![点击分享此内容可以赚币 分享](/master/images/share_but.png)
Ndfip1在帕金森病模型小鼠黑质中的表达变化.pdf
《Ndfip1在帕金森病模型小鼠黑质中的表达变化.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《Ndfip1在帕金森病模型小鼠黑质中的表达变化.pdf(4页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、第5 9卷 第3期2 0 2 3年0 6月青 岛 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NA LO FQ I N G D AOUN I V E R S I T Y(ME D I C A LS C I E N C E S)V o l.5 9,N o.3J u n e 2 0 2 3生理学专题 收稿日期2 0 2 1-1 2-0 8;修订日期2 0 2 2-0 6-1 2 基金项目国家自然科学基金面上项目(3 2 1 7 0 9 8 4)第一作者付小敏(1 9 9 6-),女,硕士研究生。通信作者谢俊霞(1 9 5 6-),女,博士,教授,博士生导师。E-m a i l:j x i a x i
2、e p u b l i c.q d.s d.c n。N d f i p 1在帕金森病模型小鼠黑质中的表达变化付小敏,曲仂,徐华敏,谢俊霞(青岛大学脑科学与疾病研究院,山东 青岛 2 6 6 0 7 1)摘要 目的 观察携带人突变型-突触核蛋白(A 5 3 T)的帕金森病(P D)转基因小鼠及1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MP T P)诱导的P D模型小鼠黑质区N e d d 4家族相互作用蛋白1(N d f i p 1)的表达变化。方法 选取1 2月龄A 5 3 T转基因小鼠和同窝野生型(WT)对照小鼠,采用免疫印迹技术检测小鼠黑质区N d f i p 1蛋白的表达变化;选取8
3、周龄雄性C 5 7 B L/6 J小鼠随机分为2组,MP T P组小鼠连续5d给予MP T P腹腔注射(3 0m gk g-1d-1),对照组给予等体积的生理盐水,采用免疫印迹技术检测小鼠黑质区N d f i p 1及酪氨酸羟化酶(TH)的蛋白表达变化。结果 与WT小鼠相比,A 5 3 T转基因小鼠黑质区N d f i p 1蛋白的表达降低,差异有统计学意义(t=2.2 9 4,P0.0 5);与对照组相比,MP T P组小鼠黑质区N d f i p 1及TH的蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(t=2.1 4 9、9.9 3 5,P0.0 5)。结论 携带人突变型-突触核蛋白(A 5 3
4、T)的P D转基因小鼠及MP T P诱导的P D模型小鼠黑质区N d f i p 1蛋白的表达均下降。关键词 帕金森病;N e d d 4家族相互作用蛋白1;1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶;突触核蛋白;黑质;小鼠,近交C 5 7 B L 中图分类号 R 3 3 8.2 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 3-0 3 1 7-0 4d o i:1 0.1 1 7 1 2/j m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.0 1 4 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/k n s.c
5、n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/3 7.1 5 1 7.R.2 0 2 3 0 3 0 2.1 7 3 9.0 0 7.h t m l;2 0 2 3-0 3-0 3 1 7:0 3:2 8C H A N G EI NT H EE X P R E S S I O NO FN E D D 4F AM I L Y-I N T E R A C T I N GP R O T E I N1I NT H ES U B S T A N T I AN I G R AO FA MO U S EMO D E LO FP A R K I N S O NSD I S E A S E F
6、 UX i a o m i n,Q UL e,XU H u a m i n,X I EJ u n x i a(I n s t i t u t eo fB r a i nS c i e n c ea n dD i-s e a s e s,Q i n g d a oU n i v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 7 1,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ec h a n g e i nt h ee x p r e s s i o no fN e d d
7、 4f a m i l y-i n t e r a c t i n gp r o t e i n1(N d f i p 1)i nt h es u b s t a n t i an i g r ao fh u m a nm u t a n t-s y n u c l e i n(A 5 3 T)t r a n s g e n i cm i c ew i t hP a r k i n s o nsd i s e a s e(P D)o r am o u s em o d e l o fP Di n-d u c e db y1-m e t h y l-4-p h e n y l-1,2,3,6-t
8、 e t r a h y d r o p y r i d i n e(MP T P).M e t h o d s A 5 3 Tt r a n s g e n i cm i c ea n dw i l d-t y p e(WT)l i t t e r-m a t e s,a g e d1 2m o n t h s,w e r e s e l e c t e d,a n dW e s t e r nb l o t t i n gw a s u s e d t om e a s u r e t h e c h a n g e i n t h ep r o t e i ne x p r e s s
9、i o no fN d f i p 1 i nt h es u b s t a n t i an i g r a.M a l eC 5 7 B L/6 Jm i c e,a g e d8w e e k s,w e r er a n d o m l yd i v i d e d i n t oMP T Pg r o u pa n dc o n t r o l g r o u p;t h em i c ei nt h eMP T Pg r o u pw e r eg i v e n i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o no fMP T P(3
10、 0m gk g-1d-1)f o r5c o n s e c u t i v ed a y s,a n dt h o s e i nt h ec o n t r o l g r o u pw e r eg i v e na ne q u a l v o l u m eo fn o r m a l s a l i n e;W e s t e r nb l o t t i n gw a su s e dt om e a s u r et h ec h a n g e s i nt h ep r o t e i ne x-p r e s s i o no fN d f i p 1a n dt y
11、r o s i n eh y d r o x y l a s e(TH)i nt h es u b s t a n t i an i g r a.R e s u l t s C o m p a r e dw i t ht h eWT m i c e,t h eA 5 3 Tt r a n s g e n i cm i c eh a das i g n i f i c a n t r e d u c t i o n i nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fN d f i p 1 i nt h es u b s t a n t i an i g r a
12、(t=2.2 9 4,P0.0 5).C o m-p a r e dw i t ht h ec o n t r o l g r o u p,t h eMP T Pg r o u ph a ds i g n i f i c a n t r e d u c t i o n s i nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fN d f i p 1a n dTHi nt h es u b-s t a n t i an i g r a(t=2.1 4 9,9.9 3 5;P0.0 5).C o n c l u s i o n T h e r e i sas i g
13、 n i f i c a n t r e d u c t i o n i nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fN d f i p 1 i nt h es u b s t a n t i an i g r ao fh u m a nm u t a n t-s y n u c l e i n(A 5 3 T)t r a n s g e n i cm i c ew i t hP Da n dam o u s em o d e l o fMP T P-i n d u c e dP D.K E Y WO R D S P a r k i n s o nd i
14、s e a s e;N e d d 4f a m i l y i n t e r a c t i n gp r o t e i n1;1-M e t h y l-4-p h e n y l-1,2,3,6-t e t r a h y d r o p y r i d i n e;a l-p h a-s y n u c l e i n;s u b s t a n t i an i g r a;m i c e,i n b r e dC 5 7 B L 帕金森病(P D)是一种常见的神经系统退行性疾病,其主要病理特征是中脑黑质多巴胺能神经元的变性,以及-突触核蛋白(-s y n)异常聚集所致路易小体的
15、形成1-3。临床上,P D病人常出现明显的运动迟缓等运动症状,以及抑郁、焦虑等非运动症状4-8。到目前为止,P D的病因仍未完全阐明,有研究表明可能涉及遗传、环境、衰老等多种因素9-1 2。N e d d 4家族相互作用蛋白1(N d f i p 1)是一种衔接蛋白,因其结构上具有P Y模体可被E 3泛素连接酶N e d d 4的WW结构域识别,从而促进底物蛋白的泛素化降解1 3。近期研究表明,高表达N d f i p 1可以保护S H-S Y 5 Y细胞免受鱼藤酮诱导的神经毒性的影响1 4,提示N d f i p 1可能在P D中具有潜在的神经保 护作用。但N d f i p 1在P D动物
16、模型中的表达变 3 1 8青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷化尚未见报道。因此,本实验选用携带人突变型-s y n(A 5 3 T)的转基因小鼠观察-s y n突变对黑质中N d f i p 1表达的影响,同时选用神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MP T P)诱导的P D模型小鼠观察MP T P对黑质中N d f i p 1表达的影响,以期为阐明N d f i p 1在P D中可能发挥的作用提供新的实验依据。1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物 A 5 3 T转基因小鼠购于美国的J a c k s o n实验室,选用1 2月龄雄性-s y nA 5
17、 3 T转基因小鼠及同窝野生型(WT)小鼠作为研究对象。S P F级雄性C 5 7 B L/6 J小鼠,8周龄,体质量(1 91)g,购于北京维通利华公司。所有小鼠均饲养于可自由饮水摄食、室温2 5、湿度(5 05)%、昼夜循环光照(1 2h/1 2h)的S P F级清洁环境中。1.1.2 试剂和仪器 MP T P粉末和N d f i p 1抗体购自美国S i g m a公司,R a b b i tA n t i-a c t i n购于中国B i o s s公司,HR P-I g G标记的二抗购于中国爱必信公司,分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液均购于康为公司,E C L发光液、P V D F膜购自美
18、国M i l l i p o r e公司,过硫酸铵、四甲基乙二胺、R I P A裂解液、B C A试剂盒、L o a d i n gB u f f e r均购自中国碧云天公司。电泳仪、电转仪购自美国B i o R a d公司,凝胶成像系统购自美国UV P公司。1.2 动物分组与处理选取1 2月龄雄性WT小鼠作为对照组,-s y nA 5 3 T转基因小鼠作为实验组。同时选取8周龄雄性C 5 7 B L/6 J小鼠,随机分为对照组和MP T P组。MP T P粉末用生理盐水配制成浓度为6g/L的溶液,MP T P组小鼠连续5d给予MP T P腹腔注射(3 0m gk g-1d-1),对照组小鼠给
19、予等体积的生理盐水1 5。1.3 免疫印迹技术检测N d f i p 1以及酪氨酸羟化酶(TH)的蛋白表达小鼠腹腔注射1 0 0g/L水合氯醛麻醉后断头取脑,置于干冰盒中静置5s后移至冰上,按照小鼠脑图谱迅速取出黑质放入E P管中。称质量后按每毫克2 5L的比例加入R I P A蛋白裂解液,使用研磨机充分研磨后,静置于冰上3 0m i n以充分裂解组织,以1 20 0 0r/m i n离心3 5m i n后取上清液,应用B C A蛋白定量检测试剂盒检测蛋白浓度,加入1/4体积的L o a d i n gB u f f e r后9 5金属浴5m i n。应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(8 0V、4 0m
20、 i n,1 2 0V、9 0m i n)后以湿法转至0.4 5m的P V D F膜上(3 0 0 mA、9 0m i n)。用5 0g/L的脱脂奶粉室温封闭2h,分别加入N d f i p 1(110 0 0)、TH(110 0 0)、-a c t i n(11 00 0 0)抗体于4 摇床孵育过夜。以T B S T溶液洗3次,每次1 0m i n,用山羊抗兔的HR P-I g G二抗(11 00 0 0)于室温孵育1h;以T B S T溶液洗3次,每次1 0m i n,然后使用E C L发光液显影。应用I m a g eJ软件进行分析,以N d f i p 1、TH蛋白与-a c t i
21、n的比值作为目的蛋白的表达水平。1.4 统计学处理应用P r i s m6软件进行统计学处理,计量资料结果以xs表示,两组间比较采用t检验,P0.0 5表示差异有统计学意义。2 结 果2.1 A 5 3 T转基因小鼠黑质区N d f i p 1的表达变化免疫印迹技术检测结果显示,1 2月龄WT小鼠和-s y nA 5 3 T转基因小鼠黑质区N d f i p 1蛋白的表达水平分别为1.0 0 00.0 8 3(n=6)和0.8 8 50.0 8 0(n=5),与WT小鼠相比,A 5 3 T转基因小鼠黑质区N d f i p 1蛋白的表达下降约1 1%,差异有统计学意义(t=2.2 9 4,P0
22、.0 5)。2.2 MP T P诱导的P D小鼠黑质区TH和N d f i p 1蛋白的表达变化与对照组相比,MP T P组小鼠黑质区TH蛋白表达下降约6 4%,差异有统计学意义(t=9.9 3 5,P0.0 1);与对照组 相比,MP T P组 小鼠黑质区N d f i p 1蛋白表达下降约1 4%,差异有统计学意义(t=2.1 4 9,P0.0 5)。见表1。表1 两组小鼠黑质区T H和N d f i p 1蛋白表达水平比较(n=1 0,xs)组别THN d f i p 1对照组1.0 0 00.1 5 10.3 5 80.1 5 8MP T P组 1.0 0 00.1 7 7*0.8 5
23、 60.1 4 4*与对照组相比,*t=9.9 3 5、2.1 4 9,P0.0 5。3 讨 论P D是一种复杂的神经退行性疾病,以老年人多见,其特征性的病理变化是中脑黑质区多巴胺能神经元的变性损伤1 6。但迄今为止,其确切的发病机制尚未完全阐明。因此,探究P D的发病机制及 3期付小敏,等.N d f i p 1在帕金森病模型小鼠黑质中的表达变化3 1 9寻找新的治疗靶点至关重要。有研究报道,在短暂性的局灶性脑缺血或创伤性脑损伤后,N d f i p 1在大鼠脑损伤部位周围幸存的皮质神经元中表达上调,提示N d f i p 1可能对残存神经元具有保护作用1 7。本研究团队前期实验结果表明,N
24、 d f i p 1在6-羟基多巴胺(6-OHD A)处理的ME S 2 3.5多巴胺能细胞中的表达明显降低,其水平降低可能与二价金属铁转运蛋白1(DMT 1)的表达上调及多巴胺能神经元的铁沉积有关1 8。但N d f i p 1在P D动物模型中的表达及作用尚不清楚。因此,本实验选取-s y nA 5 3 T转基因小鼠模型和MP T P诱导的P D小鼠模型研究N d f i p 1的表达变化。A 5 3 T转基因小鼠携带S NC A点突变基因,可在多个脑区观察到-s y n聚积,该模型可模拟P D的神经病理学改变过程,运动症状出现较晚,是研究P D早期病变的理想动物模型。我们前期的研究结果表
25、明,1 2月龄A 5 3 T转基因小鼠黑质多巴胺能神经元数目未观察到明显变化,而1 5月龄A 5 3 T转基因小鼠黑质多巴胺能神经元数目减少了1 8.9%,与对照组相比,差异有统计学意义1 9。还有文献报道,2月龄A 5 3 T转基因小鼠黑质等脑区中即可出现明显的-s y n聚积所形成的包涵体,但其黑质的TH阳性神经元密度变化不明显,而纹状体中TH阳性末梢明显减少,提示-s y n的异常聚积可导致多巴胺能神经末梢的损伤,这可能是P D发病早期的变化,也可能是A 5 3 T转基因小鼠运动症状出现较晚的原因之一2 0。本实验中-s y nA 5 3 T转基因小鼠黑质区N d f i p 1蛋白的表
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- Ndfip1 帕金森病 模型 小鼠 中的 表达 变化
![提示](https://www.zixin.com.cn/images/bang_tan.gif)
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【自信****多点】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【自信****多点】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。