微生物弧菌科专家讲座.pptx

弧弧 菌菌 科科微生物弧菌科第1页教学要求教学要求掌掌握握霍霍乱乱弧弧菌菌、副副溶溶血血弧弧菌菌生生物物学学特特征征和和微生物学检验。微生物学检验。熟悉霍乱弧菌、副溶血弧菌临床意义熟悉霍乱弧菌、副溶血弧菌临床意义气单胞菌、邻单胞菌（自学）气单胞菌、邻单胞菌（自学）微生物弧菌科第2页一类氧化酶阳性、菌体短小、弯曲成弧形一类氧化酶阳性、菌体短小、弯曲成弧形或直杆状、含有单端鞭毛、运动活泼革兰或直杆状、含有单端鞭毛、运动活泼革兰阴性细菌。阴性细菌。弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见，其中有一些种对人类致病为多见，其中有一些种对人类致病微生物弧菌科第3页一、霍乱弧菌（一）临床意义（一）临床意义（二）微生物学检验（二）微生物学检验微生物弧菌科第4页（一）临床意义（一）临床意义1 1、经肠道传染、经肠道传染，引发烈性肠道传染病霍乱，为，引发烈性肠道传染病霍乱，为甲类传染病甲类传染病2 2、在自然情况下，人类是霍乱弧菌易感者、在自然情况下，人类是霍乱弧菌易感者3 3、正常情况下，胃液中胃酸可毁灭食物中霍乱弧菌，、正常情况下，胃液中胃酸可毁灭食物中霍乱弧菌，但在胃酸降低时，或摄入大量霍乱弧菌时，霍乱但在胃酸降低时，或摄入大量霍乱弧菌时，霍乱弧菌能够从胃进入肠道弧菌能够从胃进入肠道微生物弧菌科第5页4 4、进入肠道霍乱弧菌经过鞭毛运动穿过肠粘膜表面、进入肠道霍乱弧菌经过鞭毛运动穿过肠粘膜表面粘液层，经过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁粘液层，经过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖产生对热不稳定霍乱毒素（殖产生对热不稳定霍乱毒素（cholera toxin,cholera toxin,CTCT）而致病）而致病5 5、CT CT 造成小肠上皮细胞分泌功效亢进，向细胞外造成小肠上皮细胞分泌功效亢进，向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，造成呕分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，造成呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱平衡紊吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱平衡紊乱状态乱状态6 6、经典病人粪便呈、经典病人粪便呈“米泔水米泔水”样样微生物弧菌科第6页 “米泔水米泔水”样便及霍乱患儿样便及霍乱患儿微生物弧菌科第7页7 7、病程分期：经典病例病程可分、病程分期：经典病例病程可分3 3期期 （1 1）吐泻期：以猛烈腹泻开始，继而出现呕吐，普）吐泻期：以猛烈腹泻开始，继而出现呕吐，普通不发烧，仅少数有低热。通不发烧，仅少数有低热。腹泻：腹泻是发病第一个症状，其特点为无里急腹泻：腹泻是发病第一个症状，其特点为无里急后重感，多数不伴腹痛，排便后自觉轻快感，少后重感，多数不伴腹痛，排便后自觉轻快感，少数患者有腹部隐痛，个别病例可有阵发性腹部绞数患者有腹部隐痛，个别病例可有阵发性腹部绞痛，排出粪便初为黄色稀便，后为水样便，以黄痛，排出粪便初为黄色稀便，后为水样便，以黄色水样便多见，腹泻严重者排出白色混浊色水样便多见，腹泻严重者排出白色混浊“米泔米泔水水”样大便，有肠道出血者排出洗肉水样大便，样大便，有肠道出血者排出洗肉水样大便，出血多者则呈柏油样便，以埃尔托生物型霍乱弧出血多者则呈柏油样便，以埃尔托生物型霍乱弧菌引发者多见，腹泻次数由天天数次至数十次不菌引发者多见，腹泻次数由天天数次至数十次不等，重者则大便失禁等，重者则大便失禁 微生物弧菌科第8页呕吐：普通发生在腹泻之后，不伴恶心，呕吐：普通发生在腹泻之后，不伴恶心，多为喷射性呕吐，呕吐物初为胃内食物，多为喷射性呕吐，呕吐物初为胃内食物，继而为水样，严重者亦可呕吐继而为水样，严重者亦可呕吐“米泔水米泔水”样物，与粪便性质相同，轻者可无呕吐。样物，与粪便性质相同，轻者可无呕吐。（2 2）脱水期：因为猛烈呕吐与腹泻，使体内）脱水期：因为猛烈呕吐与腹泻，使体内大量水分和电解质丧失，因而出现脱水，大量水分和电解质丧失，因而出现脱水，电解质紊乱和代谢性酸中毒，严重者出现电解质紊乱和代谢性酸中毒，严重者出现循环衰竭循环衰竭 （3 3）恢复期或反应期：腹泻停顿，脱水纠正）恢复期或反应期：腹泻停顿，脱水纠正后多数患者症状消失，尿量增加，体力逐后多数患者症状消失，尿量增加，体力逐步恢复步恢复 微生物弧菌科第9页8 8、临床类型：依据失水程度，血压和尿量情况，可、临床类型：依据失水程度，血压和尿量情况，可分为轻，中，重三型分为轻，中，重三型 （1）轻型：起病迟缓，腹泻不超出轻型：起病迟缓，腹泻不超出1010次次/d/d，为稀便，为稀便或稀水样便，普通不伴呕吐，连续腹泻或稀水样便，普通不伴呕吐，连续腹泻3 35 5天后天后恢复，无显著脱水表现。恢复，无显著脱水表现。（2）中型中型(经典经典)：有经典腹泻和呕吐症状，腹泻达：有经典腹泻和呕吐症状，腹泻达10102020次次/d/d，为水样或，为水样或“米泔水米泔水”样便，量多，样便，量多，因而有显著失水体征，血压下降因而有显著失水体征，血压下降 （3）重型：患者除有经典腹泻和呕吐症状外，存在重型：患者除有经典腹泻和呕吐症状外，存在严重失水，因而出现循环衰竭，表现为脉搏细速严重失水，因而出现循环衰竭，表现为脉搏细速或不能触及或不能触及 除上述三种临床类型外，还有一个罕见暴发除上述三种临床类型外，还有一个罕见暴发型或称中毒型，又称型或称中毒型，又称“干性霍乱干性霍乱”(cholera”(cholera sicca)sicca)，本型起病急骤，还未出现腹泻和呕吐症，本型起病急骤，还未出现腹泻和呕吐症状，即快速进入中毒性休克而死亡状，即快速进入中毒性休克而死亡 微生物弧菌科第10页微生物弧菌科第11页9 9、抵抗力、抵抗力 在水中存活时间长（在水中存活时间长（2020天左右），对热、干天左右），对热、干燥和光敏感，燥和光敏感，1001001212分钟即死亡，怕酸不怕碱，分钟即死亡，怕酸不怕碱，对惯用消毒剂敏感，对庆大耐药对惯用消毒剂敏感，对庆大耐药1010、抗原结构、抗原结构 有有O O抗原与抗原与H H抗原，依据抗原，依据O O抗原不一样，抗原不一样，现有现有155155个血清群个血清群O1O1群与群与O139O139群：霍乱群：霍乱非非O1O1群：胃肠炎群：胃肠炎微生物弧菌科第12页1111、自、自18171817年以来，已发生七次世界性霍乱大流行，年以来，已发生七次世界性霍乱大流行，均由霍乱弧菌均由霍乱弧菌O1O1群引发群引发前六次为霍乱弧菌古典生物型前六次为霍乱弧菌古典生物型第七次为埃尔托生物型第七次为埃尔托生物型1212、自、自19921992年年1010月起分离到新血清群月起分离到新血清群O139O139，现在世，现在世界各地都有流行或散发病例汇报界各地都有流行或散发病例汇报微生物弧菌科第13页第一次大流行：第一次大流行：1817年，当初霍乱起于印度，传年，当初霍乱起于印度，传到阿拉伯地域，然后到了非洲和地中海沿岸。到阿拉伯地域，然后到了非洲和地中海沿岸。第二次大流行：第二次大流行：1826年，它抵达阿富汗和俄罗斯，年，它抵达阿富汗和俄罗斯，然后扩散到整个欧洲。然后扩散到整个欧洲。第三次大流行：第三次大流行：1832年，它漂洋过海，抵达北美。年，它漂洋过海，抵达北美。20年不到，霍乱就成了年不到，霍乱就成了“最令人害怕、最引人注最令人害怕、最引人注目标目标19世纪世界病世纪世界病”。1865-1875年，年，第四次世界性大流行第四次世界性大流行是经过一艘是经过一艘从埃及到英国航船流传开来。从埃及到英国航船流传开来。1883-1896年，年，第五次世界霍乱大流行。第五次世界霍乱大流行。历史上历史上8次霍乱大流行次霍乱大流行微生物弧菌科第14页1910-19261910-1926年，年，第六次全球性霍乱第六次全球性霍乱。百余年间霍乱。百余年间霍乱6 6次大流行，造成损失难以计算，仅印度死者就超次大流行，造成损失难以计算，仅印度死者就超出出38003800万。万。19611961年，年，霍乱又开始第霍乱又开始第7 7次大流行次大流行。这次起于印度。这次起于印度尼西亚，然后传到亚洲其它国家和欧洲，迄今已尼西亚，然后传到亚洲其它国家和欧洲，迄今已涉及五大洲涉及五大洲140140个以上国家和地域，汇报患者个以上国家和地域，汇报患者350350万以上。万以上。19921992年年1010月，由非月，由非0101群一个血清型群一个血清型01390139霍乱霍乱弧菌引发新型霍乱席卷印度和孟加拉国一些地域，弧菌引发新型霍乱席卷印度和孟加拉国一些地域，至至19931993年年4 4月已汇报十万余病人，现已涉及许多国月已汇报十万余病人，现已涉及许多国家和地域，包含我国，有取代埃尔托生物型可能，家和地域，包含我国，有取代埃尔托生物型可能，有些人将其称为霍乱有些人将其称为霍乱第第8 8次世界性大流行次世界性大流行微生物弧菌科第15页（二）微生物学检验（二）微生物学检验1 1、标本采集、标本采集（1 1）粪便、肛门拭子和可疑食物）粪便、肛门拭子和可疑食物（2 2）及时送检）及时送检（3 3）如不能及时送检，应将标本置于）如不能及时送检，应将标本置于3.5%3.5%NaClNaCl蛋白胨水或卡蛋白胨水或卡-布运输培养基中送检布运输培养基中送检微生物弧菌科第16页2、检验、检验（1）形态与染色：）形态与染色：弧形或逗点状，无芽孢，弧形或逗点状，无芽孢，无荚膜，单鞭毛，运动活泼；取标本直接无荚膜，单鞭毛，运动活泼；取标本直接革兰染色，油镜下观察到革兰染色，油镜下观察到“鱼群样鱼群样”排列排列革兰阴性弧菌（可初步汇报）革兰阴性弧菌（可初步汇报）（2）动力观察及制动试验：取患者粪便制成）动力观察及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见穿梭或流星样运动，穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血群霍乱弧菌多价血清制动试验阳性（可早期汇报）清制动试验阳性（可早期汇报）微生物弧菌科第17页革兰染色革兰染色鞭毛染色鞭毛染色微生物弧菌科第18页微生物弧菌科第19页微生物弧菌科第20页快速诊疗：经过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原单抗凝集试验霍乱毒素测定：ELISA法微生物弧菌科第21页（3）培养培养特征：营养要求不高，兼性厌氧，在普通培养中生长良好，耐碱不耐酸，NaCl6%可生长，在液体培养基中形成菌膜碱性琼脂平板：碱性琼脂平板：硫代硫酸钠硫代硫酸钠-枸櫞酸盐枸櫞酸盐-胆盐胆盐-蔗糖琼脂平板蔗糖琼脂平板（TCBS）：黄色菌落）：黄色菌落4号琼脂或号琼脂或庆大霉素琼脂平板：中心灰褐色庆大霉素琼脂平板：中心灰褐色菌落菌落微生物弧菌科第22页微生物弧菌科第23页（4）生化反应）生化反应试验名称试验名称结果结果试验名称试验名称结果结果氧化酶氧化酶+吲哚吲哚+硝酸盐还原硝酸盐还原+葡萄糖葡萄糖+赖氨酸赖氨酸+蔗糖蔗糖+鸟氨酸鸟氨酸+甘露醇甘露醇+精氨酸双水解精氨酸双水解-0 0、1 1NaClNaCl+V-PV-Pd d7 7、1010 NaCl NaCl-明胶液化明胶液化+微生物弧菌科第24页（5 5）血清学判定）血清学判定确定血清群：确定血清群：O1 O1、O139O139、非、非O1O1群群确定血清型：确定血清型：O1O1群群O O抗原由抗原由A A、B B、C C三种抗原三种抗原生物分型：古典生物型与生物分型：古典生物型与EltorEltor生物型生物型血清型血清型A A抗原抗原B B抗原抗原C C抗原抗原小川型（小川型（ABAB）+-稻叶型（稻叶型（ACAC）+-+彦岛型（彦岛型（ABCABC）+微生物弧菌科第25页3、检验程序、检验程序确诊汇报确诊汇报标本标本碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水 分离培养（分离培养（TCBS、碱性平板）、碱性平板）生化判定分型生化判定分型血清学判定血清学判定初步汇报初步汇报快速诊疗快速诊疗 直接涂片直接涂片 动力、制动试验动力、制动试验微生物弧菌科第26页二、副溶血性弧菌二、副溶血性弧菌（一）临床意义（一）临床意义（二）微生物学检验（二）微生物学检验微生物弧菌科第27页（一）临床意义（一）临床意义1 1、含有嗜盐性、含有嗜盐性2 2、存在于近海海水、海底沉淀物、鱼虾类和贝壳及、存在于近海海水、海底沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工海产品中盐渍加工海产品中3 3、主要引发胃肠炎、主要引发胃肠炎是我国沿海地域及海岛食物中毒最常见病原菌是我国沿海地域及海岛食物中毒最常见病原菌胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶然血性，恢复较快，病程水样便，偶然血性，恢复较快，病程2323天，通常为自限性天，通常为自限性微生物弧菌科第28页4 4、经过菌毛粘附，产生两种致病因子：耐热直接溶、经过菌毛粘附，产生两种致病因子：耐热直接溶血素、耐热直接溶血素相关溶血素血素、耐热直接溶血素相关溶血素5 5、抵抗力：、抵抗力：抵抗力弱，不耐热，抵抗力弱，不耐热，90 1min90 1min即被杀即被杀死，耐碱怕酸，死，耐碱怕酸，1%1%醋酸或醋酸或50%50%食醋中食醋中1min1min死亡，淡死亡，淡水中不超出水中不超出2 2日，但海水中能存活日，但海水中能存活4747天以上天以上微生物弧菌科第29页（二）微生物学检验1、标本采集、标本采集 可采集患者粪便，肛门拭子或可疑食物。应可采集患者粪便，肛门拭子或可疑食物。应及时接种，或置碱性蛋白胨水或卡及时接种，或置碱性蛋白胨水或卡-布运输培养基布运输培养基中送检中送检2、检验、检验（1）形态与染色）形态与染色革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜无荚膜微生物弧菌科第30页（3 3）培养）培养培养特征：要求不高，需氧或兼性厌氧，含有嗜培养特征：要求不高，需氧或兼性厌氧，含有嗜盐特征，无盐不生长，盐特征，无盐不生长，超出超出8%8%不能生长，不能生长，最适最适NaClNaCl浓度为浓度为3.5%3.5%增菌培养：标本接种增菌培养：标本接种1%NaCl1%NaCl碱性胨水或碱性胨水或4%NaCl4%NaCl蛋蛋白胨水中进行选择性增菌白胨水中进行选择性增菌TCBSTCBS平板：绿色或蓝绿色菌落（平板：绿色或蓝绿色菌落（不发酵蔗糖）不发酵蔗糖）微生物弧菌科第31页微生物弧菌科第32页神奈川现象（神奈川现象（Kanagawa phenomenon,KPKanagawa phenomenon,KP）从腹泻患者中分离到菌株从腹泻患者中分离到菌株95%95%以上在我妻以上在我妻（wagatsumawagatsuma）琼脂）琼脂上产生上产生溶血现象溶血现象NaClNaCl生长试验生长试验在不含在不含NaClNaCl和含和含10%10%蛋白胨水中不生长，在蛋白胨水中不生长，在3%3%和和7%NaCl 7%NaCl 蛋白胨水中生长蛋白胨水中生长微生物弧菌科第33页（4 4）生化反应）生化反应生化反应生化反应结果结果生化反应生化反应结果结果氧化酶氧化酶+O129O12910ug10ug吲哚吲哚+O129 150ugO129 150ug+V VP P葡萄糖葡萄糖+枸枸乳糖乳糖ONPGONPG麦芽糖麦芽糖+动力动力+蔗糖蔗糖精氨酸水解精氨酸水解0%NaCI0%NaCI鸟氨酸鸟氨酸+3%NaCI3%NaCI赖氨酸赖氨酸+10%NaCI10%NaCI微生物弧菌科第34页