血液的采集和保存专家讲座.pptx

第一章第一章 血液普通检验血液普通检验 血液的采集和保存第1页绪 论一、临床检验（clinical laboratory technology or science）又称试验诊疗学，就是经过试验室各种检验方法，包含感官检验、理学检验、化学检验、显微镜检验以及自动化仪器检验等，对病人血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检验、分析，以取得病原、病理改变及脏器功效状态等资料。血液的采集和保存第2页二、临床检验在医学中作用二、临床检验在医学中作用 1、为准确诊疗、及时治疗提供依据、为准确诊疗、及时治疗提供依据临床检验结果是支持诊疗、判别诊疗、甚至确定诊疗临床检验结果是支持诊疗、判别诊疗、甚至确定诊疗主要依据。主要依据。例：例：anemia依据：血中红细胞和血红蛋白量降低依据：血中红细胞和血红蛋白量降低leukemia依据：血象和骨髓象依据：血象和骨髓象肾脏有实质性损伤依据肾脏有实质性损伤依据尿液中出现蛋白、细胞尿液中出现蛋白、细胞管型管型问：问：tumor？血液的采集和保存第3页2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生对应改变会随之发生对应改变3、为预防疾病提供资料、为预防疾病提供资料如血象和肿瘤细胞学普查等如血象和肿瘤细胞学普查等血液的采集和保存第4页三、临床检验普通方法三、临床检验普通方法1、目视检验、目视检验直接观察标本：颜色、透明度、性状，有没有直接观察标本：颜色、透明度、性状，有没有凝块或寄生虫凝块或寄生虫2、理学检验、理学检验液体相对密度、血液比粘度、红细胞沉降液体相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理改变率、红细胞比积等病理改变3、化学检验、化学检验定性和定量检测标本化学成份病理改变定性和定量检测标本化学成份病理改变4、显微镜检验、显微镜检验观察有型成份数量和形态观察有型成份数量和形态5、自动化仪器检验、自动化仪器检验电子技术、程序控制发展电子技术、程序控制发展血液的采集和保存第5页四、学习临床检验目标和要求四、学习临床检验目标和要求1、理论联络实践、理论联络实践2、操作要求、操作要求3、检验结果必须和临床表现结合、检验结果必须和临床表现结合4、检验人员医德、检验人员医德血液的采集和保存第6页血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和血涂片制备血液学检验血液学检验 ：反应造血系统本身、机体全身或局部病变反应造血系统本身、机体全身或局部病变有利于疾病诊疗及疗效、预后观察有利于疾病诊疗及疗效、预后观察只能反应疾病某首先情况，不能认为是病只能反应疾病某首先情况，不能认为是病程全部反应；不一样个体，对同一影响有程全部反应；不一样个体，对同一影响有不一样反应，或也可对不一样影响产生不一样反应，或也可对不一样影响产生相同反应相同反应血液的采集和保存第7页一、血液标本采集一、血液标本采集1、毛细血管采血法、毛细血管采血法a.部位：中指或无名指尖内侧，部位：中指或无名指尖内侧，半岁以下拇指或足部，特殊人半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定。员视情况而定。b.所用器材：采血针、吸管所用器材：采血针、吸管c.采血步骤及注意事项采血步骤及注意事项血液的采集和保存第8页2、静脉采血法、静脉采血法a.部位：主要是肘静脉。还能够在：手背部手腕部等部位：主要是肘静脉。还能够在：手背部手腕部等 幼儿可采取颈外静脉采血。幼儿可采取颈外静脉采血。b.采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装 置置c.采血步骤及注意事项采血步骤及注意事项血液的采集和保存第9页血液的采集和保存第10页两种采血方法优缺点比较两种采血方法优缺点比较毛细血管毛细血管静脉血静脉血缺点缺点限制了重复试验和追限制了重复试验和追加试验，标本量少，加试验，标本量少，局部炎症可得假结果局部炎症可得假结果，组织液可混入，组织液可混入不一样抗凝剂使用，不一样抗凝剂使用，改变血液性质，影响改变血液性质，影响有形成份形态有形成份形态优点优点价廉、快速、操作简价廉、快速、操作简便，标本可直接测定便，标本可直接测定标本代表性大，无组标本代表性大，无组织液影响，适于临床织液影响，适于临床研究，可重复试验和研究，可重复试验和追加其它试验追加其它试验血液的采集和保存第11页惯用血液标本抗凝剂惯用血液标本抗凝剂及其使用选择及其使用选择1、柠檬酸钠（枸橼酸钠）、柠檬酸钠（枸橼酸钠）a.抗凝原理：螯合钙离子抗凝原理：螯合钙离子b.使用方法使用方法 配成配成109 mmol/L浓度和血液浓度和血液1：9 106 mmol/L浓度和血液浓度和血液1：4化学名：化学名：3-羟基羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）羧基戊二酸（三钠盐）c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）血液的采集和保存第12页2.草酸钠（乙二酸钠盐）草酸钠（乙二酸钠盐）a.抗凝原理：草酸钙沉淀抗凝原理：草酸钙沉淀b.使用方法使用方法 草酸钠草酸钠0.1mol/L 和血液和血液1：9c.适用范围：适用范围：止血学检验止血学检验血液的采集和保存第13页3.双草酸盐抗凝剂双草酸盐抗凝剂 a.抗凝原理：抗凝原理：草酸钙沉淀草酸钙沉淀b.使用方法：使用方法：草酸钾草酸钾0.8g,草酸铵草酸铵1.2g（100ml）与血液与血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）c.适用范围：适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计红细胞检验（红细胞比积、计数）数）不适于血小板计数和白细胞分不适于血小板计数和白细胞分类计数类计数血液的采集和保存第14页4.肝素肝素 （含硫酸基团粘多糖）（含硫酸基团粘多糖）a.抗凝原理：低浓度时抑制因子抗凝原理：低浓度时抑制因子a、和和PF3之之 间作用，加强抗凝血酶间作用，加强抗凝血酶灭活丝灭活丝 氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶自我催化及抑制还能抑制凝血酶自我催化及抑制 因子因子作用；高浓度时阻断凝血作用；高浓度时阻断凝血 酶和纤维蛋白反应。酶和纤维蛋白反应。b.适用方法：适用方法：1g/L浓度肝素钠与血液浓度肝素钠与血液 1：10血液的采集和保存第15页c.优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 溶血、能耐高温。溶血、能耐高温。d.适用范围：适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白 测定、红细胞比积）和各种生化分析测定、红细胞比积）和各种生化分析血液的采集和保存第16页5.乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）盐）盐a.抗凝原理：抗凝原理：螯合钙离子螯合钙离子b.使用方法：使用方法：15g/L浓度浓度EDTA 和血液和血液 1：10c.适用范围：适用范围：对血细胞形态影响小对血细胞形态影响小-血小血小板计数；板计数；影响血小板聚集和白细胞吞影响血小板聚集和白细胞吞噬功效噬功效 -不易做止血学检验及血小不易做止血学检验及血小板功效板功效 检验。检验。血液的采集和保存第17页物理方法抗凝：脱纤维蛋白：将血液注入有玻璃珠器皿中，转动，纤维 蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而预防血成凝块。适 用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检验。血液的采集和保存第18页血涂片制备技术血涂片制备技术1.血涂片用途：血涂片用途：血细胞形态学检验、网织红、异常血细胞形态学检验、网织红、异常 寄生虫检验。寄生虫检验。2.血涂片制备步骤：（手工推片法）血涂片制备步骤：（手工推片法）血液的采集和保存第19页将推玻片向1方向稍抽回，当血液充满推玻片宽度后，以一定均匀速度向2方向滑动。血液的采集和保存第20页3.血涂片质量评价：血涂片质量评价：均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧注意：血滴大，速度快、角度大注意：血滴大，速度快、角度大-血膜厚血膜厚血液的采集和保存第21页血液的采集和保存第22页细胞染色技术细胞染色技术染料染料-生物学染色剂：将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜生物学染色剂：将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜 下观察结构。下观察结构。（一）、染料（一）、染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料）发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。组织亲合。血液的采集和保存第23页1.碱性染料：为阳离子染料，能接收质子，染细胞核碱性染料：为阳离子染料，能接收质子，染细胞核 染料。如亚甲蓝、天青。染料。如亚甲蓝、天青。2.酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞碱性成份并染色，如血红蛋白、细胞碱性成份并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成份等。嗜酸性颗粒成份等。3.复合染料：同时含有阴、阳离子型染料如瑞氏染料复合染料：同时含有阴、阳离子型染料如瑞氏染料血液的采集和保存第24页（二）、细胞染色原理：普通以它们物理现象和/或化学 现象为依据1.物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等2.化学作用：a.染料化学成份：助色基团存在，碱性染料 在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷碱性物质结合。血液的采集和保存第25页 b.蛋白质化学性质：蛋白质中氨基酸含有不一样数量氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2取得一个H+变成带正电-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电-COO-。分别与不一样染料结合。c.周围环境酸碱度：如环境pHpI（pI 为等电 点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH pI，则结合碱性染料。血液的采集和保存第26页（三）、细胞染色法类型 1.普通染色法：经物理和/或化学作用吸附、结合 2.荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜 3.细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等 4.细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成份。细胞免疫化学染色法（应用单克隆抗体技术、酶标识技术）血液的采集和保存第27页瑞氏染色法瑞氏染色法（一）、染色原理（一）、染色原理 分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中碱分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青青 B与细胞中酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、与细胞中酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条和伊红结合在适宜条件下件下 形成紫色天青形成紫色天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫染色质成红色），中性粒细胞颗质成紫色（疟原虫染色质成红色），中性粒细胞颗粒及血小板颗粒区成紫色。粒及血小板颗粒区成紫色。血液的采集和保存第28页（二）、试剂（二）、试剂 1.Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 甲醇：有强大脱水力，可将细胞固定为一定甲醇：有强大脱水力，可将细胞固定为一定 形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增 加细胞与染料接触表面积，提升对染料吸附作用，加细胞与染料接触表面积，提升对染料吸附作用，增强染色效果。增强染色效果。2.磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBS）：磷酸二氢钾（无水）：磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水），磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。，塞紧瓶口备用。血液的采集和保存第29页3.染色方法：染色方法：a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多缓冲液，混匀，染色滴加等量或稍多缓冲液，混匀，染色5-10分钟。分钟。d.用清水冲洗，待干后镜检。用清水冲洗，待干后镜检。血液的采集和保存第30页4.注意事项：注意事项：a.血膜要干透后才能染色，不然染色时易脱落血膜要干透后才能染色，不然染色时易脱落 b.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少相关，染色时间与染液浓度、室温及细胞多少相关，普通染液淡、染色时间长些效果好。普通染液淡、染色时间长些效果好。c.染液不能过少，以防蒸发沉淀。染液不能过少，以防蒸发沉淀。d.冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料从容。冲洗时间也不能长。从容。冲洗时间也不能长。e.染色过淡，可复染。染色过淡，可复染。f.染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色血液的采集和保存第31页血液的采集和保存第32页六、姬姆萨染色法（一）、染色原理：基本成份依然是伊红和亚甲蓝，改进了染料质量，使细胞核着色好，结构显示更清楚，而胞浆和中性颗粒染色较差。（二）、试剂 Giemsa 甲醇 纯甘油（三）、染色方法 1.甲醇固定干燥血膜3-5min 2.将血膜在染液中浸染10-30min 3.流水冲洗,待干后镜检血液的采集和保存第33页七、巴氏染色法 是脱落细胞染色法中很好染色方法。血液的采集和保存第34页显微镜细胞计数法显微镜细胞计数法细胞计数是临床检验最惯用技术。显微镜计数法、血细胞计数仪计数法血液的采集和保存第35页计数板计数板血液的采集和保存第36页细胞计数注意事项细胞计数注意事项供计数标本必须新鲜，各种体液标本做供计数标本必须新鲜，各种体液标本做到随采随地理到随采随地理混匀混匀加盖玻片方式加盖玻片方式稀释液要过虑，小试管、定量吸管、计稀释液要过虑，小试管、定量吸管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等误认数板均须清洁，以免杂质、微粒等误认为细胞为细胞血液的采集和保存第37页计数误差计数误差1、技术误差（、技术误差（technical errors)使用器材不符合要求使用器材不符合要求采血部位不妥采血部位不妥稀释倍数不准稀释倍数不准充液不妥充液不妥血液发生凝固血液发生凝固血液的采集和保存第38页固有误差固有误差在显微镜计数法中包含计数域误差在显微镜计数法中包含计数域误差（field error)、吸管误差（、吸管误差（pipet error)和计数室误差（和计数室误差（chamber error)三种三种 血液的采集和保存第39页