不同试验条件对巴马拟缨鱼性激素水平的影响.pdf

水产养殖 2023 年第 8 期巴马拟缨鱼（Pseudocrossocheilus bamaensis），属鲤形目（Cyprinformes），鲤科（Cyp-rinidae），野鲮亚科（Labeoninae），拟缨鱼属（Pseudocrossocheilus）1，因富含脂肪，又称巴马油鱼。主要分布于广西境内巴马县的盘阳河和红水河的都安江段，喜穴居，一般晨昏活动，冬季进洞穴越冬，于春末夏初洪水期繁殖，在自然水域多以固着藻类为食2，体型小而肥，是广西土著小型经济特色鱼类3。研究表明4，巴马拟缨鱼肌肉中蛋白含量高，肉质细嫩，营养丰富，脂肪含量适中，富含各类氨基酸及不饱和脂肪酸，具有较高的营养价值。鱼类的生长与繁殖，需要消耗大量的营养物质。研究表明5，高蛋白含量的日粮，有利于异育银鲫雌鱼卵细胞的发育。脂肪含量为 14%的配合饲料，可以促进海湾扇贝（Argopecten irradians）的性腺发育6。在自然界中，河水的流速能够刺激鱼类产卵行为7-8。在人工养殖条件下，流水刺激，会加强四大家鱼亲鱼的性细胞质量9-10。此外，光照、产卵场所基质、盐度等外源因子，均会对性腺的发育造成不同的影响。现探讨不同试验条件对巴马拟缨鱼血液性激素水平的影响，以期为巴马拟缨鱼生理生态学、规模化人工繁殖研究，提供科学依据。1材料与方法1.1时间与地点2020 年 6 月，试验周期 365 d。试验地位于广西大学水产养殖基地。1.2试验材料选择 4 口圆形水泥池（直径 3.0 m，池高 1.4 m，水深 0.8 m），面积均为 7.1 m2，进、排水及供气（气资助项目：（巴马）油鱼规模化人工繁殖集成技术研究（桂科 AB18221116）作者简介：古昌辉（1998），男，在读硕士，研究方向为水生生物健康养殖.E-mail：*通信作者：麻艳群（1980），女，副教授，博士，研究方向为水生生物健康养殖.E-mail：不同试验条件对巴马拟缨鱼性激素水平的影响古昌辉1，许明珠2，程光平1，2，程蔓1，韦云勇1，麻艳群1*（1.广西大学动物科学技术学院/广西高校水生生物健康养殖与营养调控重点实验室，广西南宁530004；2.广西海洋研究所有限责任公司，广西北海536000）摘要：设置 4 个试验组（A、B、C、D）和 1 个对照组（E），在不同的试验条件下，对巴马拟缨鱼进行人工催产，采用双抗体夹心法，测定样本鱼催产前后血清激素水平，试验周期 365 d。结果表明，催产前，C 组的雌二醇（E2）含量最高，较 A 组有显著提高（P约0.05），与其他各组无显著差异（P跃0.05）；D 组的雌三醇（E3）和睾酮（T）含量最高，各组间无显著差异（P跃0.05）；A 组的孕酮（P）含量最高，组间差异不显著（P跃0.05）；B 组雌酮（E1）含量最高，较 A 组和 D 组有显著提高（P约0.05），与 C 组无显著差异（P跃0.05）。催产后，A 组 E2含量上升，B、C、D 组下降，且 C 组催产前后差异显著（P约0.05）；A、B 组 E3含量均上升，其中 B 组催产前后差异显著（P约0.05），C、D 组下降，催产前后差异不显著；A、B 组 P 含量下降，而 C、D 组上升，催产前后差异不显著（P跃0.05）；A、B 组 E1含量下降，A 组催产前后差异显著（P约0.05），B 组催产前后无显著差异（P跃0.05），C、D 组上升，催产前后差异显著（P约0.05）。指出，B、C 和 D 组有助于提高巴马拟缨鱼 E1、E2、E3和 P 水平，进而促进人工培育条件下的性腺发育，对催产激素有较高的敏感性，是培育巴马拟缨鱼亲本的可选模式。关键词：巴马拟缨鱼；性类固醇激素；催产中图分类号：S964.3文献标志码：月文章编号：1004-2091(2023)08-0029-07研 究 与 综 述doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2023.08.00629水产养殖 2023 年第 8 期控）设施完善，养殖用水均为经曝气的自来水。试验鱼采自红水河广西都安河段的野生巴马拟缨鱼，于6 月 2 日运回广西大学水产养殖基地，经消毒处理、暂养和驯食配合饲料后，随机分入试验池养殖，各池放养量均为 150 尾。雄鱼初始平均体质量（88.20依4.03）g，初始平均体长（26.35依2.10）cm；雌鱼初始平均体质量（112.40依8.05）g，初始平均体长（29.83依2.28）cm。饲料为海大容川牌对虾 2 号沉性饲料（粗蛋白质逸47.0%、粗灰分臆18.0%、0.8臆钙臆4.0%、水分臆10.0%、粗纤维臆3.5%、总磷逸1.2%、粗脂肪逸5.0%、赖氨酸逸2.8%）。1.3试验设计设 A、B、C 和 D 4 个试验组（未设平行组）和 E对照组。各组试验条件：A 组投喂“红虫+对虾 2 号料”（9颐1）；B 组采用“混合水流”（涌流+旋流），用充（氧）气管从池底堆积的卵石堆底端自下向上充气，产生涌流，用小型水泵（85 W）于池内抽水并沿圆形池壁切线方向“推水”产生旋流，流速 0.15 m/s，投喂对虾 2 号料；C 组采用“红光”光照，用 600 nm LED灯作光源，光色为红光，光照强度 2 000 lx，光颐暗=12L颐12D（12L 为 07：0019：00，12D 为 19：00 至次日 07：00），投喂对虾 2 号料；D 组采用“粗沙+卵石底质”（底质厚 10 cm，粗沙面积颐卵石面积=50%颐50%），投喂对虾 2 号料；E 组为试催产当天，从红水河广西都安河段采获并运回试验基地野生巴马拟缨鱼。各组均为自然水温（1630 益）。A 组（红虫+对虾二号料）日投饲率为 4%，B、C、D 组对虾 2 号料日投饲率 1.3%1.5%，每日投饲 1 次（20：00 前后）。每周换水 1 次，每次换水量约为原池水量的 1/3。养殖全程开启增氧机持续充气增氧，保持池水 籽（溶解氧）5 mg/L。2021 年 6 月 18 日（推测的繁殖季节），从 A、B、C、D 各组随机抽取 6 尾（3 雌和 3 雄）共 24 尾；从 E组随机抽取 3 雌和 3 雄共 6 尾，采血测定性激素含量。从各试验组随机抽取 3 雌和 3 雄亲鱼共 24 尾，用相同的催产剂1 kg 雌鱼催产剂型及剂量：促黄体素释放激素（LHRH-A3）10 滋g+注射用多情素绒促性素（I）（HCG）2 500 IU+多潘立酮注射液（DOM）15 mg，雄鱼催产剂量为雌鱼的 1/2。注射激素 72 h后，分别采集各组催产亲鱼血样，先用含间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222），将待采血亲鱼麻醉8耀10 min，然后采用尾椎取血法采血，室温放置 1 h，于 3 500 r/min 离心 10 min，结束后吸取上清液保存。采用双抗体夹心法测定样本鱼血清性激素水平。具体操作方法参照南京建成试剂盒说明书。1.4检测指标雌二醇（E2）雌三醇（E3）孕酮（P）雌酮（E1）睾酮（T）。1.5数据分析采用 Microsoft Excel 2016 处理试验数据后，于SPSS25.0 软件进行单因素方差分析（One-way ANO原VA）和多重比较（LSD 法），并判断在 0.05 水平上差异的显著性，P0.05 为差异不显著，P0.05）；字母不同表示组间差异显著（P0.05）。P：A 组 P 最大，C 组最小，与 E 组比较，A、B、C和 D 组的 P 含量分别提高了 13.5%、13.1%、7.5%和11.5%；各组间 P 含量比较，A 组最高，比 B 组、C 组和 D 组分别提高 0.5%、5.6%和 1.9%，组间差异不显著。表明 A 组较利于雌鱼 P 的合成。E1：与 E 组比较，B 组 E1提高 33.7%，其余组均呈降低趋势，其中 A 组、C 组和 D 组分别降低34.8%、7.0%和 32.2%；各组间比较，在 B 组 E1最高，比 A 组提高 56.8%，差异显著（P约0.05），比 C组、D 组和分别提高 38.3%、55.0%，但差异不显著（P跃0.05）。从 E1含量的绝对值看，B 组较有利于雌鱼 E1合成。2.1.2雄鱼性激素各组巴马拟缨鱼雄鱼 T 变化见表 2。由表 2 可见，各试验组 T 含量较 E 组均呈下降趋势，差异显著（P约0.05）。其中 B 组最低，降幅达 56.0%，D 组相对下降幅度较小，为 45.4%。各组间，D 组 T 含量最高，比 A、B 和 C 组分别提高 21.3%、24.0%和 5.4%。各试验组雄鱼 T 含量远未达到 E 组水平。总体上，D组较有利于促进 T 的合成。2.2各组巴马拟缨鱼催产前后性激素变化2.2.1雌鱼催产前后性激素变化各组巴马拟缨鱼雌鱼催产前后性激素变化见图 1（a）（b）（c）（d），图中柱上无字母表示催产前后组间差异不显著（P跃0.05），字母不同表示催产前后组间差异显著（P约0.05）。由图 1 可见，催产后，A 组E2升高 36.64%，催产前后差异显著（P约0.05），B、C、D 组分别下降 3.3%、43.18%和 12.08%，催产前后差异不显著（P跃0.05）；E3含量在 A、B 组分别提高 17.60%、44.48%，其中 B 组催产前后差异显著（P约0.05），在 C、D 组分别降低 37.75%、8.38%，催产前后差异不显著（P跃0.05）；P 含量在 A、B 组分别降低1.90%、6.80%，在 C、D 组上升，分别上升 6.25%、0.87%，催产前后差异不显著（P跃0.05）；E1含量在 A、B 分别下降了 12.88%、54.62%，中 B 组催产前后差异显著（P约0.05），在 C、D 组分别上升了 48.62%、50.65%，催产前后差异显著（P约0.05）。分析表明，注射催产剂有助于提高 B 组 E3以及 C、D 组 E1含量。2.2.2雄鱼催产前后 T 含量变化各组巴马拟缨鱼雄鱼催产前后 T 含量变化见图 2，图中柱上无字母表示催产前后组间差异不显著（P跃0.05），字母不同表示催产前后组间差异显著（P约0.05）。由图 2 可见，催产后，T 含量在 A、B、C、D 分别下降了 17.15%，17.39%，19.69%和 35.73%，其中 D 组催产前后差异显著（P约0.05）。分析表明，各组注射激素，均会抑制巴马拟缨鱼雄鱼 T 的合成，D 组抑制作用更明显。2.3人工催产对各组巴马拟缨鱼性激素水平的影响2.3.1雌鱼各组巴马拟缨鱼雌鱼催产后激素变化见表 3。由表 3 可见，鱼催产后 B 组 E2含量最高，C 组最低，组间差异不显著（P跃0.05）；P 含量亦为 C 组最高，B组最低，组间差异均不显著（P跃0.05）；E3含量在 B 组最高，C 组最低，B 组和 C 组间差异显著（P约0.05），其余组间差异不显著（P跃0.05）；E1含量在 C 组最高，A 组最低，C、D 组与 A、B 组差异显著（P约0.05）。分析表明，注射催产剂，有助于促进 B 组培育条件下淤同列数据肩标无字母或字母相同，表示组间差异不显著（P0.05）；字母不同表示组间差异显著（P0.05）；字母不同表示组间差异显著（P0.05）。组别籽（E2）/（ng L-1）籽（E3）/（ng L-1）A14.993依5.9712.284依0.378abB17.989依0.8882.796依0.260aC11.237依3.1751.443依0.323bD16.478依6.8862.340依0.468ab组别c（P）/（pmol L-1）c（E1）/（pmol L-1）A18.488依1.0076.369依0.115aB17.490依0.7807.676依1.134aC19.035依1.02420.302依2.932bD18.666依0.31815.224依7.212b表 3 各组雌鱼催产后性激素水平淤32水产养殖 2023 年第 8 期由表 4 可见，催产后，A 组 T 最高，D 组最低，但各组间无显著差异（P跃0.05）。表明注射激素，在促进或抑制巴马拟缨鱼雄鱼 T 合成方面，与各组的试验条件关系不大。3讨论3.1各组巴马拟缨鱼性激素水平激素是由机体内分泌腺或内分泌细胞直接分泌到血液和淋巴中，对一定器官或组织产生兴奋或抑制作用，协调机体内部生理机能的特殊化学物质11。鱼类性类固醇激素（T、17茁-E2等）是体内胆固醇的衍生物，对鱼体性腺发育、卵黄形成和卵细胞成熟具有重要的调控作用，因此性激素水平的改变，最终会影响到鱼类的繁殖功能12。颉志刚等13研究表明，摄食含有芳香化酶抑制剂来曲唑（letrozole,LZ）的试验饲料 10 d 后，雌性光唇鱼的血浆E2水平显著下降，而雄性光唇鱼的血浆 T 水平则无显著变化。本试验 A 组雌鱼血清 E2含量较 E 组下降最多，表明红虫饲料当中可能含有某种物质抑制雌鱼的 E2水平。流水可以刺激鱼类侧线器官，通过中枢神经，诱使下丘脑合成和释放促性腺激素释放激素，进而引发脑垂体分泌促性腺激素，诱导亲鱼发情产卵14。宋波澜15研究表明，随着水流速的增加，红鳍银鲫的肌肉中的血红蛋白含量会显著提高。在本试验中，B 组雌鱼 E1性激素水平较高，表明在混合水流刺激下，促进了巴马油鱼性激素的合成，对 P和 E1的促进效果较好。这可能是巴马拟缨鱼喜欢生活在水流湍急的水域，且对涌流敏感，B 组鱼在旋流和涌流混合水流作用下育，性激素水平提高。仇登高16研究发现，不同的光照条件可以延缓或者加快大西洋鲑性腺的发育。狄正凯等17研究发现，延长光照周期，可以增加鱼类的摄食时间，提高摄食率，进而促进鱼类生长，但过长的光照时间，往往会导致鱼类的生长速度下降。本试验中，C 组 P 含量在试验组中最低，E2含量最高，表明光照可能会刺激培育对象 E2的合成，但同一光照周期又会抑制 P 的合成。可能的原因为巴马拟缨鱼是洞穴习性生活的鱼类，对特定光照的敏感度较高。本试验设定的光照强度和周期变化，刺激了雌鱼，导致雌鱼特定性激素水平升高。底质类型对巴马拟缨鱼自然繁殖的成败尤为重要。张平梅等18研究表明，复杂的底质更有利于鲟的产卵行为。在本试验中，D 组的 E3含量为试验组中最高，E2和 P 水平也较高，可能是野生巴马拟缨鱼来自红水河流域，原生境中的底质复杂多变，而D 组底质环境比较接近野生环境，加上充足的饵料和安静的环境，有利于促进雌鱼性激素水平的提高。3.2各组巴马拟缨鱼催产前后性激素水平利用外源激素处理，是促进养殖鱼类性腺成熟及产卵繁殖的重要方法。最常用的是利用促性腺激素释放激素的类似物（GnRHa），刺激脑垂体释放促性腺激素（GtH），诱导精巢性类固醇激素的生成和精子的排放19-20。鱼类卵巢发育受多种因素（温度21、人工配合饲料22、外源激素23等）的影响。相关研究表明24，不同的外源激素，对卵巢作用不同，人工注射催产激素，能够促进半滑舌鳎卵巢更快地发育到下一个时期；但类雄激素可以抑制麦穗鱼卵巢发育，抑制程度随着浓度的变大而增加25；绒毛膜促性腺激素（HCG）和鲤垂体（PT），对鳗鲡卵巢催熟效果较好，促黄体素释放激素（LHRH-A2）和丙酸睾丸素（TOP），则无明显效果23；GnRH-a 可用于诱导大菱鲆多次产卵26；多巴胺（DA）通过抑制促性腺激素（GtH）的分泌，从而阻断促性腺激素释放激素（GnRH）的作用27。宋燕等28研究表明，在鱼类不同的生长时期，催产剂对于鱼体的性激素影响不同。邹忠义等29在对大鲵尿液性激素水平季节变化及其与繁殖的关系中发现，大鲵的 E2含量需要达到一定的阈值后进行催产试验，才能刺激其产卵。本实验也是通过注射催产剂来研究性激素水平的变化，从而进一步研究人工养殖环境下，巴马拟缨鱼性腺的发育情况。蔡智鸣等30研究表明，鱼类的卵巢在郁期初时人工催产无效，只有发育到郁期中期，最好是郁期期末，催产才能成功。本试验在巴马拟缨鱼性腺尚未完全成熟的情况下进行试催产，以探索特定时期的巴马拟缨鱼性激素的变化。研 究 与 综 述33水产养殖 2023 年第 8 期参考文献：1 乐佩琦.中国动物志硬骨鱼纲：鲤形目（第二卷）M.北京：科学出版社，2000：217.2 广西壮族自治区水产研究所.广西淡水鱼类志M.南宁：广西人民出版社，1981：101-103.3 程光平，高天翔，薛彦霞，等.巴马穗唇鲃年龄与生长特性J.中国海洋大学学报，2008，38（4）：547-550.4 庞卫，潘艳云，覃志彪，等.野生巴马拟缨鱼肌肉营养成分研究J.水生生物学报，2010，34（4）：885-889.5 龙勇.饲料蛋白水平对异育银鲫雌性性腺发育的影响D.重庆：西南农业大学，2005.6 刘权迪，宁延昶，温斌，等.饲料中脂肪水平对海湾扇贝性腺发育、脂肪酸组成和组织结构的影响J.上海海洋大学学报，2021，30（6）：981-991.7 陈求稳，张建云，陈宇琛，等.建坝河流鱼类繁殖的流速调控J.Engineering,2021，7（2）：105-122.8 广西壮族自治区水产研究所，中国科学院动物研究所.广西淡水鱼类志M.南宁：广西人民出版社，1981.9 孟应德.四大家鱼的人工繁殖J.湖南农业，2019，40（6）：18.10 徐琴.怎样提高鱼类人工繁殖中的受精率J.渔业致富指南，2012，15（6）：38.11 王渊源，周燕侠.外源性激素对鱼类生长的影响J.中国饲料，1994，5（3）：22-24.12 李伟民，尹大强，胡双庆，等.两种氯代硝基苯胺对鱼类血清性激素水平的影响J.南京大学学报（自然科学版），2001，47（6）：707-712.13 颉志刚，杨范利.光唇鱼对单色光偏好的性别差异及相关生理机制J.中国水科学，2021，28（10）：1263-1271.14 牛景彦，刘占才.影响鱼类性腺发育的生态因素研究J.农业与技术，2016，36（16）：109.15 宋波澜.水流因子对红鳍银鲫（Barbodes schwanenfeldi）游泳行为、生长和生理生态影响的研究D.广州：暨南大学，2008.16 仇登高.光环境因子对循环水养殖系统大西洋鲑生长及性腺发育的影响研究D.青岛：中国科学院研究生院（海洋研究所），2014.17 狄正凯，李慷，刘如聪，等.光照周期和光照强度对循环水系统中墨瑞鳕的生长、肌肉营养成分及养殖收益的影响J.水生生物学报，2021，45（4）：781-789.18 张平梅，杜浩，危起伟.长江鲟亲体对人工模拟产卵底质的偏好性J.水生态学杂志，2022，43（1）：103-109.19 NAGAHAMA Y.Endocrine control of gametogenesisJ.IntJ Dev Biology,1994,38:217-229援20 ZOHAR Y,MYLONAS C C.Endocrine manipulations ofspawning in cultured fish:from hormones to 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Guangping1,2,CHENG Man1,WEI Yunyong1,MA Yanqun1*(1.College of Animal Science and Technology/Key Laboratory of Healthy Breeding and Nutrition Regulation ofAquatic Organisms in Guangxi Universities,Guangxi University,Nanning,Guangxi 530004,China;2.GuangxiInstitute of Oceanology Co.,LTD.,Beihai,Guangxi 536000,China)Abstract:Four experimental groups(A,B,C,D)and one control group(E)were set up to artificially induceproduction of Bama tama under different experimental conditions,The serum hormone level of the sample fishbefore and after labor was measured by the double antibody sandwich method of sampling and the test period was365 days.The results showed that before induction,the content of estradiol(E2)in group C was the highest,whichwas significantly higher than that in group A(P0.05);The content of estriol(E3)and testosterone(T)was highest in group D,with no significant difference be原tween groups(P0.05);The content of progesterone(P)was the highest in group A,with no significant differencebetween groups(P0.05),and the content of estrone(E1)in group B was the highest,which was significantly high原er than that in group A and group D(P0.05);Af原ter induction,the content of E2in group A increased,and the B,C and D groups decreased,and the differencebefore and after labor induction in group C was significant(P0.05);the content of E3in group A and B increased,among which the difference before and after labor induction in group B was significant(P0.05),and the differencebefore and after labor induction decreased in group C and D,and the difference before and after labor inductionwas not significant.The P content of groups A and B decreased,while the P content in groups C and D increased,and the difference before and after labor induction was not significant.The content of E1decreased in groups Aand B,and there were significant differences before and after labor induction in group A(P0.05),and groups C and D increased,and thedifference before and after labor induction was significant(P0.05).It was pointed out that groups B,C and Dwere helpful in increasing the levels of E1,E2,E3and P of Mithama parama,thereby promoting gonadal development under artificial breeding conditions,and had high sensitivity to oxytocin,which was an alternative modelfor breeding parents of Mitamus parama.Key words:Bama tassel;Sex steroid hormone;Different cultivation modes研 究 与 综 述35