液态活检与你同行.pptx

液态活检与你同行液态活检与你同行Liquid Biopsy,go along with Liquid Biopsy,go along with U U.9.1 6液态活检与你同行第1页MIT Technology Review杂志公布了年度十大突破技术(10 Breakthrough Technologies)榜单。液态活检技术光荣上榜。液态活检与你同行第2页3“液态活检”Christian Rolfo,Biochimica et Biophysica Acta,.Lowes L E,et al.J.International journal of molecular sciences,17(9):1505.A liquid biopsy is a liquid biomarker that can be easily isolated from many body fluids blood,saliva,urine,ascites,pleural effusion,etc.)and,as well as a tissue biopsy,a representative of the tissue from which it is spread.包含：循环肿瘤细胞 （CTCCTC）;循环肿瘤DNADNA（ctDNActDNA）;肿瘤外泌体 （exosomeexosome）液态活检与你同行第3页液体活检发展历程01液体活检临床应用02液体活检VS组织检测03CONTENT液态活检与你同行第4页Part 1液体活检发展历程液态活检与你同行第5页6癌症患者ctDNA、cfDNA及其发觉lcfDNA即循周游离DNA，机体细胞释放入外周血液循环后发生部分降解内源性DNA。lctDNA即循环肿瘤DNA，是指肿瘤细胞DNA经脱落或细胞凋亡后释放进入循环系统。可来自原发肿瘤或转移形成新肿瘤。（是cfDNA一个）l甚至在肿瘤形成早期血液中往往还没有CTCs不过却已经开始有ctDNA。Ma M,et al.J.Annals of translational medicine,3(16).早在早在1947年，年，Mandel和和Metais就发就发现血浆中存在游离的核酸分子。现血浆中存在游离的核酸分子。1977年，年，Leon等人发现，肿瘤患者的血等人发现，肿瘤患者的血浆游离浆游离DNA水平要明显高于健康人群水平要明显高于健康人群1994年，人们才发现这种携带了突变年，人们才发现这种携带了突变信息的循环信息的循环DNA是肿瘤的标志是肿瘤的标志液态活检与你同行第6页19911991膀胱癌患者尿液DNA-TP53突变19991999乳腺癌TP53突变胰腺癌KRAS突变肝癌和卵巢癌发觉TP53突变食管癌CpG岛甲基化结直肠癌发觉KRAS突变肺癌发觉KRAS突变；黑色素瘤BRAF突变ctDNA成为肿瘤研究热点，下一代癌症指标几十年来，人们发觉几十年来，人们发觉ctDNA与肿瘤亲密相关，能够准确与肿瘤亲密相关，能够准确反应肿瘤动态改变反应肿瘤动态改变。肾癌DNA不稳定性液态活检与你同行第7页8循环肿瘤细胞（CTCs）循环肿瘤细胞（CTCs）指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环肿瘤细胞。18691869澳大利亚医生Ashworth发觉CTCs19891989肿瘤转移中发觉CTC1999-1999-开展大量临床试验197619761976年CTC细胞被重新定义FDA同意用于临床 单细胞测序技术确立CTC肿瘤替换性CTC可能在肉眼可见肿瘤形成之前进入外周血，是肿瘤转移“种子”。液态活检与你同行第8页9外泌体及其发觉Raposo G，et al.J.J Cell Biol,200(4):373-383.外泌体研究尚处于临床早期，全球临床试验26例 1986198619961996膜性囊泡研究三位科学家取得诺贝尔奖发觉外泌体EB病毒转化B细胞内膜性囊泡可激活T细胞天然存在于体液中，包含血液、唾液、尿液和母乳。外泌体外泌体(Exosome)是活细胞分泌起源于晚期核内体(也称为多囊泡体)膜性囊泡。液态活检与你同行第9页10液体活检技术对比lctDNA 富集轻易检测难但肿瘤代表性较强lCTC 检测轻易富集难l外泌体稳定性较强，但距临床应用还较远液态活检与你同行第10页Part 2液态活检临床应用液态活检与你同行第11页ctDNA临床应用Heitzer E,et al.J.Clinical chemistry,61(1):112-123.早期诊疗，检测残余病灶动态监测治疗反应；指导靶向用药判断预后液态活检与你同行第12页13最新版NCCN指南增加ROS1融合基因Nat Med.Feb 12;18(3):378-81.液态活检与你同行第13页14ROS1融合基因年全基因组分析在肺癌上发觉年全基因组分析在肺癌上发觉ROS1基因。基因。在前期临床研究中，在前期临床研究中，crizotinib显示出反抗显示出反抗ROS1驱动肿瘤细胞活性。驱动肿瘤细胞活性。活活Nat Med.Feb 12;18(3):378-81.液态活检与你同行第14页15ROS1融合基因（临床研究 PROFILE 1001）Shaw A T,et al.NEJM,371(21):1963-1971.入组病例：ROS1队列研究入组ROS1突变阳性患者 50人检测方法：FISH检测研究结果：ORR：72%，mPFS为19.2个月液态活检与你同行第15页16ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙 CSCO关关键入入组标准准l集中RT-PCR检测ROS1-阳性l确认ALK融合阴性l局部晚期或转移性NSCLCl既往接收过 3 线系统治疗lECOG PS 0 or 1l可评定疾病l治疗稳定脑转移患者可入组克唑替尼250mg Bid PO，连续剂量28天一周期（N=127）临床床终点点主要终点：ORR次要终点：连续响应时间 响应时间 疾病控制率 PFS OS 安全性 临床结局OO-1201是一项针对东亚人群（中国、日本、韩国）期临床研究，其中包含中国患者74例，是迄今为止规模最大ROS1阳性NSCLC临床研究。液态活检与你同行第16页17ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙 CSCO基线统计与疾病特点液态活检与你同行第17页18ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙 CSCO基线疾病改变百分比IRR-评定靶病变疾病改变百分比液态活检与你同行第18页19ROS1融合基因（临床研究OO-1201）.吴一龙 CSCO治疗中发生10%不良反应液态活检与你同行第19页Part 3液态活检VS组织检测液态活检与你同行第20页21血液检测肿瘤基因突变关键问题血液检测是否有生存获益血液检测是否有生存获益?1血液检测与组织一致性程度血液检测与组织一致性程度?2液态活检与你同行第21页血液检测优势与临床获益进展追踪（比影像学更早）血液检测无痛微创、轻易获取无取样空间限制液态活检与你同行第22页23ctDNA检测RAS突变与组织检测一致性Vidal J,et al.J.Annals of Oncology,28(6):1325-1332.IF:11.855l55例组织中检测阳性患者，53例血液样本阳性，总体一致率到达96.4%。l60例组织检测RAS野生型患者，54例血液检测中为野生型，总体符合率90%。其余6例患者，血液检测到突变而组织未检测到。55例组织阳性例组织阳性60例组织阴性例组织阴性115例转移型例转移型mCRC患者组织和血液样本患者组织和血液样本研究结论：115例mCRC患者组织和血浆样本RAS分析总一致性为93%。血液检测可靠性不亚于组织检测，甚至高于组织检测血液检测可靠性不亚于组织检测，甚至高于组织检测液态活检与你同行第23页24ctDNA检测与组织检测一致性Vidal J,et al.J.Annals of Oncology,28(6):1325-1332.临床案例：NRAS61等位基因突变术前术后动态监测案例KRAS146等位基因突变术后监测案例一个IV期结直肠癌肝转移患者，检测到血浆和组织NRAS61突变后4周后开始贝伐单抗-FOLFOX治疗，显著ctDNA下降与疾病稳定和12周时CT扫描结果相关联；八个月后，患者疾病复发，RAS 等位基因突变率对应增加，开启二线治疗方案FOLFIRI-阿柏西普三个月后，CT检测而且稳定，此时检测不到ctDNA RAS突变。一个IV期结直肠癌多发转移患者，血液活检分析检测到一个KRAS146等位基因突变，随即手术组织样本检测证实了血液检测结果。FOLFOX-贝伐单抗治疗早期，ctDNA RAS突变率逐步降低，12周时检测不到ctDNA，治疗停顿后，ctDNA KRAS146突变率增加，随即再次进行化疗，ctDNA KRAS146突变率随之下降。液态活检与你同行第24页作者年份期刊样本数癌种方法突变一致率Shu Y,et alScientific Reports605除脑瘤外29种肿瘤NGS87.0%MaGene219III-IV期NSCLC患者ARMS82%（EGFR）IFUM trial Journal of Thoracic Oncology1060NSCLC患者试剂盒94%（EGFR）Villaflor OncotargetNSCLC患者NGS79%Vidal J,et alAnnals of Oncology115转移型结直肠癌试剂盒93%（RAS）血液检测与组织检测含有较高一致性 组织和血液样本不一致性原因可能有：肿瘤异质性组织和血液采样时间差异肿瘤时期肿瘤类型液态活检与你同行第25页项目项目推荐等推荐等级级适用人群适用人群临床应用药品意义意义EGFR1类推荐类推荐全部病理诊疗为肺腺癌、含有腺癌成份和含有腺癌分化NSCLC患者；无嗜烟者、小活检标本或混合组织学类型患者.厄洛替尼（厄洛替尼（1类推荐）类推荐）阿法替尼（阿法替尼（1类推荐）类推荐）吉非替尼（吉非替尼（1类推荐）类推荐）敏感位点敏感位点：19号外显子缺失、号外显子缺失、21号外号外显子（显子（L858R,L861）18号外显子号外显子（G719X，G719)，20号外显子号外显子（S768I）耐药位点耐药位点：20号外显子插入号外显子插入突变，突变，KRAS突变突变ALK1类推荐类推荐克唑替尼（克唑替尼（1类推荐）类推荐）色瑞替尼（色瑞替尼（1类推荐）类推荐）ALK重排重排FISH阳性阳性ROS12A推荐克唑替尼（2A推荐）ROS1重排重排FISH阳性阳性PD-L12A推荐pembrolizumab（1类推荐）PDL1 IHC50%EGFRT790M2A推荐EGFR-TKI药品耐药进展后Osimertinib（1类推荐）T790M突变阳性脚注：1.NCCN强烈推荐更为广泛分子检测,包含那些已经有针对性药品罕见突变,或者有可能进行临床研究。更为 广泛分子检测是改进NSCLC治疗关键原因。2.首先考虑活检样本，假如重复活检不可行，也可考虑血浆活检。假如血浆T790M突变检测阴性，可考虑反过来进行组织基因检测。3.假如活检T790M为阴性，考虑血液检测，假如血浆T790M突变检测阴性，考虑可反过来进行基于组织检测。NCCN NSCLC基因检测项目液态活检与你同行第26页27液体活检检测方法选择共识一：精准医学是一项系统工程，包含：发觉含有临床意义基因异常（包含可靶点抑制、预测和或预后标志物）；创造可靶向特异基因异常药品；寻找证实其特异有效性安全性证据应用于临床证实了证据可重复性。任何一项缺乏都不允许。共识二：液体活检检测对象包含：循环肿瘤细胞，血浆DNA，Exosome。共识三：检测已知、单个临床可药品抑制靶点，液体活检技术推荐ARMS法；检测已知、多个平行 临床可药品抑制靶点，液体活检技术推荐NGS方法。共识四：用于发觉未知基因，探索疗效监测、预后判断和发觉耐药机制等，液体活检技术提议使用NGS。共识五：液体活检包含CTC和ctDNA可能用于肺癌早期诊疗和复发监测，但当前仅限于科研探索。共识六：NGS用于临床研究，需平衡患者利益、伦理要求和科学发觉之间关系，以患者利益为至上。液态活检与你同行第27页THANK YOU FOR WATCHING液态活检与你同行第28页