生理学实验红细胞渗透脆性的测定专家讲座.pptx

试验四试验四红细胞渗透脆性测定红细胞渗透脆性测定生理学实验红细胞渗透脆性的测定第1页【试验目标】v1、本试验学习测定红细胞渗透脆性方法。、本试验学习测定红细胞渗透脆性方法。v2、加深对细胞外液渗透张力在维持红细胞正、加深对细胞外液渗透张力在维持红细胞正常形态与功效主要性方面了解。常形态与功效主要性方面了解。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第2页【试验原理】v在临床或生理试验使用各种溶液中，与血浆渗透压在临床或生理试验使用各种溶液中，与血浆渗透压相等称为相等称为等渗溶液等渗溶液（如（如0.85%NaCI溶液），高于或溶液），高于或低于血浆渗透压则对应地称为低于血浆渗透压则对应地称为高渗或低渗溶液高渗或低渗溶液。将。将正常红细胞悬浮于不一样浓度正常红细胞悬浮于不一样浓度NaCI溶液中即可看到：溶液中即可看到：在等渗溶液中红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在等渗溶液中红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双在渗透压递减一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加时成为球形；体积增加45%60%则细胞膜损伤而发生溶血，这时血红蛋则细胞膜损伤而发生溶血，这时血红蛋白逸出细胞外，称为白逸出细胞外，称为溶血溶血。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第3页【试验原理】v将红细胞悬浮于等渗将红细胞悬浮于等渗NaCl液中，其形态不变。若置液中，其形态不变。若置于低渗于低渗NaCl溶液中则发生膨胀破裂，此现象称为溶液中则发生膨胀破裂，此现象称为红红细胞渗透脆性细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液含有一定抵。但红细胞对低渗盐溶液含有一定抵抗力，其大小可用抗力，其大小可用NaCl溶液浓度高低来表示。将血溶液浓度高低来表示。将血液滴入不一样浓度低渗液滴入不一样浓度低渗NaCl溶液中，溶液中，开始出现溶血开始出现溶血现象现象NaCl溶液浓度为该血液红细胞最小抵抗力。溶液浓度为该血液红细胞最小抵抗力。出出现完全溶血现象时现完全溶血现象时NaCl溶液浓度为该红细胞最大抵溶液浓度为该红细胞最大抵抗力。抗力。前者代表红细胞最大脆性前者代表红细胞最大脆性(最小抵抗力最小抵抗力)，后，后者代表红细胞最小脆性者代表红细胞最小脆性(最大抵抗力最大抵抗力)。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第4页v不一样物质等渗溶液不一定都能使红细胞体积和形不一样物质等渗溶液不一定都能使红细胞体积和形态保持正常，能使悬浮于其中红细胞保持正常体积态保持正常，能使悬浮于其中红细胞保持正常体积和形状盐溶液，称为和形状盐溶液，称为等张溶液等张溶液。所谓。所谓“张力张力”实际实际是指溶液中不能透过细胞膜颗粒所造成渗透压。比是指溶液中不能透过细胞膜颗粒所造成渗透压。比如如NaCI不能自由透过细胞膜，所以不能自由透过细胞膜，所以0.85%NaCI既是既是等渗溶液，也是等张溶液；但如尿素，因为它能够等渗溶液，也是等张溶液；但如尿素，因为它能够自由经过细胞膜，使胞外成为低渗溶液从而发生溶自由经过细胞膜，使胞外成为低渗溶液从而发生溶血。血。1.9%尿素溶液即使与血浆等渗，但红细胞置入尿素溶液即使与血浆等渗，但红细胞置入其中后马上溶血，所以不是等张溶液。其中后马上溶血，所以不是等张溶液。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第5页【试验材料】【试验材料】v试验动物试验动物：动物种类不限动物种类不限。v试验器材试验器材：试管架、小试管、滴管，移液管：试管架、小试管、滴管，移液管。v药品与试剂药品与试剂：1%NaCl溶液、溶液、0.85%氯化钠溶氯化钠溶液、蒸馏水，液、蒸馏水，1.9%尿素溶液，尿素溶液，1%肝素。肝素。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第6页【试验方法】v1配制不一样浓度低渗配制不一样浓度低渗NaCl溶液溶液：取口径相同干：取口径相同干燥洁净小试管燥洁净小试管10支，分别编号排列在试管架上，配支，分别编号排列在试管架上，配制出制出10种不一样浓度种不一样浓度NaCl低渗溶液（低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.9%）。每个试管总量均为）。每个试管总量均为2.5ml或或4ml，视试管大小而定。视试管大小而定。v另取另取3支小试管，在三支试管上分别编号支小试管，在三支试管上分别编号11-13，分，分别加入别加入0.85%NaCl溶液、溶液、1.9%尿素和蒸溜水尿素和蒸溜水2.5ml或或4ml，与前面，与前面10支试管量一致。支试管量一致。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第7页v2制备抗凝血制备抗凝血：不一样动物采血方法各异，：不一样动物采血方法各异，但多采取末梢血。把血液放入含有肝素烧杯但多采取末梢血。把血液放入含有肝素烧杯内，混匀。内，混匀。1%肝素肝素1ml可抗可抗10ml血。血。v3.加抗凝血：加抗凝血：用滴管吸收抗凝血，依次向用滴管吸收抗凝血，依次向13支试管内各加支试管内各加1滴，轻轻颠倒混均，切忌用力滴，轻轻颠倒混均，切忌用力振荡。先观察振荡。先观察11、12、13管改变，其它管改变，其它10支支试管在室温下放置试管在室温下放置1小时。小时。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第8页v4观察结果观察结果血液溶血情况，其现象可分为以下几个：血液溶血情况，其现象可分为以下几个：(1)试管内液体完全变成透明红色，说明红细试管内液体完全变成透明红色，说明红细胞完全破裂，称为胞完全破裂，称为完全溶血完全溶血。(2)试管内液体下层为混浊红色，上层无色透试管内液体下层为混浊红色，上层无色透明，表示部分红细胞没有破坏，称为明，表示部分红细胞没有破坏，称为不完全不完全深血深血。(3)试管内液体下层为混浊红色，上层无色透试管内液体下层为混浊红色，上层无色透明，说明红细胞完全没有破坏。明，说明红细胞完全没有破坏。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第9页v4观察项目观察项目(1)观察不一样浓度低渗观察不一样浓度低渗NaCl混合液颜混合液颜色和透明度。色和透明度。(2)比较第比较第11、12、13管溶血情况并分管溶血情况并分析其原因。析其原因。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第10页【试验结果】生理学实验红细胞渗透脆性的测定第11页【注意事项】v1每支试管内血液滴入量应准确无误每支试管内血液滴入量应准确无误(只加一滴只加一滴)。v2确保每支试管确保每支试管NaCl溶液浓度准确、容量相等。溶液浓度准确、容量相等。v3试管必须清洁、干燥。试管必须清洁、干燥。v4混匀时，轻轻颠倒混匀时，轻轻颠倒1-2次，降低机械振动，防止次，降低机械振动，防止人为溶血人为溶血v5.观察结果时应以白色为背景。观察结果时应以白色为背景。生理学实验红细胞渗透脆性的测定第12页