血栓和止血检验的基本方法专家讲座.pptx
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1、第十三章第十三章 血栓与止血检验基本方法血栓与止血检验基本方法P367P367血栓和止血检验的基本方法第1页教学要求教学要求 1.1.掌握掌握PTPT时间、时间、APTT APTT、3P3P试验、试验、FDPsFDPs、血浆、血浆D-D-二聚二聚 体等试验检测原理及临床意义、正常吸附血体等试验检测原理及临床意义、正常吸附血 浆、正常血清所含凝血因子、过敏性紫癜、浆、正常血清所含凝血因子、过敏性紫癜、ITPITP 、DICDIC、EvenEven综合征概念及临床表现,过敏性紫综合征概念及临床表现,过敏性紫 癜主要过敏原、癜主要过敏原、ITPITP诊疗标准,血友病诊疗和诊疗标准,血友病诊疗和 分型
2、。分型。2.2.熟悉各型血友病及血管性血友病因子检测意义、熟悉各型血友病及血管性血友病因子检测意义、血栓与止血筛选试验应用,过敏性紫癜、血栓与止血筛选试验应用,过敏性紫癜、ITPITP、血友病、血友病、DICDIC、EvenEven综合征试验室检验。综合征试验室检验。3.3.了解血小板检测、抗凝血酶检测、血浆纤溶活性了解血小板检测、抗凝血酶检测、血浆纤溶活性 检测和血栓前状态检测意义、其它凝血障碍性检测和血栓前状态检测意义、其它凝血障碍性 疾病检验。疾病检验。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第2页血液检验血液检验第一节第一节 血栓与止血筛选试验血栓与止血筛选试验一、一期止血缺点筛选试验
3、一、一期止血缺点筛选试验 临床上常作试验:主要有临床上常作试验:主要有出血时间出血时间(bleeding bleeding timetime,BTBT)、)、血小板计数血小板计数(platelet countplatelet count,PLTPLT)和)和血块收缩试验血块收缩试验(clot retraction testclot retraction test,CRTCRT)。)。血栓和止血检验的基本方法第3页血液检验血液检验二、二期止血缺点筛选试验二、二期止血缺点筛选试验 主要包括凝血因子和抗凝血物质异常,用于主要包括凝血因子和抗凝血物质异常,用于凝血与抗凝血功效筛查试验较多,惯用有:凝血
4、与抗凝血功效筛查试验较多,惯用有:凝血凝血酶原时间酶原时间(prothrombin timeprothrombin time,PTPT)、)、活化部分活化部分凝血活酶时间凝血活酶时间(activated partial activated partial thromboplastin timethromboplastin time,APTTAPTT)、)、试管法凝血时间试管法凝血时间(clotting timeclotting time,CTCT)。)。血栓和止血检验的基本方法第4页(一一)血浆凝血酶原时间测定(血浆凝血酶原时间测定(PTPT)1.1.原理原理 在受检血浆中加入足量组织凝血活酶
5、在受检血浆中加入足量组织凝血活酶(即(即TFTF)浸出液和和适量)浸出液和和适量CaCa2+2+离子后,血离子后,血浆凝固所需时间称为血浆浆凝固所需时间称为血浆PTPT。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第5页2.2.参考值参考值 (1)(1)平均为平均为12s1s,12s1s,男性:男性:11s11s13.7s13.7s;女性:女性:11s11s14.3s14.3s,超出对照,超出对照3s3s以下为异以下为异 常。常。(2)PT (2)PT时间比值(时间比值(PTRPTR)=被检血浆被检血浆PTPT(s s)/正正 常参比血浆常参比血浆PTPT(s s),宜用多份正常血浆),宜用多份正
6、常血浆PTPT 几何均数参考值为几何均数参考值为1.000.151.000.15 (3)(3)国际标准化比值国际标准化比值(INR)=PTR(INR)=PTRSS 参考值因国际敏感度指数参考值因国际敏感度指数SS而异。而异。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第6页 INRINR:需需先先求求得得所所用用组组织织凝凝血血活活酶酶国国际际敏敏感感度度指指数数SS,是是所所用用组组织织凝凝血血活活酶酶与与已已知知参参比比品品相相比比较较一一个个参参数数。是是用用多多份份凝凝血血因因子子水水平平不不一一样样血血浆浆(包包含含正正常常人人和和口口服服抗抗凝凝剂剂患患者者血血浆浆),用用参参比比品品
7、测测得得它它们们logPTlogPT,再再用用待待标标定定组组织织凝凝血血活活酶酶测测得得它它们们logPTlogPT,以以前前者者为为纵纵坐坐标标,后后者者为为横横坐坐标标作作图图,经经回回归归求求得得直直线线斜斜率率。即即待待标标定定组组织织凝凝血血活活酶酶S S=已已知知S S 斜斜率率。SS值值越越低低,试试剂剂对对相相关关凝凝血血因因子子降降低低敏敏感感度度越越高高。再再按按下下式式求求得得INRINR:INR=PTRINR=PTRSS血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第7页3.3.临床意义:是外源性凝血路径筛选试验。临床意义:是外源性凝血路径筛选试验。(1)PT(1)PT延长
8、延长 VitkVitk缺乏:缺乏:、统称为依赖统称为依赖VitkVitk凝凝 血因子。血因子。VitkVitk、因子、因子 PT PT。抗凝治疗,香豆素类抗凝药品与抗凝治疗,香豆素类抗凝药品与VitkVitk化学结化学结 构相同,竞争性拮抗,使构相同,竞争性拮抗,使PTPT。肝病:肝脏是合成除组织因子(肝病:肝脏是合成除组织因子()、钙()、钙()及及因子外其它因子主要场所,肝受损因子外其它因子主要场所,肝受损凝凝 血因子合成血因子合成PTPT。先天性凝血因子缺乏症:先天性凝血因子缺乏症:、。抗凝物质增多。抗凝物质增多。(2)PT(2)PT缩短缩短:常见于血栓前状态和血栓性疾病。常见于血栓前状
9、态和血栓性疾病。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第8页(二二)活化部分凝血活酶时间测定活化部分凝血活酶时间测定 1.1.原理:原理:3737条件下,以白陶土激活因子条件下,以白陶土激活因子和和 ,以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板3 3 因子,在因子,在CaCa2+2+参加下,观察贫血小板血浆凝固参加下,观察贫血小板血浆凝固 所需时间,即为活化部分凝血活酶时间所需时间,即为活化部分凝血活酶时间 (APTTAPTT)。)。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第9页2.2.参考值参考值 男:男:37s3.3s37s3.3s 女:女:37.5s2.8s
10、37.5s2.8s 超出正常对照超出正常对照10s10s以上为异常以上为异常。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第10页3.3.临床意义:是内源性凝血系统敏感而简便筛临床意义:是内源性凝血系统敏感而简便筛 选试验。选试验。(1)APTT(1)APTT时间延长:时间延长:内源性凝血路径因子缺乏:内源性凝血路径因子缺乏:、。外源性凝血路径因子缺乏:外源性凝血路径因子缺乏:、。血中抗凝物质增多。血中抗凝物质增多。(2)APTT(2)APTT时间缩短:时间缩短:可见于高凝状态及血栓形成可见于高凝状态及血栓形成 性疾病。性疾病。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第11页三、纤溶活性筛查试验三
11、、纤溶活性筛查试验 血浆纤溶活性增强筛查,普通选取能直接血浆纤溶活性增强筛查,普通选取能直接或间接检测出血浆纤溶酶降解纤维蛋白(原)或间接检测出血浆纤溶酶降解纤维蛋白(原)降解产物(降解产物(FDPsFDPs)试验,临床惯用有:凝血)试验,临床惯用有:凝血酶时间(酶时间(thrombin timethrombin time,TTTT)、血浆鱼精蛋)、血浆鱼精蛋白副凝固试验(白副凝固试验(plasma protamine plasma protamine pracoagulation testpracoagulation test,3P test3P test)。)。血液检验血液检验血栓和止血检
12、验的基本方法第12页(一一)凝血酶时间测定凝血酶时间测定1.1.原理:受检血浆中加入原理:受检血浆中加入“标准化标准化”凝血酶溶液后、凝血酶溶液后、血浆凝固所需要时间,即为凝血酶时间血浆凝固所需要时间,即为凝血酶时间。2.2.参考值:参考值:16s16s18s18s。超出对照。超出对照3s3s以上为异常。以上为异常。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第13页 3.3.临床意义临床意义 (1)TT(1)TT延长:延长:肝素及肝素类抗凝物增多。肝素及肝素类抗凝物增多。FgDP(FbDP)DIC(FgDP(FbDP)DIC(消耗消耗Fb Fb 或或Fg)Fg)。先天性纤维蛋白先天性纤维蛋白(原
13、原)异常或缺乏症。异常或缺乏症。(2)TT (2)TT缩短缩短:极罕见极罕见,主要见于一些异常蛋主要见于一些异常蛋 白血症如巨球蛋白血症。白血症如巨球蛋白血症。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第14页(二二)可溶性纤维蛋白单体试验:可溶性纤维蛋白单体试验:3P3P试验试验1 1原理:血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验(原理:血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验(plasma plasma protamine paracoagulation test,3P testprotamine paracoagulation test,3P test),),是在待测血浆中加入硫酸鱼精蛋白是在待测血浆中加入硫酸鱼精蛋
14、白,可使可溶性纤维可使可溶性纤维蛋白单体蛋白单体(FM)(FM)与与FDP(FDP(主要是主要是X X片段片段)形成可溶性复合形成可溶性复合物解离物解离,游离游离FMFM之间自行聚合呈肉眼可见纤维絮状或之间自行聚合呈肉眼可见纤维絮状或胶冻状沉淀。胶冻状沉淀。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第15页2.2.参考值:阴性参考值:阴性3.3.临床意义临床意义(1)(1)原发性纤溶时:阴性。原发性纤溶时:阴性。(2)(2)继发性纤溶时早期:阳性。继发性纤溶时早期:阳性。(3)DIC(3)DIC晚期因晚期因FgDPFgDP或或FbDPFbDP(X X、Y Y)被降解为低分)被降解为低分子量小碎片
15、(子量小碎片(D D、E E):阴性。):阴性。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第16页(三三)血浆血浆D-D-二聚体检测二聚体检测 乳胶颗粒浊度分析法乳胶颗粒浊度分析法 1.1.原理:受检血浆中加入标有原理:受检血浆中加入标有D-D-二聚体单抗胶乳二聚体单抗胶乳 颗粒悬液,假如血浆中颗粒悬液,假如血浆中D-D-二聚体含高于二聚体含高于0.5mg/L0.5mg/L 时即可与胶乳颗粒上抗体结合,发生胶乳颗时即可与胶乳颗粒上抗体结合,发生胶乳颗 粒凝集。粒凝集。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第17页2 2血浆血浆D-D-二聚体二聚体 是交联纤维蛋白降解产物之一,为继发是交联纤维蛋
16、白降解产物之一,为继发纤溶特有代谢物。纤溶特有代谢物。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第18页纤维蛋白(原)降解过程及产物纤维蛋白(原)降解过程及产物 凝血酶凝血酶 XIIIa XIIIa纤维蛋白(原)纤维蛋白(原)可溶性纤维蛋白可溶性纤维蛋白交联纤维蛋白交联纤维蛋白FPAFPA、FPB FPB (AA1-6 1-6)(B(B1-141-14)B1-42 B1-42 B15-42B15-42AA极从属物多聚体极从属物多聚体 A A极从属物极从属物AA极从属物极从属物D-D-二聚体二聚体(A A、B B、C C、H H)(A A、B B、C C、H H)DD/EDD/E复合物复合物 X
17、X、Y Y、D D、E EXX、YY、D D、EEXX、YY、D D、EE纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶纤溶酶血栓和止血检验的基本方法第19页3 3意义意义 参考值阴性,在继发纤溶时(参考值阴性,在继发纤溶时(DICDIC)阳性;)阳性;原发纤溶时阴性。常作为判别原发性纤溶与继发原发纤溶时阴性。常作为判别原发性纤溶与继发性纤溶可靠指标,也是溶栓治疗有效观察指标。性纤溶可靠指标,也是溶栓治疗有效观察指标。D-D-二聚体阳性或增高是诊疗二聚体阳性或增高是诊疗DICDIC主要依据之一。主要依据之一。血栓和止血检验的基本方法第20页第二节第二节 血管壁血管壁(内皮内皮)检验检验一、血管性血友病因子检测
18、一、血管性血友病因子检测1.1.原理:血浆中血管性血友病因子原理:血浆中血管性血友病因子(vWF)(vWF)是一个多聚是一个多聚体大分子蛋白体大分子蛋白,血浆浓度为血浆浓度为7 71010 g/Lg/L。vWFvWF含有含有与胶原、肝素、与胶原、肝素、FF轻链、轻链、GPb/b-aGPb/b-a、瑞斯、瑞斯托霉素等结合多个功效区。所以托霉素等结合多个功效区。所以vWFvWF分析包含含量、分析包含含量、活性、功效、多聚体等多功项检测。活性、功效、多聚体等多功项检测。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第21页2 2参考值:检测方法同其值也不一样,普通大于参考值:检测方法同其值也不一样,普通大
19、于 50%50%。3.3.临床意义:临床意义:vWFvWF:AgAg检测是临床惯用较为敏感和检测是临床惯用较为敏感和实用试验之一,是研究和诊疗实用试验之一,是研究和诊疗vWD vWD 主要指标。主要指标。(1)(1)减低:减低:见于血管性血友病(见于血管性血友病(vonvonillebrand illebrand disease.vWDdisease.vWD),是),是vWDvWD诊疗及分型主要指标。诊疗及分型主要指标。(2)(2)增高:增高:vWFvWF是一个急性反应蛋白,在很多情况下是一个急性反应蛋白,在很多情况下都可增高,常见于血栓性疾病,如心肌梗死、心都可增高,常见于血栓性疾病,如心肌
20、梗死、心绞痛、脑血管病变、肾小球疾病、糖尿病、妊娠绞痛、脑血管病变、肾小球疾病、糖尿病、妊娠高血压综合征、大手术后等。高血压综合征、大手术后等。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第22页第三节第三节 凝血因子检测凝血因子检测一、血浆纤维蛋白原一、血浆纤维蛋白原 1.1.原理原理:Clauss:Clauss法以凝血酶作用受检血浆中法以凝血酶作用受检血浆中 纤维蛋白原纤维蛋白原(Fg)(Fg),使其形成纤维蛋白而使,使其形成纤维蛋白而使 血浆凝固血浆凝固,测定凝固时间。纤维蛋白量测定凝固时间。纤维蛋白量 与凝固时间成负相关,检测结果与参比血与凝固时间成负相关,检测结果与参比血 浆制成标准曲线
21、对比,可得出纤维蛋白浆制成标准曲线对比,可得出纤维蛋白 原含量。原含量。2.2.正常参考值:正常参考值:24g/L24g/L。血液检验血液检验血栓和止血检验的基本方法第23页 3.3.临床意义临床意义 (1)(1)增高增高 机体感染;毒血症、肝炎、轻型肝炎、胆囊炎及机体感染;毒血症、肝炎、轻型肝炎、胆囊炎及 长久局部炎症长久局部炎症 无菌性炎症:糖尿病、肾病综合症、尿毒症、风无菌性炎症:糖尿病、肾病综合症、尿毒症、风 湿热、恶性肿瘤、风湿性关节炎等。湿热、恶性肿瘤、风湿性关节炎等。糖尿病酸中毒。糖尿病酸中毒。心血管疾病:动脉硬化症、脑血栓、血栓静脉炎、心血管疾病:动脉硬化症、脑血栓、血栓静脉炎
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