血液标本采集和血涂片制备专家讲座.pptx

第一章第一章 血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和血涂片制备第1页血液标本采集和血涂片制备第2页 在自动化检验仪器应在自动化检验仪器应用普遍当代临床试验室中，用普遍当代临床试验室中，基础性血液标本采集和处基础性血液标本采集和处理是检测前质量确保主要理是检测前质量确保主要步骤。步骤。正确采集血液标本是取得准确、可靠检验正确采集血液标本是取得准确、可靠检验结果关键。结果关键。第一节血液标本采集第一节血液标本采集血液标本采集和血涂片制备第3页一、血液标本类型一、血液标本类型血液标本采集和血涂片制备第4页 二、血液标本采集方法二、血液标本采集方法 血液标本采集方法按采集部位可分为皮肤采血血液标本采集方法按采集部位可分为皮肤采血法、静脉采血法和动脉采血法。法、静脉采血法和动脉采血法。（一）皮肤采血法（一）皮肤采血法 主要用于需要微量血液检验项目和婴幼儿血常主要用于需要微量血液检验项目和婴幼儿血常规检验。皮肤采血法所取得血液标本是微动脉血、规检验。皮肤采血法所取得血液标本是微动脉血、微静脉血和毛细血管血混合末梢全血。微静脉血和毛细血管血混合末梢全血。血液标本采集和血涂片制备第5页 1采血针皮肤采血法采血针皮肤采血法 （1）器材准备）器材准备 （2）部位选择：采血针皮肤采血法部位与评价见）部位选择：采血针皮肤采血法部位与评价见表表1-1。血液标本采集和血涂片制备第6页（3）采血方法）采血方法：见表：见表1-1-1。血液标本采集和血涂片制备第7页（4）注意事项：见表）注意事项：见表1-1-0。血液标本采集和血涂片制备第8页 2激光皮肤采血法激光皮肤采血法 激光皮肤采血法属于非接激光皮肤采血法属于非接触式采血法。该方法含有感染机会少、痛感轻和工作触式采血法。该方法含有感染机会少、痛感轻和工作强度低等优点。强度低等优点。血液标本采集和血涂片制备第9页血液标本采集和血涂片制备第10页 （二）静脉采血法（二）静脉采血法 静脉采血法是临床广泛应用采血方法，所采静脉采血法是临床广泛应用采血方法，所采集静脉血能准确反应全身血液真实情况，因其不集静脉血能准确反应全身血液真实情况，因其不易受气温和末梢循环改变影响，而更含有代表性。易受气温和末梢循环改变影响，而更含有代表性。静脉采血法依据采血方式可分为普通采血法静脉采血法依据采血方式可分为普通采血法和负压采血法。和负压采血法。血液标本采集和血涂片制备第11页 1普通采血法普通采血法，即传统静脉采血普通采血法普通采血法，即传统静脉采血方法。方法。血液标本采集和血涂片制备第12页血液标本采集和血涂片制备第13页血液标本采集和血涂片制备第14页 2负压采血法负压采血法又称负压采血法负压采血法又称为真空采血法，含有计量准确、传送为真空采血法，含有计量准确、传送方便、封闭无尘、标识醒目、刻度清方便、封闭无尘、标识醒目、刻度清楚、轻易保留、一次进针多管采血等楚、轻易保留、一次进针多管采血等优点。优点。血液标本采集和血涂片制备第15页 （1）主要器材：负压采血系统由双向采）主要器材：负压采血系统由双向采血针、采血管组成（图血针、采血管组成（图1-1）。负压采血管种）。负压采血管种类和用途见表类和用途见表1-2。（2）静脉）静脉选择和消毒：选择和消毒：与普通静脉采与普通静脉采血法相同。血法相同。图图1-1 1-1 负压采血系统负压采血系统血液标本采集和血涂片制备第16页血液标本采集和血涂片制备第17页血液标本采集和血涂片制备第18页血液标本采集和血涂片制备第19页血液标本采集和血涂片制备第20页图图1-2 1-2 多管血液标本采集次序多管血液标本采集次序 血液标本采集和血涂片制备第21页 （三）动脉采血法（三）动脉采血法 动脉采血法步骤与方法、注意事项见动脉采血法步骤与方法、注意事项见表表1-2-4、表、表1-2-5。血液标本采集和血涂片制备第22页血液标本采集和血涂片制备第23页血液标本采集和血涂片制备第24页三、血液标本处理、运输与保留三、血液标本处理、运输与保留血液标本采集和血涂片制备第25页 （一）血液标本检测前预处理（一）血液标本检测前预处理 1分离血清或血浆分离血清或血浆 2分离细胞分离细胞 3添加剂选择添加剂选择 为了快速取得血清有时还要使用促凝剂和分离胶为了快速取得血清有时还要使用促凝剂和分离胶等。惯用添加剂用途和特点见表等。惯用添加剂用途和特点见表1-3。血液标本采集和血涂片制备第26页血液标本采集和血涂片制备第27页 （二）血液标本运输（二）血液标本运输 血液标本运输可采取人工运输、轨血液标本运输可采取人工运输、轨道传送或气压管道运输等，不论采取哪道传送或气压管道运输等，不论采取哪种运输方式，都应该注意以下种运输方式，都应该注意以下3个标准。个标准。血液标本采集和血涂片制备第28页血液标本采集和血涂片制备第29页 试验室要制订标本接收标准文件。试验室要制订标本接收标准文件。因不一样检验项目对标本要求不一样，因不一样检验项目对标本要求不一样，还要制订拒收标准。因还要制订拒收标准。因“让步让步”而接收而接收不合格标本，其检验汇报单上应注明标不合格标本，其检验汇报单上应注明标本存在问题，在解释结果时必须尤其说本存在问题，在解释结果时必须尤其说明。明。血液标本采集和血涂片制备第30页血液标本采集和血涂片制备第31页 需要注意是，标本拒收不但造成检需要注意是，标本拒收不但造成检验费用增高和时间浪费，还可能延误诊验费用增高和时间浪费，还可能延误诊治甚至危害患者。所以，包括血液标本治甚至危害患者。所以，包括血液标本采集全部工作人员，都必须在标本采集、采集全部工作人员，都必须在标本采集、转运和处理各个步骤进行全方面而规范转运和处理各个步骤进行全方面而规范培训。培训。血液标本采集和血涂片制备第32页 （四）血液标本保留（四）血液标本保留 血液标本保留应该在要求时间内、血液标本保留应该在要求时间内、确保标本特征稳定条件下，按要求分确保标本特征稳定条件下，按要求分为室温保留、冷藏保留、冷冻保留为室温保留、冷藏保留、冷冻保留（表（表1-3-3）。）。血液标本采集和血涂片制备第33页血液标本采集和血涂片制备第34页 （五）检测后血液标本处理（五）检测后血液标本处理 依据依据试验室生物安全通用要求试验室生物安全通用要求要要求：求：将操作、搜集、运输及处理废弃物将操作、搜集、运输及处理废弃物危险减至最小。危险减至最小。将其对环境有害作用减至最小。将其对环境有害作用减至最小。血液标本采集和血涂片制备第35页第二节血液标本采集质量确保第二节血液标本采集质量确保 标本采集是检测前质量管理主要内容，检测标本采集是检测前质量管理主要内容，检测前大部分工作是由患者、医生、护士、运输人员前大部分工作是由患者、医生、护士、运输人员及检验人员在试验室以外空间和进入检验过程前及检验人员在试验室以外空间和进入检验过程前完成，临床试验室难以监控这一过程中每个步骤。完成，临床试验室难以监控这一过程中每个步骤。血液标本采集和血涂片制备第36页 一、血液标本采集环境要求与生物安全一、血液标本采集环境要求与生物安全 （一）环境要求（一）环境要求 应该人性化设置，空间宽大，光线明亮，应该人性化设置，空间宽大，光线明亮，通风良好，血液标本采集台面高低和宽度适通风良好，血液标本采集台面高低和宽度适宜，座位舒适。宜，座位舒适。（二）生物安全（二）生物安全 1预防交叉感染预防交叉感染 2环境消毒环境消毒 血液标本采集和血涂片制备第37页 二、血液标本采集过程要求二、血液标本采集过程要求 （一）检验申请单（一）检验申请单 检验申请单或电子申请表中应包含患者检验申请单或电子申请表中应包含患者最基本信息，以识别患者和经授权申请者，最基本信息，以识别患者和经授权申请者，同时应提供相关临床信息。相关临床信息最同时应提供相关临床信息。相关临床信息最少包含姓名、性别、年纪，以用于解读检验少包含姓名、性别、年纪，以用于解读检验结果。结果。血液标本采集和血涂片制备第38页 （二）标本采集和处理详细要求（二）标本采集和处理详细要求 试验室应向负责采集标本人员提供标本采集和处理试验室应向负责采集标本人员提供标本采集和处理详细要求（表详细要求（表1-4）。）。血液标本采集和血涂片制备第39页 （三）标本信息完整性与接收（三）标本信息完整性与接收 血液标本可经过检验申请单溯源到特血液标本可经过检验申请单溯源到特定个体，试验室不应接收或处理缺乏标识定个体，试验室不应接收或处理缺乏标识检验申请单和标本（表检验申请单和标本（表1-4-1）。）。血液标本采集和血涂片制备第40页血液标本采集和血涂片制备第41页 三、血液标本采集及检测结果影响三、血液标本采集及检测结果影响原因原因 （一）饮食和生理状态（一）饮食和生理状态 患者饮食和生理状态对检验结果影患者饮食和生理状态对检验结果影响见表响见表1-5。血液标本采集和血涂片制备第42页血液标本采集和血涂片制备第43页 （二）药品（二）药品 药品干扰检验结果主要有药品干扰检验结果主要有4条路径：条路径：影响待测成份物理性质。影响待测成份物理性质。参加检验过程化学反应。参加检验过程化学反应。影响机体组织器官生理功效和（或）细影响机体组织器官生理功效和（或）细胞活动中物质代谢。胞活动中物质代谢。对机体器官药理活性和毒性作用。对机体器官药理活性和毒性作用。血液标本采集和血涂片制备第44页（三）采血操作（三）采血操作1采血时间采血时间2采血部位采血部位3采血时体位采血时体位4压脉带使用压脉带使用（四）其它（四）其它1输液。输液。2溶血（表溶血（表1-6）3一些抗凝剂对标本影响一些抗凝剂对标本影响4低温保留对标本影响低温保留对标本影响 血液标本采集和血涂片制备第45页*假设HCT为0.50血液标本采集和血涂片制备第46页第三节第三节 血涂片制备与染色血涂片制备与染色 外周血涂片检验是最有益血液系统疾病检验外周血涂片检验是最有益血液系统疾病检验伎俩，能为临床提供大量信息。伎俩，能为临床提供大量信息。所以，血涂片制备和染色质量直接影响血细所以，血涂片制备和染色质量直接影响血细胞形态检验结果。胞形态检验结果。一张合格血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、一张合格血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定空隙，边体、尾分明，分布均匀，两侧留有一定空隙，边缘整齐。缘整齐。血液标本采集和血涂片制备第47页 一、血涂片制备一、血涂片制备 （一）载玻片要求（一）载玻片要求 制备血涂片使用载玻片要有很好清洁度。制备血涂片使用载玻片要有很好清洁度。新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或新载玻片常有游离碱质，应用铬酸清洗液或10%盐酸浸泡盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。，然后再彻底清洗。已用过载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤剂已用过载玻片可在含有适量肥皂水或合成洗涤剂水中煮沸水中煮沸20min，用热水将肥皂和血膜洗去，再用自，用热水将肥皂和血膜洗去，再用自来水重复冲洗，擦干或烤干后备用。来水重复冲洗，擦干或烤干后备用。血液标本采集和血涂片制备第48页 （二）血涂片制备方法（二）血涂片制备方法 1手工推片法手工推片法 （1）薄血膜推片法（表）薄血膜推片法（表1-4-2）：临床）：临床惯用方法，主要用于观察血细胞形态及仪惯用方法，主要用于观察血细胞形态及仪器法检测结果异常复查。器法检测结果异常复查。血液标本采集和血涂片制备第49页血液标本采集和血涂片制备第50页 （2）厚血膜涂片法：取新鲜血液）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载滴于载玻片中央，用推片一角将血滴由内向外旋转涂玻片中央，用推片一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm圆形血膜，圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即可染色并用显微镜检验。可染色并用显微镜检验。本方法尤其适合检验疟原虫、微丝蚴等。本方法尤其适合检验疟原虫、微丝蚴等。血液标本采集和血涂片制备第51页 2自动涂片法自动涂片法 当前有许多型号自动当前有许多型号自动血液分析仪，配置有血涂片仪和染色仪，血液分析仪，配置有血涂片仪和染色仪，能够按照检验人员指令执行自动送片、取能够按照检验人员指令执行自动送片、取血、推片、标识和染色等任务。血、推片、标识和染色等任务。【方法学评价方法学评价】良好血涂片是血细胞良好血涂片是血细胞形态学检验前提。血涂片制备方法学评价形态学检验前提。血涂片制备方法学评价见表见表1-7。血液标本采集和血涂片制备第52页血液标本采集和血涂片制备第53页 【质量确保质量确保】薄血膜推片法质量薄血膜推片法质量确保项目与评价见表确保项目与评价见表1-8，血涂片质量，血涂片质量问题及可能原因见表问题及可能原因见表1-9。血液标本采集和血涂片制备第54页血液标本采集和血涂片制备第55页血液标本采集和血涂片制备第56页 （一）染料（一）染料 1碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特碱性染料、酸性染料和复合染料，其组成与特点见表点见表1-10-0。血液标本采集和血涂片制备第57页 （二）染色方法（二）染色方法 1Wright染色法染色法 （1）染色原理）染色原理 1）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染）物理吸附与化学亲和作用：血涂片染色过程现有物理吸附作用，又有化学亲和作用。色过程现有物理吸附作用，又有化学亲和作用。因为血细胞内不一样结构所含有化学成份不一因为血细胞内不一样结构所含有化学成份不一样，对各种染料亲和力也不一样（表样，对各种染料亲和力也不一样（表1-10）。）。血液标本采集和血涂片制备第58页血液标本采集和血涂片制备第59页 2）pH值影响：血细胞各种成份属于值影响：血细胞各种成份属于蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，所带蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，所带电荷伴随溶液电荷伴随溶液pH而定。所以，血细胞染色而定。所以，血细胞染色对氢离子浓度十分敏感。对氢离子浓度十分敏感。血液标本采集和血涂片制备第60页 染色时惯用缓冲液（染色时惯用缓冲液（pH6.46.8）来调整）来调整染色时染色时pH值，以到达满意染色效果（表值，以到达满意染色效果（表1-11）。）。血液标本采集和血涂片制备第61页 （2）试剂）试剂 1）Wright染液：染液：Wright染液是由伊染液是由伊红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇作用：红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇作用：溶解伊红和亚甲蓝。溶解伊红和亚甲蓝。含有很强脱水作用，能够固定红细含有很强脱水作用，能够固定红细胞形态，提升对染料吸附作用，增强染色胞形态，提升对染料吸附作用，增强染色效果。效果。2）磷酸盐缓冲液（）磷酸盐缓冲液（pH 6.8）血液标本采集和血涂片制备第62页 （3）染色方法与结果判断：染色方）染色方法与结果判断：染色方法见表法见表1-11-1。血液标本采集和血涂片制备第63页血液标本采集和血涂片制备第64页 2Giemsa染色法染色法 （1）染色原理：与）染色原理：与Wright染色法基染色法基本相同。本相同。Giemsa染色法加强了天青作用，染色法加强了天青作用，提升了噻嗪类染料效果。提升了噻嗪类染料效果。（2）试剂：染液放置越久，其染色）试剂：染液放置越久，其染色效果越好。效果越好。血液标本采集和血涂片制备第65页 （3）染色：）染色：Giemsa染色法步骤与方法染色法步骤与方法见表见表1-11-2。血液标本采集和血涂片制备第66页 3Wright-Giemsa染色法染色法 Wright-Giemsa染色法结合了染色法结合了Wright染色法和染色法和Giemsa染色法优点。在染色法优点。在Wright染液配方基础上，每染液配方基础上，每1.0g Wright染料添加染料添加0.3g Giemsa染料。染色染料。染色步骤与步骤与Wright染色法相同。染色法相同。【方法学评价方法学评价】血涂片染色方法学评价血涂片染色方法学评价见表见表1-12。血液标本采集和血涂片制备第67页血液标本采集和血涂片制备第68页 【质量确保质量确保】染色过深、过浅与血染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、染液浓度、pH亲密相关。亲密相关。Wright染色质染色质量确保见表量确保见表1-13。血涂片染色不佳原因。血涂片染色不佳原因及纠正办法见表及纠正办法见表1-14。血液标本采集和血涂片制备第69页血液标本采集和血涂片制备第70页血液标本采集和血涂片制备第71页