ABO血型鉴定操作规程.doc
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1、 .ABO血型定型 编号:/J 04-2016操作规程 版号;2016-A版第0次修改1. 目的;为确保实验结果的准确,特别订本规程。2. 范围;适合进行ABO血型鉴定相关科室的全体工作人员。3. 职责;3.1科主任负责本规程的培训,考核及督促实施。3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录,为实验结果的准确性负责。3.3全科人员熟练掌握原理及操作。4.原理 根据红细胞表面有无A抗原和B抗原,将血分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验、通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型是用已知抗A和B分型血清来测定红细胞表面有无相应的A抗原或B抗原;反定型是用已知的A型红细胞和B型红
2、细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。5,试剂5.1抗-A、抗B分型血清。5.25%、B、O、试剂红细胞。6试剂的质量控制;6.1每个工作日在实验开始前,对试剂进行外观检查,包括;有效期、有无渗漏等,试剂红细胞无明显溶血。6.2每个工作日在实验开始前,对所有的抗-A、抗-B、试剂红细胞按血型试剂确认操作规程进行特异性验证。6.3将试剂的厂家、批号及检测结果记录到血型试剂质量控制记录中。7.工作程序:7.1正定型:取洁净小试管2支,分别标记“抗A”、“抗B”,分别滴加抗A、抗B试剂1滴于试管底部,再分别加入受检者2%5%红细胞1滴,混合。7
3、.2反定型:另取洁净小试管3支,分别标记“AC”、“BC”、“OC”,各加入受检者血清2滴于试管底部,再分别加入A、B和O型2%5%试剂红细胞1滴,混合。7.3以3400转/15秒(或1000转/1分钟)离心将试管轻轻摇动,仔细观察细胞扣有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集,也要注意凝集强度,这将有助于亚型等的发现。8.结果判定:凝集强度的判断依据红细胞凝集强度判读标准进行。血 型正定型反定型抗A抗BACBCOCA+-+-B-+-O-+-AB+-9正反定型不一致的原因;有技术问题或红细胞和血清本身问题,常见者有以下情况;分型血清效价太低,亲和力不强。红细胞悬液浓度过高或过低,抗原抗体比
4、例不适当(出现前带或后带现象),使反应不明显误判为阴性反应。受检者红细胞表面抗原位过少或抗原性减弱等。受检者血清蛋白紊乱,常引起红细胞呈缗钱状排列。受检者血清中减弱或缺乏应有的抗A或抗B.各种原因引起的红细胞溶血,误判为不凝集。由细菌污染或遗传因素引起,多凝集和全凝集,往往是正反定型不符的原因。血清中有ABO血型系统以外抗体,如(冷抗体)等,常干扰定型。观察细胞扣时手法不当,未发现弱凝集。如发现ABO正反定型不一致,首先要重复做实验一次(必须用试管法),严格执行操作规程,使用质量合格的试剂以及细心观察和解读实验结果,就可以解决问题,对一些疑难问题必须进一步鉴定。10 相关文件10.1 中国输血
5、技术操作规程10.2 临床输血技术更规范10.3 青海省医疗机构输血科(血库)标准化建设验收评审细则10.4 血型试剂确认操作规程11 记录11.1 血型试剂质量控制记录。11.2 血型检定及结果登记。2016.4.5Rh血型鉴定 编号:/J 04-2016操作规程 版号;2016-A版第0次修改1.目的;为确保实验结果的准确,特制订本规程。2.范围;适合进行Rh血型鉴定相关科室的全体工作人员。3.职责3.1科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。3.2科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录,为实施结果的准确性负责。3.3全科人员熟练掌握原理及操作。4.原理Rh血型系统主要有五种抗血清,即抗
6、D,抗C,抗c,抗E,抗e。用五种抗Rh分型血清来检查红细胞抗原。在临床输血中,一般只做D抗原的鉴定,凡被检红细胞和抗-D血清凝集着为Rh阳性,不凝集者为Rh阴性。5试剂,抗-D血清。6.试剂的质量控制:每个工作日在实验开始前,对试剂进行外观检查,包括:有效期、有无渗漏等;对所有的抗-D血清按血型试剂确认操作规程进行特异性验证。将试剂的厂家、批号及检测结果记录到血型试剂质量控制记录中。7.工作程序:7.1取洁净小试管1支标识“抗-D”,加抗-D试剂 1滴于试管底部,再加受检者2%5%红细胞悬液1滴,混合。7.2以3400转/15秒(或1000转/1分钟)离心,肉眼观察细胞扣,根据凝集情况判断结
7、果。8.1结果判断:凝集者为Rh(D)阳性,不凝集者再次检测,再次检测不凝集者为Rh(D)阴性。8.2凝集强度的判断依据血型试剂确认操作规程9.注意事项:9.1红细胞悬液浓度不能过高或过低,抗原抗体比列不当会出现前或后带现象,出现假阴性结果。9.2试剂或被检血清和红细胞的比例要适当,否则会漏检阳性结果。9.3 观察细胞扣时手法要得当,防止用力混匀而漏检弱阳性。10. 相关文件10.1 中国输血技术操作规程10.2 临床输血技术规范10.3 青海省医疗机构输血科(血库)标准化建设验收评审细则11. 血型检定及结果登记。 不规则抗体筛选实验 编号:/J 04-2016操作规程 版号;2016-A版
8、第0次修改 1. 目的:为确保实验结果的准确,特制订本规程。2. 范围:适合输血科(血库)全体工作人员。3. 职责3.1 科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。3.2 科室工作人员熟练掌握原理及操作。4.原理红细胞血型抗体除了抗A,抗B外,可能含有潜在的其他不规则抗体,而导致输血反应等问题。血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。抗体主要分为IgM和IgG抗体,IgM抗体长度大于35.7nm,在盐水介质中能直接相连相应的红细胞,使之发生肉眼可见的凝集反应,IgG抗体长度大于24nm,在盐水介质中不凝集,而只能致敏相应抗原的红细胞,所以用3人份基本含盖常见抗原的O型红细胞,在
9、不同的介质中检测,(盐水介质、凝聚胺介质或抗人球蛋白介质等)只要血清中存在常见的IgM和IgG不规则抗体,在不同的介质中就会和筛选细胞发生凝集。5.仪器、材料与试剂5.1 凝聚胺试剂5.2 筛选细胞6. 试剂的质量控制:每个工作日在实验开始前,对筛选细胞的外观质量进行检查,无明显溶血,在有效期内;同时记录试剂厂家和批号。7. 工作程序及结果判断:7.1 取试管3支,分别标记“1”、“2”、“3”、各管加患者血清2滴,分别加入1、2、3号筛选细胞各1滴,混匀。以3400转离心15秒或(1000转离心1分钟)。7.2 观察结果,3号管中有1管以上阳性者,为抗体筛选实验阳性,说明被检血清中存在IgM
10、类抗体,要送血站进行抗体鉴定。7.3 3管均为阴性,表示在盐水介质中抗体筛选阴性,说明被检血清中不存在1gM类抗体。再将3管继续做聚凝胺实验。7.4在聚凝按介质中,3管中有1管以上阳性者,为抗体筛选试验阳性,说明被检血清中存在1gG类抗体,要送血站进行抗体鉴定,7.5 3管均为阴性,表示在2种介质中抗体筛选均为阴性,说明被检血清中不存在不规则抗体。8 相关文件。9.1中国输血技术操作规范9.2临床输血技术规范9.3青海省医疗机构输血科(血库)标准化建设验收评审细则记9记录10.1交叉配血实验记录报告单起草人; 交叉配血实验 编号:/J 04-2016操作规程 版号;2016-A版第0次修改1。
11、目的;为确保实验结果的准确,保证安全输血,特制订本规程。2. 范围:适合输血科(血库)全体工作人员。3. 职责:3.1 科主任负责本规程的培训、考核及督促实施。3.2 科室工作人员按文件进行操作并建立相关记录,为实验结果的准确性负责。3.3 科室工作人员熟练掌握原理及操作。4 原理4.1 交叉配血实验分“主侧”即病人血清与献血者红细胞相容性实验;“次侧”即献血者血清与病人红细胞的相容性实验。分别用盐水介质法检测IgM类不规则血型抗体引起的交叉配血实验不合,用凝聚胺介质法检测IgG类不规则血型抗体引起的交叉配血实验不合。4.2 凝聚胺介质法中低离子介质可以促进红细胞和相应抗体的反应,在加入凝聚胺
12、后,带正电荷的凝聚胺可以中和红细胞表面的负电荷,促进红细胞之间互相接近,引起的红细胞产生非特异性的凝集反应。如果是由特异性抗原抗体反应引起的凝集,则会在加入再悬液时散开。5.材料与试剂聚凝按试剂盒。5.2抗A.抗B分型血清。5.3 2-5%A.B.O试剂红细胞。5.4 抗-D血清。6.试剂的质量控制;聚凝胺实验过程中,加入重悬液之前如无凝集时,将阳性对照血清代替待检血清按7.3操作进行质量实验,结果出现凝集,证实实试剂有效。7工作程序;7.1查看输血申请单,核对申请单与血样管上姓名。科室,床号,住院号,血型等内容无误,方可进行配血。7.2依据ABO血型定型操作规程,Rh血型定型操作规程进行献血
13、者的受血者的ABO血型(正反定型)和Rh血型的复查。7.3盐水介质配血7.3.1取试管2支,分别标记“主侧”、“次侧”,“主测”管加患者血清2滴,献血者2-5%红细胞悬液1滴;“次侧”管加献血者血清2滴,患者2-5%红细胞悬液1滴,以3400转/离心15秒或(1500转/离心1分钟),以肉眼观察细胞扣,有无凝集或溶血现象。7.3.2 主次管凝集或溶血的要查找原因。7.3.3 主侧和次侧均无凝集及溶血现象,为盐水介质配血结果阴性,再将原主次管继续进行凝聚胺介质法配血。7.4 凝聚胺介质配血7.41 各管加LIM液0.7ml(14滴),混匀,加凝聚胺试剂2滴,混匀后3400rpm离心15秒,弃取上
14、清液,不要沥干,轻摇观察由凝聚胺引起的红细胞凝集。7.42 有凝集时各加入2滴垂悬液轻摇看结果:由凝聚胺引起的非特异性红细胞凝集应在1分钟内完全散开,若是由免疫性抗体引起的凝集,反应则不会完全散开。7.4.3 凝聚胺介质配血阳性者,疑似由IgG抗体造成,需进一步抗体鉴定。8注意事项8.1若红细胞中含有较多血清或血浆则需用盐水洗涤细胞一次。8.2若加凝聚按试剂后未见红细胞凝集需重做,可能是患者使用肝素类药物中和聚凝胺所致,需多加1滴poiybrene(凝聚胺)试剂以中和肝素。8.3观察盐水介质配血结果后,在阴性情况下再进行凝聚胺介质配血,如盐水介质配血结果为阳性,则勿需进行凝聚胺配血。8.4患者
15、血清中纤维蛋白没完全析出时,要放置到37水浴箱中15分钟,然后再离心。以防未完全析出的纤维蛋白影响判断结果。9 结果判断:凝集强度的判断依据血型试剂确认操作规程10. 相关文件10.1 中国输血技术操作规程10.2 临床输血技术范围10.3 青海省医疗机构输血科(血库)标准化建设验收评审细则10.4 台湾贝索公司凝聚胺介质试剂盒说明书11 记录11.1 交叉配血实验记录报告单血液入库、管理 编号:/J 04-2016操作规程 版号;2016-A版第0次修改一、血液领取、接收、入库、核对、账目登记(一) 医院临床用血均须由所在行政区域卫生行政部门指定的血站提供,不得自行采集异体血液。(二) 到血
16、站取血时,医务人员须持单位盖章的取血介绍信(须注明血型、血液品种、数量、规格及取血人姓名)前往、专车运送、专人保管、用冷链设施贮存。(三) 输血科(血库)接到血站血液入库前要认真核对验收,仔细检查每袋血液是否有溶血、重度乳糜、破损、污染等情况。核对项目包括:规格、数量、运输条件、物理外观、血袋密闭及包装是否合格、标签填写是否清楚齐全(供血机构名称及其许可证号、献血编号或条形码、血型、血液品种、容量、采血日期和时间或制备日期和时间,失效日期及时间、储存条件)。(四) 记录交接时间和运输温度或状态,红细胞210、血小板2024,血浆和冷沉淀凝血因子观察血袋的外观保持冰冻状态即符合要求。(五) 对符
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