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miRNA-23a-3p和TLR4在急性脑出血患者血清中的表达及临床意义.pdf
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1、Hainan Med J,Aug.2023,Vol.34,No.15海南医学2023年8月第34卷第15期miRNA-23a-3p和TLR4在急性脑出血患者血清中的表达及临床意义贺琦,王燕西安宝石花长庆医院神经内科,陕西西安710201【摘要】目的探究微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)、Toll样受体4(TLR4)在急性脑出血(ACH)患者血清中的水平及其临床意义。方法选取2020年1月至2022年3月西安宝石花长庆医院收治的110例ACH患者为ACH组,并纳入同期110例健康体检者为对照组。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定两组受检者的血清miR-23
2、a-3p表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组受检者的血清核因子B(NF-B)、TLR4、肿瘤坏死因子-(TNF-)水平;采用Pearson法分析ACH患者血清miR-23a-3p、TLR4水平与TNF-、NF-B的相关性;比较不同预后ACH患者一般资料及血清miR-23a-3p、TLR4、TNF-、NF-B 水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-23a-3p、TLR4 水平对ACH患者预后的评估价值。结果ACH 组患者血清miR-23a-3p、TLR4、TNF-、NF-B水平分别为2.290.67、(32.9410.98)g/L、(51.2821.37)pg/mL、(
3、17.346.19)ng/mL,明显高于对照组的1.010.30、(17.465.82)g/L、(20.318.47)pg/mL、(8.503.04)ng/mL,差异均有统计学意义(P0.05);ACH患者血清miR-23a-3p、TLR4水平与TNF-、NF-B均呈正相关(r=0.377、0.538、0.403、0.572,P0.05),且血清miR-23a-3p表达水平与TLR4也呈正相关(r=0.581,P0.05);预后不良组ACH患者NIHSS评分、脑出血体积、血清miR-23a-3p、TLR4、TNF-、NF-B水平明显高于预后良好组,差异均有统计学意义(P0.05);血清miR-
4、23a-3p、TLR4预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.857、0.868,截断值分别为2.37 g/L、34.52 g/L,敏感度分别为76.9%、78.8%,特异性分别为87.9%、86.2%;miR-23a-3p、TLR4联合预测ACH患者预后的AUC为0.941,敏感度为90.4%,特异性为89.7%。结论ACH患者血清miR-23a-3p、TLR4水平较高,miR-23a-3p与TLR4呈正相关,且miR-23a-3p、TLR4联合检测可较好地预测ACH患者预后,为临床预测ACH患者预后提供新策略。【关键词】急性脑出血;微小miR-23a-3p;Toll样受体4;预后
5、;相关性【中图分类号】R743.34【文献标识码】A【文章编号】10036350(2023)15213505Expression and clinical significance of miRNA-23a-3p and Toll-like receptor 4 in serum of patients with acutecerebral hemorrhage.HE Qi,WANG Yan.Department of Neurology,Xian Baoshihua Changqing Hospital,Xian 710201,Shaanxi,CHINA【Abstract】Objective
6、To explore the levels of microRNA-23a-3p(miR-23a-3p)and Toll-like receptor 4(TLR4)in the serum of patients with acute cerebral hemorrhage(ACH)and its clinical significance.MethodsA totalof 110 ACH patients admitted to Xian Baoshihua Changqing Hospital from January 2020 to March 2022 were selectedas
7、the ACH group,and 110 healthy subjects in the same period were included as the control group.Real-time quantita-tive reverse transcription-polymerase chain reaction(qRT-PCR)method was used to determine the expression level of se-rum miR-23a-3p in the two groups.Enzyme-linked immunosorbent assay(ELIS
8、A)was used to determine serum nucle-ar factor-B(NF-B),TLR4,and tumor necrosis factor-(TNF-)levels in the two groups.Pearson method was usedto analyze the correlation between serum miR-23a-3p,TLR4 levels and TNF-,NF-B in ACH patients.The generaldata and serum levels of miR-23a-3p,TLR4,TNF-,and NF-B i
9、n ACH patients with different prognosis were com-pared.Receiver operating characteristic(ROC)curve was used to analyze the serum miR-23a-3p,TLR4 levels in theevaluation of the prognosis of ACH patients.ResultsThe serum levels of miR-23a-3p,TLR4,TNF-and NF-B inthe ACH group were 2.290.67,(32.9410.98)
10、g/L,(51.2821.37)pg/mL,(17.346.19)ng/mL,respectively,whichwere significantly higher than 1.010.30,(17.465.82)g/L,(20.318.47)pg/mL,(8.503.04)ng/mL in the controlgroup(P0.05).The serum levels of miR-23a-3p and TLR4 in ACH patients were positively correlated with TNF-andNF-B(r=0.377,0.538,0.403,0.572,P0
11、.05),and the expression levels of serum miR-23a-3p were also positively cor-related with TLR4(r=0.581,P0.05).The NIHSS score,cerebral hemorrhage volume,serum miR-23a-3p,TLR4,TNF-and NF-B levels of ACH patients in the poor prognosis group were significantly higher than those in the goodprognosis grou
12、p,and the differences were statistically significant(P0.05).The area under the curve(AUC)of serummiR-23a-3p and TLR4 for predicting the prognosis of ACH patients was 0.857 and 0.868,with the cut-off value of 论著 doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2023.15.002基金项目:陕西省西安市科研项目(编号:2020yb69)。第一作者:贺琦(1978),男,副主任医
13、师,研究方向:脑梗死、脑出血、癫痫、头痛、眩晕、帕金森病、痴呆、周围神经疾病。通讯作者:王燕(1985),女,副主任医师,硕士,研究方向:脑梗死、脑出血、癫痫、头痛、眩晕、帕金森病、痴呆、周围神经疾病,E-mail:。2135海南医学2023年8月第34卷第15期Hainan Med J,Aug.2023,Vol.34,No.15急性脑出血(acute cerebral hemorrhage,ACH)是一种颅内出血性疾病,其发病率高,预后差1-2。因此,寻找与ACH发病及预后转归相关的指标,对及时干预,改善ACH 患者预后有积极意义。有研究认为,ACH发病与炎症反应、微小RNA(microRN
14、A,miRNA)表达失调、信号传导异常等相关3-4。研究发现,微小RNA-23a-3p(microRNA-23a-3p,miR-23a-3p)在ACH患者中呈高表达,与血肿体积、ACH患者预后相关,可能参与并影响 ACH 患者预后5。此外,研究发现脑出血患者Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)水平较高,是影响脑出血预后的危险因素,且具有评估 ACH 患者预后的潜在价值6。但 miR-23a-3p、TLR4在ACH患者中的相关性,及两者联合预测ACH患者预后的价值尚未明确。基于此,本文通过测定miR-23a-3p、TLR4在ACH患者血清中的水平,旨在分析miR
15、-23a-3p与TLR4的相关性以及miR-23a-3p、TLR4联合检测对ACH患者预后的预测价值。1资料与方法1.1一般资料选取2020年1月至2022年3月西安宝石花长庆医院诊治的 ACH 患者 110 例作为ACH 组。纳入标准:(1)符合 中国脑出血诊治指南(2019)7中有关ACH的诊断标准;(2)首次发病,入院就诊0.05),具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会批准,所有受试者及其亲属对本研究知情同意。1.2检测方法1.2.1样本收集收集ACH患者入院治疗前,及健康者体检当日35 mL空腹外周血,自然凝集,分离出血清(4 000 r/min离心10 min),分装,存于-70冰
16、箱。1.2.2血清miR-23a-3p表达水平测定采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantita-tive reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法测定血清miR-23a-3p表达水平。首先,按 miRNeasy Serum/Plasma Kit(217184,北京索莱宝科技有限公司)说明书提取血清样本总RNA,且在提取 RNA 时加内参 cel-miR-39。其次,利用 miScriptReverse Transcription Kit(218061,杭州开泰生物技术有限公司)获得 cDNA
17、。最终,应用 miScript SYBRGreen PCR Kit(218075,北京欣华绿源科技有限公司)配制反应体系,qRT-PCR仪(StepOne TM,美国ABI公司)将cDNA扩增、检测。qRT-PCR扩增参数:96.58 min;94 30 s,64.5 40 s,70 20 s,40 个循环。miR-23a-3p 上 游引物 序列 为 5-ACACTCCAGCT-GGGATCA-3,下游引物序列为5-CTCAACTGGTGTCGT-3,cel-miR-39 上游引物序列 为 5-CAGAGT-CACCGGGTGTAAAT-3,下游引物序列为5-CCAGT-GCGTGTCGTGG
18、AGTC-3。血清miR-23a-3p相对表达量以2-CT法计算。1.2.3血清肿瘤坏死因子-(TNF-)、TLR4、核因子B(NF-B)水平测定采用酶联免疫吸附法(en-zyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清TNF-、TLR4和NF-B水平。采用人TNF-ELISA试剂盒(70-EK182HS-96,杭州联科生物技术股份有限公司)、人 TLR4 ELISA试剂盒(CSB-E12954h-1,上海恒斐生物科技有限公司)、人 NF-B ELISA 试剂盒(XFH11333,上 海 信 帆 生 物 科 技 有 限 公 司)配 制TNF-、TLR4、NF
19、-B的标准样品溶液,解冻血清,酶标仪(美国Awareness公司,Chromate 4300)测定TNF-、TLR4、NF-B标准品溶液及血清样本在450 nm处的吸光度,绘制TNF-、TLR4、NF-B的标准回归曲线,结合TNF-、TLR4、NF-B的标准回归方程,计算血清TNF-、TLR4、NF-B水平。1.3治疗与随访ACH患者均依据 中国脑出血诊治指南(2019)7给予ACH患者降颅内压、吸氧、脑保护剂等对症治疗。对110例ACH患者随访6个月,对患者进行改良Rankin量表(modified Rankin scale,mRS)评估,并依据mRS评分将其分为预后良好组(58例,mRS评
20、分3分)、预后不良组(52例,mRS评分3分)。此外,收集整理两组ACH患者美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale,NIHSS)、年龄、高脂血症、性别、高血压、血小板分布宽度、身体质2.37 g/L and 34.52 g/L,the sensitivity of 76.9%and 78.8%,respectively,and the specificity of 87.9%and 86.2%,re-spectively.The AUC of miR-23a-3p combined with TLR4 in predict
21、ing the prognosis of ACH patients was 0.941,withthe sensitivity of 90.4%and the specificity of 89.7%.ConclusionACH patients have high levels of serum miR-23a-3pand TLR 4,and miR-23a-3p is positively correlated with TLR4.The combination of miR-23a-3p and TLR4 can betterpredict the prognosis of patien
22、ts with ACH,and provide a new strategy for clinical prediction of the prognosis of patientswithACH.【Key words】Acute cerebral hemorrhage;MicroRNA-23a-3p;Toll-like receptor 4;Prognosis;Correlation2136Hainan Med J,Aug.2023,Vol.34,No.15海南医学2023年8月第34卷第15期量指数(body mass index,BMI)、糖尿病等资料。1.4统计学方法应用SPSS25.
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