HPLC指纹图谱结合化学计量学评价不同产地木棉花药材质量.pdf
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1、收稿日期:2022-05-03基金项目:国家工业和信息化部2019年产业技术基础公共服务平台项目(编号:2019-00902-1-2)作者简介:黎桃敏,研究方向:中药配方颗粒与经典名方制备工艺研究,E-mail:*通讯作者:魏梅,硕士,主任药师,主要从事中药制剂工艺与质量控制研究,E-mail:weime-296 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期HPLC指纹图谱结合化学计量学评价不同产地木棉花药材质量黎桃敏1,2,陈丹燕1,2,余欣彤1,2,甘力帆1,2,张兰兰1,2,黄 森1,2,魏 梅1,2*(1.广东一方制药有限公司,广东 佛山 528244;2.广东省中
2、药配方颗粒企业重点实验室,广东 佛山 528244)摘 要:目的 建立木棉花药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及芒果苷含量测定方法,评价不同产地木棉花药材质量。方法 采用HPLC测定15批木棉花药材的指纹图谱,结合相似度评价、热图聚类分析、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对其指纹图谱信息进行研究,筛选出引起木棉花质量差异的主要化学成分并进行含量测定。结果 建立了木棉花药材HPLC指纹图谱,共确定8个共有峰,并指认了4个共有峰。15批木棉花药材指纹图谱的相似度均大于0.990;热图分析表明不同产地木棉花药材的化学成分含量存在差异,聚类分析(CA)可将15个样品聚
3、为2类;PCA结果显示前2个主成分的累计贡献率为83.938%,可反映原始色谱峰的大部分信息;OPLS-DA结果将样品分为3类,并筛选出2个VIP值大于1的差异性成分,分别是芒果苷和峰8;芒果苷含量与指纹图谱综合评分呈显著正相关性,均显示云南产地的木棉花药材质量更优。结论 不同产地木棉花药材质量存在一定差异。本研究建立的方法可为木棉花药材的质量评价及控制提供参考。关键词:木棉花;HPLC指纹图谱;化学计量学;芒果苷;含量测定;质量评价中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1672-979X(2023)04-0296-06DOI:10.3969/j.issn.1672-979X.2
4、023.04.002Quality Evaluation of Kapok from Different Sources Based on HPLC Fingerprint and ChemometricsLI Tao-min1,2,CHEN Dan-yan1,2,YU Xin-tong1,2,GAN Li-fan1,2,ZHANG Lan-lan1,2,HUANG Sen1,2,WEI Mei1,2(1.Guangdong Yifang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Foshan 528244,China;2.Guangdong Provincial Key Laborat
5、ory of Traditional Chinese Medicine Formula Granule,Foshan 528244,China)Abstract:Objective To establish HPLC fingerprints and a method for the determination of mangiferin in kapok,and evaluate the quality of kapok from different areas.Methods The fingerprints of 15 batches of kapok was determined by
6、 HPLC,and the fingerprint information was studied by combining similarity evaluation,thermogram cluster analysis,principal component analysis(PCA)and orthogonal partial least squares discriminant analysis(OPLS-DA),and the main chemical components that caused the quality difference of kapok were scre
7、ened and determined.Results The HPLC fingerprints of kapok were established.A total of 8 common peaks were marked,and 4 common peaks were identified.The similarity of fingerprints of 15 batches of kapok was greater than 0.990.The heat map showed that there were differences in the chemical compositio
8、n of kapok from different sources.Cluster analysis(CA)classified the 15 samples into 2 categories.PCA results showed that the cumulative contribution rate of the first two principal components was 83.938%,which could reflect most information of the original chromatographic peaks.The samples were div
9、ided into 3 categories by OPLS-DA,and 2 different components with VIP value greater than 1 were screened out,which were mangiferin and peak 8,respectively.There was a significant positive correlation between content 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期 297of mangiferin and comprehensive scores of the fi
10、ngerprints.Both results showed that the quality of the kapok from Yunnan was better than that from other sources.Conclusion There were some differences in quality of kapok from different producing areas.The method established in this study can provide reference for the quality evaluation and control
11、 of kapok.Key Words:kapok;HPLC fingerprint;chemometrics;mangiferin;determination;quality evaluation木棉花又名攀枝花、红茉莉、红棉花、英雄树花,是木棉科植物木棉Gossampinus malabarica(DC.)Merr.的干燥花,性凉,具清热利湿、解毒功效,可用于治疗泄泻,痢疾,痔疮出血等症,主产于云南、广东、广西、海南、福建、台湾等地1-2。现代研究表明,木棉花药材的化学成分主要有黄酮类化合物、苯丙素类化合物、有机酸及酯类化合物等,在抗氧化、抗炎、抗肿瘤、保肝等方面有重要的药理作用2-4。木
12、棉花是我国南方地区常用的一味药食同源中药材,民间药用经验丰富5-6,但由于其产地多、生长环境不同,药材质量难以控制。2020年版中国药典一部木棉花项下仅规定了性状、鉴别、浸出物检验项,难以判别药材质量优劣。现行的中药材质量控制模式主要有指标成分含量测定和指纹图谱技术7-10。目前已有木棉花花萼高效液相色谱(HPLC)含量测定方法的文献报道11,但尚无采用HPLC指纹图谱评价木棉花药材质量的相关报道。本研究通过建立木棉花HPLC指纹图谱,结合化学计量学分析方法研究不同产地木棉花药材质量差异,明确质量差异标志物,以期为木棉花药材资源评价及质量控制提供依据。1 仪器与试药1.1 仪器Agilent
13、1290型高效液相色谱仪(美国Agilent公司);XP26型百万分之一天平,ME204E型万分之一天平(瑞士Mettler Toledo公司);Milli-Q Direct型超纯水系统(德国Merck公司);KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);111B型二两装高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司)。1.2 试药原儿茶酸对照品(批号:110809-201906,纯度:97.7%),芒果苷对照品(批号:111607-201704,纯度:98.1%),芦丁对照品(批号:100080-201811,纯度:91.7%,中国食品药品检定研究院);新绿原酸对照品(批号:
14、151217,纯度:98.5%,成都普菲德生物技术有限公司);乙腈,甲醇为色谱级(德国Merck公司),磷酸为色谱级(天津市科密欧化学试剂有限公司),水为超纯水,其余试剂均为分析纯。15批木棉花药材(编号:Y1Y15)经广东一方制药有限公司魏梅主任药师鉴定为正品,均符合2020年版中国药典一部木棉花项下要求。样品来源及编号分别为云南省(编号:Y1Y6,Y10Y12),海南省(编号:Y7Y9),广西壮族自治区(编号:Y13Y15)。2 方法与结果2.1 色谱条件12色谱柱:Waters Xselect HSS T3柱(250 mm4.6 mm,5 m);流动相:乙腈(A)-0.5%磷酸溶液(B)
15、,梯度洗脱(015 min,5%A10%A;1530 min,10%A17%A;3040 min,17%A18%A;4041 min,18%A5%A;4145 min,5%A);流速:1.0 ml/min;柱温:25;检测波长:230 nm;进样量:10 l。2.2 对照品溶液的配制分别取原儿茶酸、新绿原酸、芒果苷、芦丁对照品适量,精密称定,加入50%甲醇,制成每1 ml分别含84.804,43.096,41.594,48.513 g的混合对照品贮备液。另取芒果苷对照品适量,精密称定,加入50%甲醇,制成每1 ml含芒果苷42.771 g的对照品贮备液。2.3 供试品溶液的制备取木棉花药材粉末
16、(过三号筛)约1.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 ml,称定重量,超声处理(功率250 W,频率40 kHz)45 min,放冷,再称定重量,用50%甲醇298 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。2.4 HPLC指纹图谱方法学考察2.4.1 专属性试验 分别精密吸取空白溶剂、混合对照品溶液及供试品溶液,按2.1项下色谱条件进样测定,结果见图1。供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应的保留时间处有相同的色谱峰,且空白溶剂无干扰,表明该方法专属性良好。峰2:原儿茶酸;峰3:新绿原酸;峰4:芒果苷;峰7
17、:芦丁A:空白溶剂;B:混合对照品溶液;C:供试品溶液图1 专属性试验HPLC图谱2.4.2 精密度试验 精密吸取2.2项下混合对照品溶液,按2.1项下色谱条件连续进样6次,记录色谱图。计算得各色谱峰峰面积的RSD均小于3.0%,表明仪器精密度良好。2.4.3 重复性试验 取木棉花药材(Y5)粉末,精密称定,平行称定6份,按2.3项下方法制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件进样测定,记录色谱图。以4号芒果苷色谱峰为参照峰(S),计算得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明该方法重复性良好。2.4.4 稳定性试验 取木棉花药材(Y5)粉末,精密称定,按2.3项下方法制备供试
18、品溶液,按2.1项下色谱条件,分别在0,2,4,6,8,12,24 h进样测定,记录色谱图。以4号芒果苷色谱峰为参照峰(S),计算得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。2.5 HPLC指纹图谱的建立及相似度评价取15批木棉花药材,按2.3项下方法制备供试品溶液,按2.1项下色谱条件进样测定,记录色谱图。将15批木棉花药材色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)软件中,以Y1样品的色谱图为参照图谱,将时间窗宽度设为0.1 min,采用多点校正法进行色谱峰匹配,选择中位数法生成对照指纹图谱R,计算各批次木棉花药材与对照指纹图谱
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