或炎细胞遮盖 正常细胞,影响正常判断皿闻。宫颈细胞学引入了TBS(The Bethesda System)细胞分类系统,此系统于1991 年正式推广应用,在2001年得到进一步完善。其强调细胞学报告为医学会诊单,评估并报告细胞学标本的满意度,将标本质量信息反馈给临床已获得对病变的 正确评价和有效的标本质量改进。诊断术语标准化,能明确反映有意义的形态 学发现。采用描述性诊断,引入术语鳞状上皮内病变(Squamous Intraepithelial Lesion,SIL),不典型鳞状细胞(AtypiCal Squamous Cells,ASC)和不典型腺细胞(Atypical Gl
15、andular Cells,AGC)0提出适当建议以 利临床医生对病变进一步评价。1996年,美国FDA批准了改善的制片技术一薄层 液基细胞学技术。目前主要有膜式液基薄层技术(ThinPreP Cytolosy Test,TCT)和离心沉淀式液基薄层细胞学(AutoCyteprep和Cytoscreen)二种。大量研究表 明,该技术可显著提高对宫颈病变诊断的灵敏度,认为其可替代传统巴氏涂片成 为宫颈病变普查的常规方法。且其细胞保存液可以较好的保留细胞的DNA信息,可以直接用于检测HPV DNA,HPV DAN杂交捕获(Hybrid Capture HC2)技术已为美 国FDA认证,阴性预测值达
16、100%。即阴性可以认为无HPV感染。本世纪初,先进的 宫颈液基细胞学技术传入我区,给我区广大妇女带来了福音。本课题着眼于章丘 市的广大妇女,利用膜式液基细胞学技术及阴道镜筛查早期宫颈癌及癌前病变,同时调查后者的疾病构成及年龄特征,希望结合我市经济条件,摸索出适合我市 的经济有效的筛查方案。8201-5-26宫颈膜式液基细胞学检查在宫颈爆前病变早期筛查中的临床应用材料与方法1.一般资料2009年6月2009年12月就章丘市妇幼保健院门诊行TCT检查的患者600例,年龄2065岁,对其中阳性涂片61例和细胞学虽阴性但有接触性出血或血性白带 或不规则阴道流血等临床高度可疑症状的40例患者,共计10
17、1例患者行阴道镜检 查同时行镜下活组织检查。制片后剩余在保存液小瓶中的标本行13种(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)肿瘤相关HPV DNA检测(液基标 本HPV检测)o2.方法2.1 实验仪器(1)薄层液基细胞学检测系统(TCT)(美国Cytyc公司生产,中国金域国际有 限公司代理的ThinPrep装置)包括宫颈细胞采样器、细胞保存液、全自动细胞制 片机,过滤膜玻片、盖玻片以及图像分析系统。(2)阴道镜(美国威龙公司WELCHALLYN,工NC生产的89000型悬臂式电子阴道 镜)(3)美国Digene公司的第二代杂交捕获试验(HC-II)的采样工
18、具包从宫颈管 采集标本,进行H6H检测操作并作出分析,检测目前已知的13种致癌型HPV DNA(即 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68),检测阳性的标准 为标本HPMDNA21.0ng/Lo2.2 标本采集及注意事项薄层液基细胞学(1)标本采集及处理患者取膀胱截石位,窥阴器扩开阴道,若见宫颈或阴道残端分泌物多,使用 无菌盐水棉球擦拭,然后将细胞采样器的无菌毛刷插入颈管内,将该毛刷均匀散 布于子宫颈移行带上,顺时针转动采样毛刷8至10圈,将刷头分开并推入保存液 中,扭紧瓶盖,注明病人姓名、年龄、末次月经时间、宫颈糜烂程度、标本编号、送检医师、取样日期及电
19、话号码等资料,送至妇科TCT化验室登记待检。(2)TCT制片技术将细胞标本通过全自动制片机系统程序化处理,将标本中的粘液、血液和炎 9 山东省医学科学院硕士论文细胞分离,制成直径13mm的单层细胞涂片。(3)注意:1、经期不能取材;2、分泌物太多时要用干棉签擦干净后再取。3、宫颈糜烂严重的旋转不要超过3圈,以免出血。4、旋转时向同一方向,不要 来回转动以免加大创伤引起出血。2.3 TCT介绍2.3.1 膜式液基薄层细胞学(TCT,中文新柏氏)针对传统细胞学的局限,TCT在细胞学技术上取得了革命性突破,将检出率提高了60%左右.符合TBS诊断标 准,能为临床早期诊断宫颈病变提供有力证据。该方法制
20、成的细胞膜片具有传统 涂片无法比拟的优点。1996年5月FDA批准把此法用于临床,并且指出膜式液基薄 层细胞学技术可代替传统巴氏涂片,并使宫颈低度病变和高度病变的检出率有了 显著提高。2.3.2 新柏氏取样器 获得专利的扫帚状取样器;精确的解剖设计,确保 能在宫颈移行带取到细胞;一次能取到140万个细胞;方便简单的取材过程。2.3.3 新柏氏保存液采用液基保存方法 新柏氏保存液采用液基保存方法,几乎100%保存了取样器上所有的细胞,常温可保存4周;保证细胞完整结构,制 片后仍可保证足够的细胞数,可进一步直接做HPV DNA、衣原体、淋病及免疫组 化测试;保证医生的健康,15分钟内彻底杀灭所有的
21、病菌及微生物;保存液同时 能分解黏液,确保制备的标本背景清晰。2.3.4高精密度的过滤膜 过滤膜采用国际领先的负离子加速器技术制备 而成,抛弃了80年代的离心沉淀式技术;过滤膜上的7万个微米的小孔,能够采 集到所有有诊断价值细胞的信息;过滤膜细胞采集区直径20mm,锁定观察细胞的 视野范围,避免漏诊;标本分布均匀、具有代表性。2.3.5整个过程由计算机程序控制,主要步骤包括细胞混匀、细胞负压采集、细胞转移、制片、染色和镜检。其优点是清除了杂质,形成一个清晰的细胞单层 涂片,病理医生可以一目了然,使宫颈癌尤其是癌前病变的诊断率显著提高。此 外,TCT的保存液还可以直接用于人乳头瘤病毒基因检测。目
22、前该技术已广泛用 于妇女宫颈癌筛查,缺点是检测费用比较昂贵。2.4 细胞染色:采用巴氏染色法巴氏染色步骤:将制备好的细胞涂片置于95%酒精中固定15分钟;再将细胞 涂片置于苏木素染液中染色10分钟;纯净水冲洗细胞涂片5分钟,以去除苏木素 2010-5-26宫颈膜式液基细胞学检杳在宫颈癌前戕变早期筛杳中的临床应用染液;后将细胞涂片放入稀盐酸脱色30秒;再将细胞涂片置于95%酒精中,固定 约2分钟;将细胞涂片在橘黄G6中染色2分钟;后置于95%酒精中2次,迅速冲洗去 掉多余之橘黄;最后将细胞涂片在EA50染液中染色2分钟,至胞浆着色鲜明为止;置于95%酒精中洗涤2次,去掉多余之染料;封片。2.5
23、细胞学分类方法采用2001年国际癌症协会(national cancer institute,NCI)推荐的新TBS(The Bethesda System)分级系统进行细胞学诊断。细胞学诊断结果:见附 图1、附图2、附图3、附图4.宫颈上皮内病变阴性(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NILM)包括良性反应性细胞改变;宫颈未明确诊断意义的非典型鳞 状上皮细胞(atypical squamous cells of un-etermined significance,ASC-US);低级别宫颈鳞状上皮内病变(low-grade s
24、quamous intraepithelial lesion,LSIL):高级别宫颈鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL);宫颈鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCO;未明确诊断意义的非典型腺细胞(AGC-US)和腺癌(ACC)o为统一细胞学 和组织学诊断术语,ASC-US及其以上者为细胞学阳性结果,LSIL包括HPV感染的 细胞变化和CINI,HSIL包括CINO、CIMH和原位癌。2.6 宫颈癌前病变病理诊断2.6.1鳞状上皮细胞异常改变ASCUS(鳞状上皮细胞增生,又不排除高度病 变)指
25、鳞状上皮细胞内改变,但从细胞质量和数量上不足以作出明确判断(意义 不明确)。ASCUS标准:胞体增大,核大,为正常中层的2.53倍;核浆比增加(核 浆失比);核轻度深染,染色质分布轻度不均,核形不规则;核异常伴随胞浆改 变(深染);可见双核;核轮廓光滑规则;指对整个标本而言,而不是对单个细 胞;也适合无胞浆的裸核;细胞多见,单个排列,也可见片状排列;诊断HPV证 据不足,但又不能排除细胞内病变;不典型修复细胞(胞体增大、核浆失比);角 化不良(核较正常角化细胞核大的多);不典型萎缩细胞(核增大、核浆失 比);ASCUS颇似垃圾桶,凡判断不清的,统统盛入其中;可作为进一步活检的最 低指标;ASC
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