基因检测的临床意义.pptx

髓细胞系恶性肿瘤髓细胞系恶性肿瘤 依据细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子依据细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学以及临床特征生物学以及临床特征WHO分型法将髓系肿瘤分为分型法将髓系肿瘤分为骨髓增生性疾病（骨髓增生性疾病（MPD）（肿瘤，）（肿瘤，MPN）骨髓增生异常骨髓增生异常/骨髓增生性疾病骨髓增生性疾病（肿瘤）（肿瘤）（MDS/MPD,MDS/MPN）骨髓增生异常综合征（骨髓增生异常综合征（MDS）急性髓细胞白血病（急性髓细胞白血病（AML）四四 大大 类类基因检测的临床意义第1页 PHPH染色体染色体t(9;22)(q34;q11),t(9;22)(q34;q11),BCR/ABLBCR/ABL 阳性阳性 慢性髓系白血病（慢性髓系白血病（CMLCML）慢性中性粒细胞白血病（慢性中性粒细胞白血病（CNLCNL）慢性嗜酸粒细胞白血病慢性嗜酸粒细胞白血病/高嗜酸粒细胞综征高嗜酸粒细胞综征 （CEL/HESCEL/HES）真性红细胞增多症（真性红细胞增多症（PVPV）慢性原发性骨髓纤维化（伴髓外造血）慢性原发性骨髓纤维化（伴髓外造血）（CIMFCIMF）原发性血小板增多症（原发性血小板增多症（ETET）不能分类骨髓增生性疾病不能分类骨髓增生性疾病 七七 类类骨髓增生性肿瘤（骨髓增生性肿瘤（MPN）基因检测的临床意义第2页骨髓增生异常骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤骨髓增生性肿瘤 （MDS/MPN）是一个克隆性造血干细胞疾病，特点表现为是一个克隆性造血干细胞疾病，特点表现为MDSMDS与与MPDMPD交叠，有各种交叠，有各种“有效有效”造血及病态造血存造血及病态造血存在。在。慢性粒慢性粒-单核细胞白血病单核细胞白血病（CMMLCMML）不经典慢性髓系白血病不经典慢性髓系白血病（aCMLaCML）幼年型粒幼年型粒-单核细胞白血病单核细胞白血病（JMMLJMML）不能分类不能分类MDS/MPDMDS/MPD 四四 类类基因检测的临床意义第3页骨髓增生异常综合征（骨髓增生异常综合征（MDS）MDS也是克隆性疾病，以无效造也是克隆性疾病，以无效造血为其特征引发血细胞降低，骨髓血为其特征引发血细胞降低，骨髓及血象一至多系细胞病态造血。及血象一至多系细胞病态造血。基因检测的临床意义第4页MDS亚型分类亚型分类 亚型亚型 外周血象外周血象 骨髓象骨髓象 1.难治性贫血难治性贫血 贫血；未见或罕见贫血；未见或罕见 仅红系增生异常，仅红系增生异常，（RA）原始细胞原始细胞 原始细胞原始细胞 5%，环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞15%2.难治性贫血伴贫血；未见或罕见难治性贫血伴贫血；未见或罕见 仅红系增生异常，仅红系增生异常，环形铁粒幼细胞原始细胞环形铁粒幼细胞原始细胞 原始细胞原始细胞 5%，（）（）环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞15%3.难治性血细胞降低难治性血细胞降低 血细胞降低（二系或血细胞降低（二系或 二系或多系细胞增生异常二系或多系细胞增生异常 伴多系增生异常伴多系增生异常 全系）；未见全系）；未见Auer小体；小体；10%；原始细胞；原始细胞 5%，（RCMD）未见或罕见未见或罕见 原始细胞原始细胞；未见未见Auer小体；小体；单核细胞单核细胞1109/L 环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞15%4.难治性血细胞降低难治性血细胞降低 血细胞降低（二系或血细胞降低（二系或 二系或多系细胞增生异常二系或多系细胞增生异常伴多系增生异常和伴多系增生异常和 全系）；未见全系）；未见Auer小体；小体；10%；原始细胞；原始细胞 5%，环，环形铁粒幼细胞形铁粒幼细胞 单核细胞单核细胞1109/L 未见未见Auer小体；小体；（RCMD-RS）环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞15%基因检测的临床意义第5页 亚型亚型 外周血象外周血象 骨髓象骨髓象5.难治性贫血伴难治性贫血伴 血细胞降低，血细胞降低，一系或多系细胞增生异常；一系或多系细胞增生异常；原始细胞增多原始细胞增多1型型 原始细胞原始细胞5%原始细胞原始细胞5%9%；（RAEB-1）未见未见Auer小体；小体；未见未见Auer小体；小体；单核细胞单核细胞1109/L6.难治性贫血伴难治性贫血伴 血细胞降低，血细胞降低，一系或多系细胞增生异常；一系或多系细胞增生异常；原始细胞增多原始细胞增多2型型 原始细胞原始细胞5%19%原始细胞原始细胞10%19%；（RAEB-2）Auer小体（小体（）；）；Auer小体（小体（）；）；单核细胞单核细胞1109/L7.未归类未归类MDS 血细胞降低，血细胞降低，单一髓系细胞增生异常；单一髓系细胞增生异常；（MDS-U）未见或罕见原始细胞；未见或罕见原始细胞；原始细胞原始细胞5%；未见未见Auer小体；小体；未见未见Auer小体；小体；8.5q-综合征综合征 贫血；贫血；少叶核巨核细胞正常或增多；少叶核巨核细胞正常或增多；del（5q）血小板计数正常或增高；血小板计数正常或增高；原始细胞原始细胞5%；原始细胞原始细胞5%；细胞遗传学检测仅见细胞遗传学检测仅见 del（5q）异常；）异常；未见未见Auer小体；小体；基因检测的临床意义第6页 AML是髓系原始细胞克隆性增生疾是髓系原始细胞克隆性增生疾病，病，WHO分型将分型将AML分为：分为：1.伴有特殊染色体伴有特殊染色体AML 2.伴有病态造血伴有病态造血AML 3.治疗相关治疗相关AML和和MDS 4.不伴特殊细胞遗传易位不伴特殊细胞遗传易位AML 四亚型。四亚型。急性髓细胞白血病（急性髓细胞白血病（AML）基因检测的临床意义第7页1 1伴有特殊细胞遗传易位伴有特殊细胞遗传易位AMLAML （1 1）伴有）伴有t(8;21)(q22;q22)AML,t(8;21)(q22;q22)AML,AML1AML1（CBFCBF）/ETO/ETOAMLAML （2 2）伴有）伴有inv(16)(p13;q22)inv(16)(p13;q22)或或 t(16;16)(p13;q22),t(16;16)(p13;q22),CBF/MYH11CBF/MYH11骨髓嗜酸粒细胞增多骨髓嗜酸粒细胞增多AMLAML （3 3）伴有）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RARt(15;17)(q22;q11-12),PML/RAR 及变异急性早幼粒细胞白血病（及变异急性早幼粒细胞白血病（APLAPL）（4 4）伴有）伴有11q23(MLL)11q23(MLL)异常增生异常增生AMLAML 基因检测的临床意义第8页2 2伴有多系血细胞增生异常伴有多系血细胞增生异常 急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病 （1 1）由）由MDSMDS或或MDS/MPDMDS/MPD转化而成转化而成 （2 2）发病前无）发病前无MDSMDS病史病史基因检测的临床意义第9页 3 3治疗相关治疗相关AMLAML和和MDSMDS（1 1）与烷化剂相关）与烷化剂相关（2 2）与拓扑异构酶）与拓扑异构酶抑制剂相关抑制剂相关 （一些能够是淋巴系）（一些能够是淋巴系）（3 3）其它）其它基因检测的临床意义第10页 4 4不伴特殊细胞遗传易位不伴特殊细胞遗传易位AMLAML （1 1）未分化）未分化AMLAML （2 2）未成熟）未成熟AMLAML （3 3）成熟）成熟AMLAML （4 4）急性粒）急性粒-单核细胞白血病单核细胞白血病 （5 5）急性单核细胞白血病）急性单核细胞白血病 （6 6）急性红白血病）急性红白血病 （7 7）急性巨核细胞白血病）急性巨核细胞白血病 （8 8）急性嗜碱细胞白血病）急性嗜碱细胞白血病 （9 9）伴骨髓纤维化急性全髓增生）伴骨髓纤维化急性全髓增生 （1010）髓细胞肉瘤）髓细胞肉瘤基因检测的临床意义第11页基因检测的临床意义第12页淋系肿瘤：B系肿瘤和系肿瘤和T/NK细胞系肿瘤细胞系肿瘤 又可分为两大类型：又可分为两大类型：前体淋巴细胞肿瘤（淋系白血病）前体淋巴细胞肿瘤（淋系白血病）外周或成熟淋巴细胞肿瘤（淋巴瘤）外周或成熟淋巴细胞肿瘤（淋巴瘤）前者指淋巴细胞分化早期阶段起源肿瘤前者指淋巴细胞分化早期阶段起源肿瘤 后者是分化成熟阶段起源肿瘤后者是分化成熟阶段起源肿瘤基因检测的临床意义第13页B细胞系肿瘤细胞系肿瘤 前体前体B细胞肿瘤细胞肿瘤 前体前体B淋巴母细胞白血病淋巴母细胞白血病/淋巴瘤（淋巴瘤（B-ALL/LBL）成熟（周围）成熟（周围）B细胞肿瘤细胞肿瘤 B-慢性淋巴细胞性白血病慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（小淋巴细胞淋巴瘤（B-CLL/SLL）B-细胞幼淋巴性细胞白血病（细胞幼淋巴性细胞白血病（B-PLL）淋巴浆细胞淋巴瘤（淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL）Burkitt淋巴瘤（淋巴瘤（BL）多毛细胞白血病（多毛细胞白血病（HCL）浆细胞骨髓瘤浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤（浆细胞瘤（PCM/PCL）脾边缘区脾边缘区B细胞淋巴瘤，细胞淋巴瘤，绒毛状淋巴细胞（绒毛状淋巴细胞（SMZL）结外边缘区结外边缘区B细胞淋巴瘤，细胞淋巴瘤，MALT型（型（MALT-MZL）结型边缘区结型边缘区B细胞淋巴瘤，细胞淋巴瘤，单核细胞样单核细胞样B细胞（细胞（MZL）滤泡性淋巴瘤（滤泡性淋巴瘤（FL）套细胞淋巴瘤（套细胞淋巴瘤（MCL）弥漫性大弥漫性大B细胞淋巴瘤（细胞淋巴瘤（DLBCL）基因检测的临床意义第14页T细胞和细胞和NK细胞系肿瘤细胞系肿瘤前体前体T细胞肿瘤细胞肿瘤 前体前体T淋巴母细胞淋巴瘤淋巴母细胞淋巴瘤/白血病（白血病（T-LBL/ALL）成熟（周围）成熟（周围）T细胞肿瘤细胞肿瘤 T-细胞幼淋巴细胞白血病（细胞幼淋巴细胞白血病（T-PLL）T-大颗粒淋巴细胞白血病（大颗粒淋巴细胞白血病（T-LGL）侵袭性侵袭性NK细胞白血病（细胞白血病（ANKCL）成人成人T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤/白血病（白血病（ATCL/L）结外结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（细胞淋巴瘤，鼻型（NK/TCL）肠病型肠病型T细胞细胞/淋巴瘤（淋巴瘤（ITCL）肝脾肝脾T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 皮下脂膜炎样皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 蕈样真菌病蕈样真菌病/Sezary综合征（综合征（MF/SS）间变性大细胞淋巴瘤（间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）基因检测的临床意义第15页霍奇金淋巴瘤（霍奇金病）霍奇金淋巴瘤（霍奇金病）结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL）经经典霍奇金淋巴瘤经经典霍奇金淋巴瘤 结节硬化型霍奇金淋巴瘤，结节硬化型霍奇金淋巴瘤，1和和2级（级（NSHL）富于淋巴细胞经典霍奇金淋巴瘤富于淋巴细胞经典霍奇金淋巴瘤 混合细胞型霍奇金淋巴瘤（混合细胞型霍奇金淋巴瘤（MCHL）淋巴细胞消减型霍奇金淋巴瘤（淋巴细胞消减型霍奇金淋巴瘤（LDHL）基因检测的临床意义第16页白白 血血 病病 基基 因因 检检 测测基因检测的临床意义第17页 基因突变基因突变是指因为是指因为DNADNA分子中发生碱基正确分子中发生碱基正确_而引发而引发_改变。改变。增添增添替换替换缺失缺失（D）（d1）（d2）（d3）增添、缺失或替换增添、缺失或替换基因结构基因结构基因突变基因突变一定一定会造成生物性状改变吗会造成生物性状改变吗?基因检测的临床意义第18页mRNA:G A A甲甲 乙乙 丙丙 丁丁DNADNA碱基对替换，碱基对替换，不一定不一定引发蛋白质结构改变。引发蛋白质结构改变。结论结论:碱基对替换碱基对替换一定一定会造成蛋白质结构改变吗会造成蛋白质结构改变吗?氨基酸氨基酸:天冬氨酸天冬氨酸天冬氨酸天冬氨酸谷氨酸谷氨酸缬氨酸缬氨酸G A UG A CG U A基因检测的临床意义第19页1 1、二战时，美国在日本广岛、长崎投下两颗、二战时，美国在日本广岛、长崎投下两颗原子弹，造成白血病患者出生率增加。原子弹，造成白血病患者出生率增加。2 2、苏丹红苏丹红进入人体可产生致癌作用。进入人体可产生致癌作用。3 3、乙肝病毒使肝细胞深入变异，肝细胞不、乙肝病毒使肝细胞深入变异，肝细胞不凋亡，而且不停地再生，就形成了肝癌。凋亡，而且不停地再生，就形成了肝癌。内因内因：DNA复制时本身也偶然发生错误复制时本身也偶然发生错误物理原因物理原因化学原因化学原因生物原因生物原因基因突变原因：基因突变原因：基因检测的临床意义第20页基因突变特点基因突变特点 大多数基因突变对生物体大多数基因突变对生物体是有害，只有少数是有利，有是有害，只有少数是有利，有些既无害也无益。些既无害也无益。多数有害多数有害基因检测的临床意义第21页结果：增殖过分，分化阻断，凋亡受抑结果：增殖过分，分化阻断，凋亡受抑基因检测的临床意义第22页白血病分子检测白血病分子检测vSouthern blotvNorthern blotvWestern blotvFISHvPCRv测序测序v芯片芯片基因检测的临床意义第23页白血病分子检测白血病分子检测vPCR方法优点方法优点 快速快速 灵敏灵敏 特异特异vPCR方法缺点方法缺点 假阳性假阳性 假阴性假阴性！基因检测的临床意义第24页白血病分子检测白血病分子检测vPCR：仅适合用于染色体断裂点丛集于相对小范仅适合用于染色体断裂点丛集于相对小范围内（围内（2kb2kb），如），如T-ALL中中SIL-TAL1。vRT-PCR：可用于染色体可用于染色体断裂点跨越很大区域融合断裂点跨越很大区域融合基因。基因。v巢式巢式RT-PCR：可显著提升反应特异性，增加扩可显著提升反应特异性，增加扩增效率。增效率。vRQ-PCR：可定量扩增产物。可定量扩增产物。基因检测的临床意义第25页白血病分子检测临床应用白血病分子检测临床应用白血病分子生物学检验对白血病诊疗分型及预白血病分子生物学检验对白血病诊疗分型及预后判断有以下几方面意义：后判断有以下几方面意义：v补充补充MIC检验不足检验不足 v发觉新亚型发觉新亚型 v监测白血病微小残留病灶（监测白血病微小残留病灶（MRD）v为研究白血病发病机制打下基础为研究白血病发病机制打下基础 基因检测的临床意义第26页白血病分子检测临床应用白血病分子检测临床应用 PCR方法检测方法检测MRD惯用分子标志惯用分子标志 基因检测的临床意义第27页基因检测的临床意义第28页基因检测的临床意义第29页基因检测的临床意义第30页AML1-ETOvt(8;21)(q22;q22)v68%原发性原发性AML，在，在M2中阳性率为中阳性率为2040%，在，在M2b中阳性率为中阳性率为90%v少见于少见于M4和和M1，极少见于，极少见于MDS和骨髓增生综合症和骨髓增生综合症 vAML1-ETO+白血病细胞有一定程度分化能力，能白血病细胞有一定程度分化能力，能分化至较成熟嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且对分化至较成熟嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且对化疗反应较敏感化疗反应较敏感 vAML1-ETO+患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好，含有较高缓解率，无病生存期长，预后较其它含有较高缓解率，无病生存期长，预后较其它AML亚型（亚型（M3除外）好除外）好 基因检测的临床意义第31页AML1-ETOv对初发患者进行对初发患者进行t(8;21)和和AML1-ETO融合基融合基因检测对其预后判断及治疗方案制订相当主因检测对其预后判断及治疗方案制订相当主要要 vAML1-ETO定性结果不能用于评价患者定性结果不能用于评价患者MRD情况情况 vRQ-PCR能实时反应体内能实时反应体内AML1-ETO水平水平。连续定量连续定量AML1-ETO转录本水平可判定有高转录本水平可判定有高复发风险患者，方便及早治疗干预以防血液复发风险患者，方便及早治疗干预以防血液学复发学复发 基因检测的临床意义第32页基因检测的临床意义第33页PML-RARvt(15;17)(q22;q21)，98%M3患者阳性患者阳性v继继t(15;17)之后，又先后发觉之后，又先后发觉4种种M3特异累及特异累及RAR变异性染色体易位：变异性染色体易位：vt(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)，dup(17)(q21.3;q23)，t(11;17)(q23;q21)分别产生分别产生NPM-RAR，NuMA-RAR和和PLZF-RAR，STAT5b-RAR融合基因融合基因v临床上，含有临床上，含有PLZF-RAR或或STAT5b-RAR融合基融合基因患者对因患者对ATRA治疗不敏感，其余三种染色体易位治疗不敏感，其余三种染色体易位患者经患者经ATRA治疗可获完全缓解治疗可获完全缓解 基因检测的临床意义第34页PML-RARAPL累及累及RAR基因及其搭档基因结构示意图基因及其搭档基因结构示意图 基因检测的临床意义第35页PML-RARv因为因为PML基因断裂点基因断裂点不一样，产生不一样，产生3种不一样种不一样PML-RAR异构体异构体 v约约55%M3患者为患者为L型，型，40%为为S型，型，5%为为V型，且每位患者只表示一个型，且每位患者只表示一个PML-RAR融合融合蛋白蛋白v形态学上形态学上S型白血病细胞常为低分化而且这些型白血病细胞常为低分化而且这些患者可见继发细胞遗传学异常，患者可见继发细胞遗传学异常，V型型APL患者患者白血病细胞体外对白血病细胞体外对ATRA敏感度低敏感度低 基因检测的临床意义第36页PML-RARvRT-PCR检测检测PML-RAR是敏感且特异是敏感且特异APL诊疗方法，还能用于诊疗方法，还能用于治疗后治疗后MRD监测监测。PML-RAR阳性提醒分子复发常早于临床复发阳性提醒分子复发常早于临床复发3-63-6个月，为临床采取深入治疗办法提供了保障个月，为临床采取深入治疗办法提供了保障 vRQ-PCR能有效反应患者在发病、治疗、缓能有效反应患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程白血病细胞负荷，在解、复发整个过程白血病细胞负荷，在MRD监测中比监测中比RT-PCR含有更高价值含有更高价值 基因检测的临床意义第37页基因检测的临床意义第38页FLT3基因突变基因突变vFms-related tyrosine kinase 3vFLT3为为III型受体酪氨酸激酶家族（还包含型受体酪氨酸激酶家族（还包含c-FMS，PDGFR和和c-KIT）组员之一，该类受体因在造血）组员之一，该类受体因在造血过程中造血细胞增殖和存活中发挥主要调控作用过程中造血细胞增殖和存活中发挥主要调控作用v据报道，据报道，FLT3-ITD和和D835突变在突变在AML中阳性率分中阳性率分别为别为24%(385/1585)和和7%(30/429)，总阳性率超出，总阳性率超出30%，使其成为，使其成为AML中最普遍发生突变靶基因中最普遍发生突变靶基因v许多临床研究发觉，许多临床研究发觉，FLT3突变还与临床预后亲密相突变还与临床预后亲密相关，尤对关，尤对60岁以下岁以下AML患者，患者，FLT3突变患者预后突变患者预后较差，较差，且可独立于核型之外且可独立于核型之外基因检测的临床意义第39页CBF-MYH11vinv(16)(p13;q22)及及t(16;16)(p13;q22)v主要见于主要见于M4Eo，10%不伴异常嗜酸细胞不伴异常嗜酸细胞M4，少见于少见于M2vCBF-MYH11融合蛋白经过干扰关键结合因融合蛋白经过干扰关键结合因子（子（core binding factor,CBFcore binding factor,CBF）转录激活作）转录激活作用而致病用而致病 v含有含有CBF-MYH11患者对化疗敏感，预后很患者对化疗敏感，预后很好，好，故提升检测率尤具临床意义故提升检测率尤具临床意义 基因检测的临床意义第40页CBF-MYH11vCBF-MYH11含有各种变异型，其中最常见含有各种变异型，其中最常见为为A型，占型，占80%vRT-PCR检测检测CBF-MYH11进行进行MRD监测显监测显示，大部分患者在完全缓解时示，大部分患者在完全缓解时PCR转阴，但转阴，但仍有小部分长久存活者仍有小部分长久存活者PCR仍为阳性仍为阳性v最新研究采取最新研究采取RQ-PCR检测检测CBF-MYH11转转录本水平来评价录本水平来评价M4Eo患者患者MRD情况，预示情况，预示复发复发 基因检测的临床意义第41页基因检测的临床意义第42页DEK-CANvt(6;9)(p23;q34)v主要见于主要见于M2或或M4，也见于，也见于M1，MDS-RAEBv伴伴DEK-CAN患者年纪普通较轻，且患者年纪普通较轻，且预后较差预后较差v这类患者进行分子监测有利于判断患者预后，调整这类患者进行分子监测有利于判断患者预后，调整改疗方案改疗方案 基因检测的临床意义第43页WT-1基因高表示基因高表示vWilms tumor 1v是无特异分子异常急性白血病患者理想是无特异分子异常急性白血病患者理想MRD检测指标检测指标v伴此基因伴此基因高表示者预后差高表示者预后差，且表示程度与预，且表示程度与预后相关后相关基因检测的临床意义第44页BCR-ABLvt(9;22)(q34;q11)v1530%成人成人ALL及及35%儿童儿童ALLv 9号染色体断裂点与号染色体断裂点与CML相同，但相同，但22号染色体断裂号染色体断裂点含有异质性点含有异质性 v此融合蛋白此融合蛋白p190刺激细胞增殖能力比刺激细胞增殖能力比p210要强。在要强。在转基因试验中观察到转基因试验中观察到p190诱发白血病含有起病早、诱发白血病含有起病早、发展快和恶性程度高特点发展快和恶性程度高特点vBCR-ABL+ALL患者预后差患者预后差，5年存活率年存活率20%，所，所以这些患者在缓解后需进行骨髓移植治疗以这些患者在缓解后需进行骨髓移植治疗 基因检测的临床意义第45页BCR-ABLv对于自体或异体移植对于自体或异体移植ALL患者，移植前后患者，移植前后BCR-ABL有没有以及有没有以及BCR-ABL转录本类型转录本类型与预后相关与预后相关 基因检测的临床意义第46页基因检测的临床意义第47页E2A-PBX1vt(1;19)(q23;p13)v56%儿童儿童ALL和和3%成人成人ALL v这类患者含有这类患者含有高白细胞计数，高血清乳酸脱氢酶及高白细胞计数，高血清乳酸脱氢酶及中枢神经系统症状，预后差中枢神经系统症状，预后差，平均无病生存期，平均无病生存期（DFS）仅）仅6个月，个月，3年年DFS为为20%，需给予这些患，需给予这些患者强化治疗才能取得很好预后者强化治疗才能取得很好预后v核型和核型和E2A-PBX1检测对这类患者诊疗和治疗方案检测对这类患者诊疗和治疗方案选择至关主要选择至关主要vE2A-PBX1预后价值需更多临床研究证实预后价值需更多临床研究证实 基因检测的临床意义第48页TEL-AML1vt(12;21)(p13;q22)v25%儿童儿童ALL，是儿童，是儿童ALL中最常见分子异常中最常见分子异常 v当前为止还未在当前为止还未在T-ALL，AML或或NHL中发觉中发觉t(12;21)，在婴儿白血病中极少报道，在成人白血，在婴儿白血病中极少报道，在成人白血病患者中频率很低（病患者中频率很低（2%）v这类患者发病年纪小（这类患者发病年纪小（2岁岁10岁），岁），WBC计数低计数低（50 000/L），），免疫表型为前免疫表型为前B-ALLv这类患者对这类患者对治疗反应佳治疗反应佳，完全缓解时间长，预后好，完全缓解时间长，预后好 基因检测的临床意义第49页TEL-AML1v因为因为12p和和21q末端在常规显带中很相同，所末端在常规显带中很相同，所以常规细胞遗传学方法检出率仅以常规细胞遗传学方法检出率仅0.05%，需，需应用应用FISH或或RT-PCR方法提升检测阳性率方法提升检测阳性率vTEL基因重排是独立预后原因，基因重排是独立预后原因，RT-PCR检测检测TEL-AML1融合基因能将低危险度与高危险融合基因能将低危险度与高危险度度ALL患者区分开来。所以早期检测患者区分开来。所以早期检测TEL-AML1融合基因对临床预后，确定适当治疗方融合基因对临床预后，确定适当治疗方案都有主要意义案都有主要意义 基因检测的临床意义第50页MLL相关融合基因相关融合基因 v累及累及MLL基因分子异常见于基因分子异常见于5.2%AML，22%ALL和和混合性白血病及一些淋巴瘤，还可见于治疗相关白混合性白血病及一些淋巴瘤，还可见于治疗相关白血病，尤接收血病，尤接收topoisomerase II抑制剂治疗患者抑制剂治疗患者 vMLL基因包括五十余种染色体易位基因包括五十余种染色体易位，产生不一样融，产生不一样融合蛋白，且每种融合蛋白都与特定白血病表型相关。合蛋白，且每种融合蛋白都与特定白血病表型相关。最常见有：最常见有：t(4;11)(q21;q23)MLL-AF4融合基因融合基因 ALL t(9;11)(p22;q23)MLL-AF9融合基因融合基因 AML t(11;19)(p13;q23)MLL-ENL融合基因融合基因 AML及及ALL基因检测的临床意义第51页MLL相关融合基因相关融合基因vMLL相关融合蛋白致病性还不清楚，推测其相关融合蛋白致病性还不清楚，推测其可能含有双重作用：可能含有双重作用：融合蛋白可能取得新功效，促使细胞转融合蛋白可能取得新功效，促使细胞转化化 MLL发生断裂后，缺失锌指结构域发生断裂后，缺失锌指结构域MLL不能与不能与DNA结合，失去其转录活化功效，使结合，失去其转录活化功效，使受受MLL调整靶基因（调整靶基因（HOX基因）表示异常，基因）表示异常，也影响造血细胞发育也影响造血细胞发育 基因检测的临床意义第52页MLL-AF4vt(4;11)(q21;q23)vt(4;11)发生率在不一样年纪段是不一样，在婴儿发生率在不一样年纪段是不一样，在婴儿ALL中最多见，为中最多见，为5070%，而在儿童和成人中较，而在儿童和成人中较低，分别为低，分别为2%和和36%v这类患者这类患者发病年纪低（通常发病年纪低（通常 90%CML患者患者vBCR-ABL融合蛋白（融合蛋白（p210）酪氨酸蛋白激酶活性较正常）酪氨酸蛋白激酶活性较正常ABL高，可能是高，可能是BCR对对ABL激酶活性调整区作用所致激酶活性调整区作用所致v因为因为5%CML患者为隐匿性患者为隐匿性Ph染色体，所以无染色体，所以无Ph染色体染色体CML患者还需使用更灵敏分子检测伎俩如患者还需使用更灵敏分子检测伎俩如FISH或或RT-PCR检测检测BCR-ABL融合基因融合基因vRT-PCR还能区分还能区分e1-a2和和b2-a2/b3-a2二种二种BCR-ABL转转录本，从而区分录本，从而区分ALL患者与患者与CML急淋变患者，进而分别对急淋变患者，进而分别对两种不一样患者采取不一样治疗方案两种不一样患者采取不一样治疗方案C M L基因检测的临床意义第62页BCR-ABLv巢式巢式RT-PCR检测检测BCR-ABL融合基因用于融合基因用于CML移植患者移植患者移植后移植后MRD监测监测。可在患者血。可在患者血液学复发前液学复发前624个月骨髓检测就呈阳性。个月骨髓检测就呈阳性。vRQ-PCR还能动态观察患者治疗后还能动态观察患者治疗后BCR-ABL转录本水平改变情况，反应疗效。转录本水平改变情况，反应疗效。基因检测的临床意义第63页GATA2基因突变基因突变v调控早期造血干细胞增殖分化转录因子，维持造血调控早期造血干细胞增殖分化转录因子，维持造血干祖细胞增殖和自我更新能力干祖细胞增殖和自我更新能力vCML急变患者中新发觉急变患者中新发觉GATA2基因突变基因突变，而而CML慢性期、加速期，慢性期、加速期，AML（M1-M7），），MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及正常对照均未发淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及正常对照均未发觉该突变，觉该突变，可见可见GATA2基因突变仅与基因突变仅与CML急变相关，急变相关，是是CML疾病进展过程中取得性突变。疾病进展过程中取得性突变。总发生率为总发生率为12.5%（5/40），且均造成，且均造成CML急粒单变急粒单变vGATA2基因基因突变与突变与CML患者疾病进展和预后关系有患者疾病进展和预后关系有待深入说明待深入说明基因检测的临床意义第64页JAK2基因突变基因突变vJanus kinase 2v此基因突变主要见于此基因突变主要见于MPD和和MDS，另可存在，另可存在于部分于部分AML尤尤M2v突变为突变为V617Fv突变去除了突变去除了JAK2 JH2负性调控，造成该基因负性调控，造成该基因连续活化，赋予细胞增殖存活优势连续活化，赋予细胞增殖存活优势vJAK2可成为靶向治疗靶点可成为靶向治疗靶点基因检测的临床意义第65页基因检测的临床意义第66页MDS相关基因异常相关基因异常vDelta样样(Dlk)基因编码基因编码Dlk蛋白在蛋白在MDS显著增显著增高者高者55%，而，而AML仅仅10%，可能是可能是MDS特异特异性基因性基因，但作为诊疗，但作为诊疗MDS标志基因尚待深入标志基因尚待深入确定确定基因检测的临床意义第67页MDS相关基因异常相关基因异常vRASv此原癌基因超家族编码鸟苷三磷酸水解酶此原癌基因超家族编码鸟苷三磷酸水解酶(GTPase)调整细胞生长相关信号调整细胞生长相关信号vras癌基因活化，尤其是癌基因活化，尤其是N-ras激活可在约激活可在约35%MDS患者中发生患者中发生vFMSv为集落刺激因子为集落刺激因子1，控制单核，控制单核-巨噬细胞生长、分化巨噬细胞生长、分化及功效及功效vfms基因突变可在基因突变可在16%MDS患者中发觉患者中发觉vras和和fms突变主要见于粒突变主要见于粒-单细胞分化疾病，即单细胞分化疾病，即MDS中中CMML，患者生存期短，转，患者生存期短，转AML多多基因检测的临床意义第68页MDS相关基因异常相关基因异常vp53v在在MDS时，时，p53突变较少见突变较少见(5%)，但在较为进展，但在较为进展病例中可高达病例中可高达15%vp53突变意味着化疗耐药和生存期缩短，因而是一突变意味着化疗耐药和生存期缩短，因而是一个有意义预后指标个有意义预后指标vFLT3v10%MDS有有FLT3点突变，加紧进展为点突变，加紧进展为AML，但，但FLT3-ITD少见少见vAML1(RUNX1)v为为MDS较常见点突变，发生率较常见点突变，发生率25%，造成关键结合，造成关键结合因子因子(CBF)亚单位正常功效缺失，易转化亚单位正常功效缺失，易转化AML基因检测的临床意义第69页Ig/TCR基因重排基因重排vIg基因由基因由L，L和和H三个基因组组成，分别三个基因组组成，分别编码编码L链，链，L链和链和H链。链。L和和H基因又由编码基因又由编码Ig分子分子V区和区和C区基因组成。区基因组成。vTCR由两条肽链组成，由两条肽链组成，链或链或链，不论是链，不论是哪一个肽链，其胞膜外区均包含两部分，即哪一个肽链，其胞膜外区均包含两部分，即V区和区和C区。对应编码基因为区。对应编码基因为TCRA,TCRB,TCRG和和TCRD。基因检测的临床意义第70页Ig/TCR基因重排基因重排vIg/TCR基因重排检测，对决定白血病细胞起源系列乃至分化基因重排检测，对决定白血病细胞起源系列乃至分化阶段，有重大意义阶段，有重大意义v在在B系系ALL中分别有中分别有95%，54%，55%和和33%患者有患者有IgH，TCR，TCR和和TCR基因重排，基因重排，v在在T-ALL中对应基因重排率分别为中对应基因重排率分别为14%，68%，91%和和89%v因为重排多样性，重排因为重排多样性，重排Ig和和TCR基因连结区序列在各淋巴基因连结区序列在各淋巴(前体前体)细胞中是不一样，因而细胞中是不一样，因而每位患者有其各自特异每位患者有其各自特异Ig/TCR基因重排序列，这一特定基因重排序列，这一特定Ig/TCR基因重排序列可作为该恶性基因重排序列可作为该恶性克隆分子标志，克隆分子标志，在分子水平进行在分子水平进行诊疗分型诊疗分型，还可经过，还可经过PCR检检测缓解期患者有没有初发时测缓解期患者有没有初发时Ig/TCR基因重排来追踪残余白血基因重排来追踪残余白血病细胞（病细胞（MRD)MRD)，用于，用于预后判断预后判断基因检测的临床意义第71页