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医学细胞与分子生物学习题库标准答案

一、名词解释：
1．高度反复基因：在真核生物细胞基因组中反复出现可达106次以上的DNA序列，称为高度反复序列基因或高度反复序列DNA。
2．断裂基因：真核生物大部分基因具有内含子，基因是不连续的，故称断裂基因。
3．基因组：细胞或生物体的整套(单倍体)遗传物质，称为基因组。基因组的大小用所有DNA的碱基对总数表达。
4．基因：是核酸分子中遗传信息的基本单位，是指RNA序列信息及表达这些信息所必需的所有核苷酸序列。现代分子生物学的基因概念是合成有功能的蛋白质或RNA所必需的所有DNA序列（除部分病毒RNA），即一个基因不仅涉及编码蛋白质或RNA的核酸序列，还应涉及为保证转录所必需的调控序列。
5．微卫星DNA：
6．基因文库：是指具有某种生物体（或组织、细胞）所有基因的随机片段的重组DNA克隆群体。
7．内含子：真核生物DNA分子中插入外显子之间的非编码序列。
8．外显子：真核生物DNA分子中编码蛋白质的序列。
9．基因表达的调控：机体的各种细胞中具有相同的遗传信息(相同的结构基因)，但并非在所有细胞中同时表达，而必须根据机体的不同发育阶段、不同的组织细胞及不同的功能状态，选择性、程序性地表达特定数量的特定基因，这就叫基因表达的调控。
10．卫星DNA：是出现在非编码区的串联反复序列。
11．基因表达：是指原核生物和真核生物基因组中特定的结构基因所携带的遗传信息，通过转录、翻译等一系列过程，合成具有特定的生物学功能的各种蛋白质。表现出特定的生物学效应的全过程。
12．增强子：指位于启动子上游或下游并通过启动子增强邻近基因转录效率的DNA顺序，增强子自身不具有启动子活性。
13．顺式作用元件：指某些能影响基因表达但不编码蛋白质和RNA的DNA序列，按照功能分为启动子、增强子、终止子、沉默子和衰减子等。
14．SD序列：SD序列是与细菌16S rRNA 3，端互补的序列。原核生物在起始密码AUG上游方向4-13个碱基之间有一段富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称为SD序列。
15．分子克隆：分子克隆又称为基因克隆、DNA重组、 DNA克隆、即应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子（复制子、重组体），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出具有目的基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得大量同一DNA分子拷贝或其表达产物的过程。
16．载体：指可以将外源性DNA（目的DNA）片段引入宿主细胞并能在宿主细胞中进行自我复制或最终使外源性DNA表达的自主DNA。
17．反式作用因子：指能直接或间接地辨认或结合在各顺式作用元件8-12bp核心序列上，参与调控靶基因转录效率的一组蛋白质，也称序列特异性DNA结合蛋白，这是一类细胞核内蛋白质因子。
18．粘性末端：又称为粘端，是指双链DNA分子在RE作用下，形成具有互补碱基的单链突出末端。
19．Cos位点：
20．Cos质粒：粘粒（柯斯质粒）是人工构建的、具有质粒和λ噬菌体DNA载体双重性质的的杂种质粒。
21．限制性内切酶：亦称为限制性内切核酸酶，简称限制酶或内切酶，是一类能辨认和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列且能产生具有二重对称特异序列（回文序列）结构的DNA水解酶，也是原核生物所特有的酶。
22．cDNA文库：以细胞的所有mRNA逆转录合成的cDNA组成的重组克隆群体称为cDNA文库
23．质粒：质粒是存在于大多数细菌和某些真核生物细胞染色体外的具有自主复制的小型环状双链DNA分子。任何染色体外自体复制的遗传单位，都称为质粒。
24．转化率：
25．质粒拷贝数：是指每条细菌染色体所平均具有的质粒DNA分子的数目。
26．Klenow片断：又名DNA聚合酶Ⅰ大片段，是由大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ全酶经枯草杆菌蛋白酶解决后产生出来的大片段分子。
27．体外重组：亦称为体外连接。即将目的DNA与载体DNA在体外相连，形成重组体的过程，其产物经常称为重组子。重组体是由两种不同来源的DNA组合而成，所以又称为异源嵌合DNA。
28．转化：
29．感受态细胞：
30．衔接物：
31．溶原生长：
32．探针：是指带有放射性同位素、生物素或其他活性物质标记的某种特定的DNA或RNA片段，用于核酸杂交技术以检测待测样品中的靶序列。
33．核酸杂交：来源不同的两条单链核酸分子通过碱基互补可形成异源双螺旋，称为核酸分子杂交。
34．阳性克隆：是指目的DNA转化入宿主细胞的克隆。
35．阴性克隆
36．PCR：PCR是一种体外扩增特异DNA片段的技术,其原理类似于DNA的体内扩增。它涉及高温变性、低温退火、中温延伸三个基本环节。
37．固相杂交：结合于某种固相上的待测样品，与溶解在杂交液中的探针进行杂交，称为固相杂交。
38．液相杂交：
39．预杂交：为减少探针与广泛存在的非互补核酸的非特异性结合，在杂交前可用封闭物将这些非特异性位点封闭。这一在杂交前的解决过程，称为预杂交。
40．印迹杂交：
41．杂交严格度
42．解链温度
43．增色效应：DNA变性后，DNA 溶液的紫外吸取作用增强的效应，可以作为DNA变性的指标。
44．C值：每种真核生物的单倍体基因组中的所有DNA量称为C值。
45．假阳性克隆
46．C值悖理：C值与生物进化复杂性不相相应的现象，称为C值悖理。
47．基因簇：
48．转基因：
49. 基因家族：真核细胞的基因组中有许多来源相同、结构相似、功能相关的基因经常按功能成套组合，这样的一套基因称为基因家族或多基因家族。
50．.转座子：
51．假基因：在多基因家族中，某些成员并不产生有功能的基因产物，但其结构和DNA序列与有功能的基因具有相似性，假基因常用符号ψ来表达。
52．衰减子： 又称为沉默子，指在真核基因内能克制基因转录的DNA序列，与反式作用因子互相结合而起作用。不受距离和方向的限制，并可对异源基因的表达起作用。
53. 端粒：是真核生物染色体末端的一种特殊结构，由端粒DNA和端粒蛋白质构成。
54. 端粒酶：端粒酶是一种由RNA和蛋白质组成的酶，属于核糖蛋白酶，是端粒复制所必须的一种特殊的DNA聚合酶，具有逆转录酶活性，能以hTR为模板，向染色体末端添加TTAGGG序列。
55.逆转录：以RNA为模板合成DNA的过程，这与通常转录过程中遗传信息从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录作用。
56.DNA的突变：DNA分子中的核苷酸序列发生忽然而稳定的改变，从而导致DNA的复制以及后来的转录和翻译产物随之发生变化，表现出异常的遗传特性，称为DNA的突变。
57.DNA的损伤：某些物理化学因子，如紫外线、电离辐射和化学诱变剂等，都有引起生物突变和致死的作用，其机理是作用于DNA，导致DNA结构和功能的破坏，称为DNA的损伤。
58.光修复（光复合）：光复合酶能特异地和嘧啶二聚体结合，在可见光下催化光化合反映，使环丁烷环回复到两个独立的嘧啶，这一过程叫光复合作用。
59.重组修复：当DNA分子的损伤面积较大，还来不及修复就进行复制时，损伤部位因没有模板指引，复制出来的子链就会出现缺口，这时可运用重组过程进行修复，称为重组修复或复制后的修复。
60.SOS修复：是一种旁路系统，为DNA的损伤所诱导。其修复的结果是导致突变，是倾向差错的修复。
61.切除修复：是细胞内的重要修复方式。一般DNA的两条链只有一条受损伤，可将损伤部分切除，根据互补链的序列对其进行修复。
62.反义RNA：又称mRNA干扰性互补RNA。 指能与特定mRNA互补结合的RNA片段，反义RNA由反义基因转录而来。
63.超基因家族：是指一组由多基因家族及单基因组成的更大的基因家族。
64.RNA干扰( RNAi)：将与mRNA编码区某段序列相相应的正义RNA 和反义RNA 组成的双链RNA (dsRNA)导入细胞，使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默(表达受克制)。这种转录后基因沉默被称为RNAi.
65. 魔斑：鸟苷四磷酸和鸟苷五磷酸在层析谱上可检出斑点，这些斑点称为魔斑
66. 锌指：指具有一段保守氨基酸顺序的蛋白质与该蛋白的辅基锌螫合而形成的环状结构，分为锌指、锌扭（twist）和锌簇（cluster）结构。
67. 亮氨酸拉链：有些肽链C末端有一段30个氨基酸序列以α-螺旋构型出现的结构单元，每间隔6个氨基酸出现一个亮氨酸残基，能形成两性α-螺旋, 带电荷的亲水性氨基酸位于一侧，具有疏水性的亮氨酸残基位于另一侧。两个具有这种结构的因子接触后可借助侧链疏水性交错对插，象拉拉链同样将两个反式作用因子连在一起，形成具有稳定卷曲螺旋结构的二聚体。
68.DNA的变性：在某些理化因素作用下，核酸双链分子碱基对的氢键断裂，疏水作用被破坏，双股螺旋或发夹结构打开，有规则的空间结构被破坏，形成单链分子，称为核酸变性。即DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。
69. 减色效应：
70. 穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的宿主细胞中成活和复制的质粒载体。
71. 退火：减少温度，使单链靶序列与寡核苷酸引物退火。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“ 退火”
72. .DNA的复性：指变性 DNA 在适当条件下，二条互补链所有或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的一种逆转过程。
73. Cot：表达复性速度与DNA顺序复杂性的关系。
Cot l/2：在标准条件下（一般为0.18mol/L阳离子浓度，400核苷酸的片段长度）测得的复性率达 50% 时的Cot值。
74. 原位杂交：将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交。
75. 基因诊断：以DNA或RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程.
76. DNA多态性：在同种生物不同个体的基因组中，常存在一些不影响基因功能的DNA顺序变异，称为DNA多态性
77. 溶菌生长：
78. 酵母人工染色体载体：
79. 定向克隆法：
80. 融合蛋白：
81. 非融合蛋白：
82. 基因工程：又称为基因克隆、DNA重组、 DNA克隆、分子克隆, 即应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子（复制子、重组体），继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出具有目的基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得大量同一DNA分子拷贝或其表达产物的过程。
83．克隆: 指具有单一的DNA重组体的无性繁殖系，或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程
84、固相杂交：结合于某种固相上的待测样品，与溶解在杂交液中的探针进行杂交，称为固相杂交。
二、填空题
1. 真核生物基因组DNA序列可分为（高度反复序列）、（中度反复顺序）和（低度反复序列或单拷贝序列）。
2.真核生物基因组高度反复序列涉及（反向反复序列）、（卫星DNA）、（α卫星DNA）三种。
3. 真核生物基因组高度反复序列的功能是（参与复制水平的调节）、（参与基因表达的调控）、（参与转位作用）（与进化有关）（与个体特性有关）（与减数分裂时染色体配对有关）。
4. Alu家族的功能是（参与hnRNA的加工与成熟）、（与遗传重组及染色体不稳定性有关）、（有形成Z-DNA的能力）和（具有转录调节作用）。
5. 原核生物转录水平调控的方式有（负转录调控）和（正转录调控）两种方式；前者又可分为（负控诱导）和（负控阻遏作用）；后者可分为（正控诱导）和（正控阻遏作用）。
6. 真核生物基因表达调控涉及（DNA水平（既基因组水平）调控）、（转录水平调控）、（转录后水平调控）、（翻译水平调控）和（翻译后水平调控）五个层次。
7. 真核生物基因组DNA水平的调控涉及（染色质的丢失）、（基因扩增）、（基因重排）、（基因的甲基化修饰）和（染色质结构对基因表达的调控）五种方式。
8. 反式作用因子是一类（ ）因子。根据作用方式可分为（通用转录因子）、（组织特异性转录因子）和（诱导性反式作用因子）三类 。
9.引起DNA变性的因素有（热变性）、（酸碱变性）和（化学试剂变性）三类 。
10. 变性DNA的性质（溶液粘度减少）、（溶液旋光性发生改变）和（增色效应或高色效应）。
11.影响DNA复性的因素有（温度和时间）、（DNA浓度）和（DNA序列的复杂度）三类 。
12. 影响杂交的因素有（核酸分子的浓度长度和复杂性）、（温度）、（离子强度）、（杂交液中的甲酰胺浓度）和（杂交条件的严谨性）。
13. 原位杂交的特点是（ ）、（ ）和（ ）。
14. 端粒的作用是（稳定染色体结构）、（防止染色体末端融合）、（保护染色体结构 基因）和（避免遗传信息在复制过程中丢失）。
15. 逆转录酶是多功能酶，具有（RNA指导的DNA聚合酶活性）、（RNA酶H活性）、（DNA指导的DNA聚合酶活性）三种功能，但无（3`→5`外切酶活性）作用。
16. DNA的损伤突变类型有（ 碱基对的置换）、（颠换）、（移码突变）、（二聚体的形成）和（重排 ）。
17. 引起DNA损伤、突变的因素是（DNA复制的错误）、（DNA的修复合成）、（涉及脱氨基和碱基丢失）、（环境因素）。
18. DNA的损伤修复方式有（光修复）、（切除修复）、（重组修复）和（SOS修复）。
19. 基因诊断的基本方法有（点突变的诊断）、（多态性连锁分析）、（基因表达异常的诊断）和（外源DNA检测）。
20.细菌基因组由一条（ ）组成；真核生物基因组由（ ）和（ ）形成（ ）。
21．原核生物基因表达调控的方式有（转录水平的调控）和（翻译水平的调控）；其中（转录水平的调控）是重要的方式。
22.操纵子由（结构基因）、（启动子）和（操纵基因）组成；受（ ）产物的调控。
23．顺式作用元件按功能可划分为（启动子沉）、（增强子）、（终止子）和（默子或衰减子） 。
24．分子克隆技术的操作涉及（ ）、（ ）、（ ）和（ ）等四个基本过程。
25．限制性内切酶分为（Ⅰ型）、（Ⅱ型）、（Ⅲ型）三种，其中只有（Ⅱ型）在基因工程操作中被应用。
26. 限制性内切酶辨认（具有迥文结构的DNA序列（呈二重旋转对称）序列； DNA分子在该酶切割下可产生（粘性末端）、（平头末端）或（钝性末端）末端。
27．分子克隆中常用的工具酶有（限制性核酸内切酶）、（DNA连接酶）、（DNA聚合酶Ⅰ）、（反转录酶）和（多聚核苷酸激酶）（末端转移酶）（碱性磷酸酶）。
28．分子克隆中常用的载体有（质粒）、（噬菌体）、（粘粒）（病毒）和（人工染色体）。
29.目的基因制备的常用方法有（ ）、（ ）、 （ ）。
30.体外重组常用方法有（ ）、（ ）、（ ）和（ ）。
31. 重组体导入原核生物细胞中的常用方法有（ ）和（ ）；重组体导入真核生物细胞中的常用方法有（ ）、（ ）和（ ）。
32.重组体的筛选方法有（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。
33. cDNA文库的构建环节是（ ）、（ ）（ ）、（ ）。
34．常用的核酸探针涉及（寡核苷酸探针）、（双链探针）和（单链探针）。
35．放射性同位素标记常用的标记方法有（ ）、（ ）、（ ）。
36．分子克隆中常用的非放射性同位素标记物有（ ）、（ ）、（ ）等；常用的标记方法有（ ）、（ ）。
37．核酸杂交技术可分为（液相杂交）和（固相杂交）两种类型；后者又可分为（ 膜上印迹杂交）和（细胞原位杂交）。
38．印迹杂交中常用的印迹方法有（Southern 印迹杂交）、（Northern 印迹杂交）、（斑点印迹杂交）、（Western 杂交印迹法）；
39．PCR技术的基本过程是（高温变形）、（低温退火）、（中温延伸）。
40．影响PCR的因素有（引物）、（模板）、（Taq DNA聚合酶）、（dNTP）、（Mg2+）、（ ）、（ ）、（ ）。
41. PCR反映的特点是（特异性强）、（灵敏度高）、（简便快速）、（对标本的纯度规定低）。
42. TaqDNA聚合酶是一种（耐热的DNA）聚合酶，具有（5’-3’DNA聚合酶）和（5’-3外切酶）活性，有或无（3’-5’外切酶）活性（又称校对活性）。
43. 一个完整的体外DNA重组技术重要涉及（获取目的基因）、（将目的基因进行必要的改造）、（选择和修饰克隆载体）、（将目的基因与载体连接获得具有目的基因的重组载体）（重组载体导入相应细胞（称为宿主细胞））、（ 筛选出含重组DNA的细胞等）六个环节。
44.基因工程技术的目的是（获得足够的DNA片段以分析基因的结构）、（将获得的 基因用于发展农业、林业、畜牧业和医学）；基因工程技术的意义是（改造生命）、（发明新生命）。
45. 限制性核酸内切酶的作用特点是（辨认位点的DNA序列呈二重旋转对称（即具有迥文结构）（切割DNA均产生含5’-磷酸和3’-羟基的末端）、（错位切割产生具有5’-或3’-突出的粘性末端；而沿对称轴切割双链DNA产生平头末端，也称钝性末端）、（少数不同的限制酶可辨认和切割相同的位点，这些酶称为同切酶）。
46. pBR322质粒载体的优点是（分子量较小易于纯化和防止纯化过程中链的断裂）和（具有两种抗生素抗性基因可作为转化子的筛选标志）（是具有较高的拷贝数，为重组体DNA的制备提供了极大的方便）。
47. pUC质粒载体的优点是（有更小的分子量和更高的拷贝数）、（可用组织化学方法检测重组体，筛选简朴，节省时间）和（具有多克隆位点MCS区段）。
48. λ噬菌体基因组的特点是（可做为外源DNA片段的插入区域，它分三个区域：左侧区、中间区（非必需区）、右侧区）和（噬菌体的成熟需要通过包装，即需要将重组DNA包装进入λ噬菌体的头部和尾部蛋白中）。
49. 构建型病毒载体的特点是（有广泛的哺乳动物细胞宿主）、（有较大的基因容量）、（自身具有完整的转录调控元件）、（通过感染方法进入宿主细胞，并有效地整合在宿主染色体DNA中）。
50. 构建cDNA文库的重要环节是（ ）、（ ）、（ ）、（ ）（ ）、（ ）。

三．问答题
1．分子克隆中常用的工具酶有哪些？各有何用途？
限制性核酸内切酶
切割DNA
DNA连接酶
生成3′- 5′磷酸二酯键
DNA聚合酶Ⅰ
探针标记、补平3′末端
反转录酶
cDNA合成
多聚核苷酸激酶
5′磷酸化、探针标记
末端转移酶
3′末端多聚尾
碱性磷酸酶
切除末端磷酸基

2．何谓载体？分子克隆中常用的载体有哪些？抱负的载体应具有哪些条件？
载体指可以将外源性DNA（目的DNA）片段引入宿主细胞并能在宿主细胞中进行自我复制或最终使外源性DNA表达的自主DNA。
常用的载体有：质粒、噬菌体、噬菌粒、粘粒、病毒和人工染色体等类型。
抱负载体应当具有的条件：
1、在宿主细胞中具有自我复制能力，或可以整合到宿主染色体上与基因组一同表达；
2、拷贝数多；3、应具有筛选标志；4、必须有多克隆位点(MCS)，即RE切割位点，多个限制酶的单一切点；5、分子量不宜过大，以利于体外操作；6、最佳配备有调控元件，如启动子、增强子等；7、载体DNA与宿主DNA容易分开，便于提纯。
3．何谓PCR？试述PCR基本技术原理和影响因素。
PCR的概念： PCR是一种体外扩增特异DNA片段的技术,其原理类似于DNA的体内扩增。它涉及：高温变性（90-97℃ ）低温退火（45-55℃）中温延伸（72℃左右）。变性：待扩增的DNA模板加热变性成单链；退火：减少温度，使单链靶序列与寡核苷酸引物退火；延伸：在适当条件下，运用DNA聚合酶使引物延伸，产生新的双链。这三个基本环节的反复循环，导致特异的靶序列的指数扩增。
影响PCR反映五要素： 引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+。
4．常用的核酸探针有哪些类型？各有何优缺陷？
1.寡核苷酸探针
优点：（1）制备方便，可随设计需要自动合成；
（2）可辨认靶序列内一个碱基的变化，非常合用于检测已知序列基因中的特定突变或检测在克隆化基因中通过定点诱变技术产生的特定突变。
（3）用新的酶促方法标记可得到高比活度的标记探针，适应于大多数杂交实验。
缺陷：（1）杂交稳定性较差，由于探针短；
（2）反映条件严格：对温度、盐浓度等条件规定严格；
（3）操作难度大
（4）特异性差，灵敏度低（分子短，所带标记物少）。
2.、双链探针，涉及基因组探针和cDNA探针。
优点：（1）杂交稳定性好，由于探针较长；
（2）特异性高；
缺陷：容易发生自我复性，制约了探针与靶序列的进一步杂交。
3、单链探针涉及单链DNA探针和RNA探针。
优点：（1）不发生自我复性，灵敏性高（DNA探针）；
（2）制备简朴，杂交体稳定性高，杂交率高；杂交后可用RNA酶消化未杂交的探针或用DNA酶1解决DNA，不需要再纯化，工艺简朴（RNA探针） 。
缺陷：RNA容易被核酸酶降解。
5．将目的DNA与载体DNA连接起来的方法有哪些？并用文或图表达各种连接过程。
将目的DNA与载体DNA连接起来的方法有下列几种类型：
（1）粘性末端连接法：以同一种限制性内切酶切割目的基因和载体DNA，获得相同的粘性互补末端，在一定温度下，两者的粘性末端互补配对，再经DNA连接酶将其连结，形成一个重组DNA分子。（2分）
（2）平齐末端连接法：以同一种限制性内切酶切割目的基因和载体DNA，限制性内切酶从辨认序列对称轴的中间切开，产生平齐末端。在高浓度DNA，大量T4 DNA连接酶存在时，可以直接运用平端将目的基因与载体连接起来。（2分）
（3）人工接头连接法：：所谓人工接头子又称为衔接物，是人工合成的大小约８-12个核苷酸并具有RE辨认位点的平齐末端双链寡核苷酸迥文序列。接头子是平端，在磷酸化后通过T4 DNA连接酶可与大多数平端DNA连接。连接后用相应的限制性内切酶切割，可产生所需要的粘性末端。（2分）
（4）适配子连接法：适配子是人工合成的具有一个以上限制酶辨认位点的短序列，它具有一个平端，可与其它DNA的平端连接，同时它尚有某种限制酶的突出端，可与含互补的限制酶突出端的DNA片段连接，连接后，用适当的限制酶切割又可产生所需要的突出粘端。（2分）
（5）同聚物加尾法：在末端转移酶催化下给载体DNA和目的DNA分子末端添加多聚dA和dT，形成粘性末端，而进行连接。（2分）
6．简述原核生物与真核生物基因组结构特点。
原核生物基因组结构的特点：
（1）有类核结构；
（2）染色体DNA通常与细胞膜相连；
（3）具有操纵子结构；
（4）结构基因都是单拷贝，rRNA基由于多拷贝，基因组DNA中不编码的部份所占比例比真核细胞基因组少得多（编码序列为90％ ）；
（5）不出现基因重叠现象；
（6）具有同基因，即编码同工酶的基因；
（7）DNA分子中具有各种功能的辨认区域；
（8）具有终止子；
（9）基因组中只有一个复制起始点，基因数量少，体积小；
（10）基因组中存在着可移动的DNA序列，涉及插入序列和转座子、也涉及质粒。
真核生物基因组特点：　
（1） 真核生物基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内，除配子细胞外，体细胞内的基因组是双份的，（即双倍体），即有两份同源的基因组；
（2） 真核细胞基因转录产物为单顺反子。一个结构基因通过转录生成一个mRNA分子，再翻译生成一条多肽链；
（3）存在反复序列，反复次数可达百万次以上；
（4） 基因组中不编码的区域多于编码的区域；
（5）大部分基因具有内含子，因此，基因是不连续的（断裂基因）；
（6）基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起始点，而每个复制子的长度较小。
（7）真核生物基因之间存在编码空白区或转录的空白区，称为间隔区DNA。基因组愈大，间隔区DNA所占的比例也愈高。

7．简述原核生物转录水平的调控。
（1）转录水平调控类型：
1）、负转录调控：调节基因的产物是阻遏蛋白，起着阻止结构基因转录的作用。根据其作用特性又可分为负控诱导和负控阻遏作用。在负控诱导系统中，阻遏蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录；在负控阻遏系统中，阻遏蛋白与效应物结合时，结构基因不转录。阻遏蛋白作用的部位是操纵区。
2）、正转录调控：调节基因的产物是激活蛋白，起着促进结构基因转录的作用。根据其作用特性又可分为正控诱导和正控阻遏作用。在正控诱导系统中，效应物分子的存在，使激活蛋白处在活性状态；在正控阻遏系统中，效应物分子的存在，使激活蛋白处在非活性状态。
（2）转录起始的正调控
1）、阿拉伯糖操纵子：是运用同一蛋白的不同结构形式活化和克制操纵子的调控方式，是正调控的典型例子。
（3）转录终止的调控
原核生物的转录终止调控方式分两大类：A.依赖ρ因子的终止调控；B.不依赖ρ因子的终止调控。此外，核糖体也参与转录终止。例:色氨酸操纵子的调控模式，色氨酸操纵子表达的调控有两种方式，一种通过阻遏蛋白的负调控，另一种是通过衰减子作用。
8．简述真核生物转录水平的调控。
真核生物转录水平调控重要通过反式作用因子与顺式作用元件和RNA聚合酶（RNA pol）的互相作用完毕。
（1）顺式作用元件：指某些能影响基因表达但不编码新的蛋白质和RNA的DNA序列，按照功能分为启动子、增强子、终止子、沉默子和衰减子等。
（2）反式作用因子：为DNA结合蛋白，核内蛋白，可使邻近基因开放（正调控）或关闭（负调控）。完整的反式作用因子通常具有三个重要功能结构域，分别为DNA辨认结合域、转录活化域和结合其他蛋白质的调节结构域。
1）、DNA辨认结合域
①锌指（zinc finger）结构
②同源结构域：调节与机体各部分正常发育或正常分化的有关基因的表达。
③碱性亮氨酸拉链：可使碱性区与DNA的亲和力明显增长。
④螺旋-环-螺旋
⑤碱性α-螺旋：转录复制因子CTF/N F-1的DNA结合区域具有α-螺旋结构，并具有高密度的碱性氨基酸，但不含锌指结构、同源结构域及亮氨酸拉链。
2)转录活化结构域
①酸性α-螺旋
②富含谷氨酰胺的结构域
③富含脯氨酸结构域
9．体外重组常用的连接方法有哪些？各有何优缺陷？

10．重组体的筛选常用的方法有哪些？简述各种方法的原理。

11．简述核酸杂交的基本技术过程。杂交反映过程中的变性方法有哪些？
基本过程：制备样品→制备探针→杂交→检测

12．核酸探针的标记有哪些类型？各有何优缺陷？
（1）缺口平移法(nick translation)；该方法是运用大肠杆菌DNA酶Ⅰ所具有的内切核酸酶活性和DNA聚合酶Ⅰ的5→ 3聚合和5→ 3外切核酸酶活性共同完毕。
（2）随机引物法(random primer)：引物是指具有各种也许排列顺序的寡核苷酸片段的混合物（六核苷酸残基的引物）。
（3）末端标记法：即在寡核苷酸链的5或3端通过酶促反映加上标记物，称为末端标记法。
（4）T4 DNA聚合酶标记法：

13．何谓核酸杂交？常用的杂交方法有哪些？
核酸分子杂交：具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下，按碱基配对原则形成双链的过程。即用已知的DNA或RNA片段来检测样品中未知核酸序列，通过核苷酸间碱基互补原则发生同源性结合，再通过显影或显色的方法，将结合核苷酸序列的位置或大小显示出来。
杂交的基本原理：应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的 DNA（或RNA）片段，按碱基互补关系形成杂交双链分子。
常用的杂交方法有：固相杂交（涉及细胞原位杂交和膜上印迹杂交（又分Southern印迹法、Northern 印迹法、斑点印迹杂；Western 印迹法））；液相杂交。
14．何谓转基因动物？转基因动物有何用途？

15. 何谓基因家族？基因家族有哪一些类型？
基因家族：真核细胞的基因组中有许多来源相同、结构相似、功能相关的基因经常按功能成套组合，这样的一套基因称为基因家族或多基因家族
按基因的终产物分类，基因家族可分为两类：一类是编码RNA的，如SnRNA、tRNA、rRNA另一类是编码蛋白质的基因家族。按它们在基因组中的分布不同分类，基因家族亦可分为两类：一类是基因串联排列在一起，形成基因簇，tRNA、rRNA、组蛋白等基因都属于这一类；另一类家族成员分别在不同的部位，如干扰素、珠蛋白、生长激素 。
16. 何谓反义RNA？反义RNA对翻译有何调控作用？
反义RNA，又称mRNA干扰性互补RNA。指能与特定mRNA互补结合的RNA片段，反义RNA由反义基因转录而来。对翻译的调控作用：
（1）反义RNA与mRNA 5ˊ端非翻译区涉及SD序列相结合。反义RNA与SD序列结合后，阻止mRNA与核糖体小亚基结合，直接克制翻译。
（2）反义RNA与mRNA 5ˊ端编码区起始密码子AUG结合，克制mRNA翻译起始。
（3）反义RNA与mRNA的非编码区互补结合，使mRNA构象改变，影响其与核糖体结合，间接克制了mRNA的翻译。
17. 简述原核生物翻译水平调控方式。
（1） 翻译起始的调控：SD序列对翻译的影响：遗传信息翻译起始于mRNA上的核糖体结合位点（RBS）。在RBS中有SD序列，该序列有助于翻译的起始。
（2） 反义RNA的调控作用：克制mRNA的翻译。
（3）RNA 干扰：将双链RNA导入细胞，使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因表达受克制
（4）RNA的稳定性与调控的关系：mRNA的降解速度是翻译调控的另一个重要机制。
（5）蛋白质合成中的自身调控：
（6）稀有密码对翻译的影响：细胞内相应于稀有密码子的tRNA较少，其翻译过程容易受阻
（7）重叠基因对翻译的影响：重叠的密码保证了同一核糖体对两个连续基因进行翻译
（8）poly（A）对翻译的影响：细胞中蛋白质合成旺盛时， mRNA链上核糖体数量就多，poly（A）也较长；当某些mRNA链不再翻译时，核糖体被释放出来，其poly（A）也相应缩短。
（9）魔斑核苷酸水平对翻译的影响
18. 简述原核生物与真核生物基因表达特点。
真核生物基因表达的特点：
（1）细胞具有全能性；
（2）基因表达的时间性和空间性；
（3）转录和翻译分开进行；
（4）初级转录产物要通过转录后加工修饰；
（5）不存在超基因式操纵子结构；
（6）部分基因多拷贝。
19. 真核生物mRNA
5ˊ端加帽和3ˊ端多聚腺苷酸化有何意义？
1） 5ˊ端加帽: 真核生物转录生成的mRNA在转录后，在5ˊ端加上7－甲基鸟苷。意义：保护转录体mRNA不受5ˊ外切酶降解，增强mRNA的稳定性，同时有助于mRNA从细胞核向胞质的转运，促进mRNA与核糖体的结合（通过帽结合蛋白介导完毕）。
2）3ˊ端加尾:转录后在mRNA在3ˊ末端加上50-150个腺苷酸，即poly(A)尾。
意义:保证mRNA在转录过程中不被降解。
20. 简述真核生物转录后水平的调控
1）5ˊ端加帽和3ˊ端多聚腺苷酸化
2）mRNA前体的选择性剪接：在高等生物细胞的高度异质性中起重要作用。由于剪接的多样化，一个基因在转录后通过mRNA前体的剪接加工而产生两个或更多的蛋白质.
21. 简述真核生物翻译水平的调控
（1）翻译起始的调控：1）翻译起始因子的功能调控：翻译起始因子(eIF2)是蛋白质合成过程中重要的起始因子。有些物质可以影响eIF-2的活性，调节蛋白质合成的速度，培养的真核细胞处在营养局限性时，eIF-2失活，最终导致肽链起始效率减少。
2）阻遏蛋白的调节作用：由于存在一些特定的翻译克制蛋白可以与一些mRNA的5ˊ端结合，从而克制了蛋白质翻译。
3）5ˊAUG对翻译的调节：5ˊAUG可以减少正常AUG启动翻译的作用，使翻译维持在较低水平。
4）mRNA 5ˊ端非编码区长度对翻译的影响：第一个AUG至5ˊ端之间的长度同样影响翻译起始效率和翻译起始的准确性。
（2） mRNA稳定性调节：mRNA的稳定性是翻译水平调控的一个重要因素，不同种类的mRNA，半衰期亦不一致。mRNA半衰期越长，翻译效率越高。
23. 体外重组常用的连接方法有哪些？各有何优缺陷？

24. 常用的核酸探针采用哪些方法进行标记？

25. 简述真核生物转录后的加工
（1） 5ˊ端加帽:真核生物转录生成的mRNA在转录后，在5ˊ端加上7－甲基鸟苷
（2） 3ˊ端加尾
（3） mRNA前体的选择性剪接
26. 简述真核生物和原核生物转录的差别

27. 试述PCR基本技术过程中引物设计的原则。
PCR引物设计的原则：
（1）引物长度：一般15-30bp，常用为20mer左右；
（2）引物扩增跨度：以500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段；
（3）引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，ATGC最佳随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列；
（4） 避免引物内部出现二级结构：避免两条引物间互补， 特别是 3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条带；
（5）引物 3’端的碱基必须与模板严格配对，特别是最末及倒数第二个碱基，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败；
（6）引物中有或能加上合适的酶切位点
（7）被扩增的靶序列最佳有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
（8）引物的特异性：引物与非特异扩增序列的同源性应小于70%或少于连续8个的互补碱基；
（9）引物量：每条引物的浓度0.1-1umol/L，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增长引物之间形成二聚体的机会。
28. 何谓宿主细胞？分子克隆中常用的宿主细胞有哪些？宿主细胞应具有哪些条件？
宿主细胞：是基因克隆中重组DNA分子的繁殖场合，
适当的宿主细胞，必须符以下条件：
（1）对载体的复制和扩增没有严格的限制；
（2）