中兽药开发的思路及其标准的制定.pptx

1中兽药开发的思路及其标准的制定中兽药开发的思路及其标准的制定 黄璐琦黄璐琦中国中医科学院中国中医科学院2o中兽药的概况中兽药的概况 o中兽药开发的思路中兽药开发的思路 o中兽药标准的制定中兽药标准的制定o中兽药分子鉴定的质量控制模式中兽药分子鉴定的质量控制模式3中兽药的概况中兽药的概况4o司司牧牧安安骥骥集集记记载载：“昔昔神神农农皇皇帝帝，创创置置药药草草八八百百余余种种，流流传传人人间间，救救疗疗马马病病。”这这虽虽然然是是一一种种传传说说，但但也也反反映映出出我我国国古古代代便便认认为为兽兽药药同同样样起起源源于于“尝尝百百草草”的的神神农农，与与人人药药同同源源。我我国国最最早早的的药药物物是是以以植植物物为为主主，所所以以后后世世的的有有关关著著作作便便叫叫“本本草草”。此此外外，后后世世所出现的本草学也为人畜所通用。所出现的本草学也为人畜所通用。o李李时时珍珍的的本本草草纲纲目目，喻喻氏氏兄兄弟弟的的元元亨亨疗疗马马集集相继出现，代表了兽医学发展的水平。相继出现，代表了兽医学发展的水平。5系系统统的的阐阐述述了了自自古古以以来来中中兽兽医医的的基基本本理理论论，中中兽兽医医常常用用药药物物234234种种，常常见见疾疾病病和和处处方方246246种。种。6中兽药的应用现状中兽药的应用现状o从从大大家家畜畜（牛牛马马）为为主主转转向向中中、小小畜畜禽禽（猪猪、羊、禽等）以及鸟兽鱼虫等特种经济动物；羊、禽等）以及鸟兽鱼虫等特种经济动物；o从个体治疗为主转向群体或集约化防治；从个体治疗为主转向群体或集约化防治；o从防治结合为主转向以防为主；从防治结合为主转向以防为主；o从从防防治治疾疾病病为为主主转转向向既既要要防防治治疾疾病病又又要要提提高高生产性能等。生产性能等。7o随随着着这这些些转转变变和和畜畜禽禽养养殖殖业业的的日日益益兴兴旺旺，中中兽兽药药从从应应用用的的深深度度和和广广度度两两方方面面又又重重新新得得到到了扩展。了扩展。o兽兽药药行行业业是是养养殖殖业业的的服服务务行行业业，目目前前国国内内中中兽兽药药占占兽兽药药市市场场份份额额仅仅20%左左右右。据据行行业业统统计表明：计表明：n国内每年禽用兽药的交易额在国内每年禽用兽药的交易额在180多亿元左右，多亿元左右，n猪猪用用兽兽药药的的交交易易额额在在25亿亿元元左左右右，再再加加上上草草食食家畜、渔业等兽药合计为家畜、渔业等兽药合计为200250亿元人民币，亿元人民币，o由此可见兽药行业的市场容量非常大。由此可见兽药行业的市场容量非常大。8我国的中兽医药行业的现状我国的中兽医药行业的现状o现现有有的的2586兽兽药药生生产产厂厂家家中中，有有2000多多家家生生产产各种中兽药制剂各种中兽药制剂4000余种。余种。o而而现现有有的的大大部部分分国国营营兽兽药药厂厂受受资资金金、人人才才等等因因素素限限制制，技技术术设设备备更更新新缓缓慢慢，产产品品老老化化，不不能能适适应应现现有有的的市市场场需需求求，面面临临关关停停并并转转或或勉勉强强维维持的局面。持的局面。o根根据据农农业业部部规规定定，2005年年国国内内兽兽药药厂厂将将由由现现在在的的2586家家按按5:1的的比比例例缩缩减减，都都必必须须通通过过GMP认认证。证。9中兽药的开发和研究现状中兽药的开发和研究现状 o经经过过多多年年年年的的临临床床实实践践证证实实,运运用用天天然然中中草草药药防治病毒性疾病取得了丰富的经验：防治病毒性疾病取得了丰富的经验：n黄芩、黄柏和柴胡对肝炎病毒有较好抑制作用。黄芩、黄柏和柴胡对肝炎病毒有较好抑制作用。n金银花、连翘和板蓝根对流行性感冒病毒有效。金银花、连翘和板蓝根对流行性感冒病毒有效。n天天花花粉粉、淫淫羊羊藿藿、紫紫花花地地丁丁和和甘甘草草对对艾艾滋滋病病毒毒有有抑制作用。抑制作用。n板板兰兰根根和和大大黄黄对对呼呼吸吸道道合合胞胞疹疹病病毒毒有有较较强强的的抑抑制制作用。作用。10o近近年年来来，国国内内外外研研究究者者已已从从中中药药中中筛筛选选出出了了大大量量有有效效成成分分，其其中中有有很很多多已已被被开开发发应应用用到到兽兽医医临床：临床：n人参所含的皂苷类物质，对马立克病毒有抑制作用。人参所含的皂苷类物质，对马立克病毒有抑制作用。n连翘的提取物金丝桃素对流感病毒具有抑制作用。连翘的提取物金丝桃素对流感病毒具有抑制作用。n黄黄芪芪中中的的黄黄芪芪多多糖糖对对流流感感病病毒毒、人人疱疱疹疹病病毒毒、新新城城疫病毒和传染性支气管炎病毒等都具有抑制作用。疫病毒和传染性支气管炎病毒等都具有抑制作用。11o中中药药渣渣以以及及一一些些非非药药用用部部位位中中含含有有许许多多有有用用成成分，对兽医疾病防治有很大的潜在作用。分，对兽医疾病防治有很大的潜在作用。n五五味味子子醇醇提提残残渣渣中中含含有有免免疫疫增增强强作作用用的的粗粗多多糖和苯丙素类木脂素等，糖和苯丙素类木脂素等，n提提取取总总苷苷后后的的三三七七药药渣渣中中含含有有50%的的三三七七多多糖，糖，n提提取取苷苷草草酸酸后后的的甘甘草草渣渣中中含含有有7.89%的的甘甘草草多糖，多糖，n小小柴柴胡胡颗颗粒粒中中黄黄苓苓药药材材提提取取后后药药渣渣中中含含有有70.3%的的黄苓苷。的的黄苓苷。12中兽医药在无公害养殖，参与国际市场畜产品中兽医药在无公害养殖，参与国际市场畜产品竞争中的优势竞争中的优势 o中药的自身优势与畜禽健康养殖中药的自身优势与畜禽健康养殖 n中中药药具具有有多多方方位位调调节节和和治治疗疗作作用用，可可提提高高动动物物机机体体的的免免疫疫力力和和抗抗应应激激能能力力。在在休休药药期期用用中中兽兽药药替替代代西西药药防防治治疫疫病病，中中长长期期使使用用具具有有低低毒毒副副作作用用，可可有有效效降降低低体体内内的的药药物物残残留留，同同时时还还能能促促进进生生产产性性能能的的发发挥挥，从从而而满满足足日日益益严严格格的的食食品安全需要。品安全需要。o中兽医药参与畜禽防疫大有可为中兽医药参与畜禽防疫大有可为 13o目目前前我我国国兽兽药药研研究究开开发发能能力力弱弱、产产品品科科技技含含量量低低。新新兽兽药药的的研研究究与与开开发发主主要要以以仿仿制制为为主主，这这将将严严重重制制约约着着兽兽药药行行业业的的发发展展，特特别别是是在在加加入入WTO后后，我我国国大大部部分分一一、二二类类兽兽药药由由于于涉涉及及知知识识产产权权问问题题，难难以以再再生生产产。因因此此开开发发创创新新我我国国自自有有特特色色的的知知识识产产权权的的新新兽兽药药已已成当务之急。成当务之急。o中中药药非非药药用用部部位位和和药药渣渣的的开开发发利利用用是是中中兽兽药药行业资源化利用的低碳经济模式。行业资源化利用的低碳经济模式。14中兽药开发的思路中兽药开发的思路 15中兽药开发的思路中兽药开发的思路 我我国国动动物物性性食食品品的的生生产产和和消消费费将将进进入入全全面面提提升升的的阶阶段段,即即:动动物物性性食食品品品品质质的的提提高高,兽兽药药残残留留的的严严格格控控制制,兽兽药药对对环环境境和和生生态态的的影影响响等等,市市场场将将呈呈现现对对安安全全、高高效效、低低毒毒的的天天然然药药物物和和动动物物专专用用药药物物的的高高度度需需求求。因因此此，弘弘扬扬具具有有民民族族特特色色的的传传统统中中兽兽医医学学，开开发发具具有有独独立立知知识识产产权权的的新新中中兽兽药，具有广阔的前景。药，具有广阔的前景。16中兽药开发的思路中兽药开发的思路o中中兽兽药药研研发发的的重重点点应应放放在在组组方方、有有效效成成分分或或部部位位的的提提取取分分离离、剂剂型型改改进进、质质量量标标准准制制定定和和药药效效、安安全全性性评评价价上上，为为中中兽兽药药的的推推广广应应用用提提供供理论和实践的基础。理论和实践的基础。17首先，从立项方面来说首先，从立项方面来说1 1中兽药的研发以抗微生物药和抗寄生虫药为主中兽药的研发以抗微生物药和抗寄生虫药为主,加强抗病毒药、替代抗生素的抗菌促生长饲加强抗病毒药、替代抗生素的抗菌促生长饲料添加剂、绿色兽药的攻关研究。料添加剂、绿色兽药的攻关研究。2 2防治对象立足畜禽等食品动物防治对象立足畜禽等食品动物,加强水产养殖加强水产养殖类、宠物和特种经济动物群的用药开发。类、宠物和特种经济动物群的用药开发。3 3基于中兽医强调整体观念和辩证论治思想，继基于中兽医强调整体观念和辩证论治思想，继续免疫调节剂和免疫增强剂方面中兽药的研发。续免疫调节剂和免疫增强剂方面中兽药的研发。18其次，中兽药的研发应重视新技术和新剂型的应用其次，中兽药的研发应重视新技术和新剂型的应用 1 1将制剂的新工艺引入中兽药加工中将制剂的新工艺引入中兽药加工中o超超微微细细粉粉末末化化技技术术用用于于中中兽兽药药粉粉碎碎，使使药药材材成成分分的的溶出和起效更加迅速完全，提高生物利用度；溶出和起效更加迅速完全，提高生物利用度；o超声波提取有效成分省时、低温、提取率高；超声波提取有效成分省时、低温、提取率高；o超超临临界界流流体体萃萃取取技技术术(sFE)(sFE)效效率率高高、速速度度快快、选选择择性好，没有溶剂残留而且适于热敏物质；性好，没有溶剂残留而且适于热敏物质；o以以超超滤滤为为代代表表的的膜膜分分离离技技术术高高效效、低低耗耗，使使用用范范围围广，易于操作控制；广，易于操作控制；o喷喷雾雾干干燥燥、冷冷冻冻干干燥燥等等浓浓缩缩技技术术改改变变了了传传统统中中药药制制剂的形象。剂的形象。o随随着着制制粒粒、包包衣衣、固固体体分分散散物物、-环环糊糊精精包包合合物物、微微型型包包囊囊技技术术等等制制剂剂新新工工艺艺的的引引入入必必将将极极大大改改善善中中兽药加工的技术水平。兽药加工的技术水平。192 2对剂型进行改进和创新对剂型进行改进和创新o在在中中华华人人民民共共和和国国兽兽药药典典(2010(2010年年版版)中中收收载载的的成成方制剂方制剂192192种。种。o针针对对不不同同动动物物种种类类疾疾病病治治疗疗的的需需要要,科科学学地地、配配套套性性地地开开发发针针对对性性强强、使使用用方方便便的的新新剂剂型型,如如牛牛羊羊用用驱驱虫虫浇浇泼泼剂剂、微微乳乳剂剂、大大丸丸剂剂;促促生生长长埋埋植植剂剂;奶奶牛牛用用抗抗菌菌乳乳房房注注射射剂剂、乳乳头头擦擦剂剂、腔腔道道栓栓剂剂;仔仔猪猪用用凝凝胶胶剂剂(舔舔剂剂)、滴剂滴剂;鸽子用丸剂鸽子用丸剂;水产用微囊剂水产用微囊剂,泡腾、膨化剂等。泡腾、膨化剂等。o可可溶溶性性粉粉剂剂、胶胶囊囊剂剂、膜膜剂剂(包包括括透透皮皮制制剂剂等等)、喷喷雾雾剂剂(包包括括气气雾雾剂剂)、控控释释制制剂剂、缓缓释释剂剂和和靶靶向向药药物物制制剂剂等将为中兽药新药的研究开发带来新的方向。等将为中兽药新药的研究开发带来新的方向。20中兽药标准的制定中兽药标准的制定o中中兽兽药药质质量量控控制制模模式式是是指指兽兽用用中中草草药药的的品品质评价方法及其标准。质评价方法及其标准。o中中兽兽药药和和人人类类所所用用的的药药材材一一样样应应当当包包括括药药材、炮制加工后的饮片、各种中成药。材、炮制加工后的饮片、各种中成药。21o基基源源鉴鉴定定：应应用用分分类类学学方方法法将将各各种种植植（动动）物物药药的的来来源源鉴鉴定定清清楚楚，是是中中兽兽药药质质量量控控制制工工作作的的基基础础。但但这这一一方方法法和和标标准准一一直直采采用用基基于于模模式式种种概概念念的的经经典典形形态态分分类类，具具有有较较大大的的局局限限性性和和片片面面性性，对对于于近近缘缘种种，易易混混淆品种的鉴定尤为棘手。淆品种的鉴定尤为棘手。22o性性状状鉴鉴定定：以以感感观观方方式式鉴鉴别别中中兽兽药药的的外外观观形形态态，色色泽泽，质质地地，断断面面特特征征和和气气味味等等特特征征，是是对对长长期期实实践践积积累累的的中中兽兽药药鉴鉴定定经经验验的的总总结结。这这种种质质量量控控制制方方式式虽虽简简便便，快快速速，有有效效，但但主主观观性性强强，结结果果的的准准确确性性主主要要取取决决于于鉴鉴定定者者的的经经验验，对对极极易易混混淆淆的的,破破碎碎，粉粉末末和和腐腐烂烂等等药药材材和和饮饮片片的的鉴鉴别别往往往往难难以以适从。适从。23o显显微微鉴鉴定定：运运用用解解剖剖学学知知识识并并借借助助显显微微镜镜对对中中兽兽药药的的组组织织构构造造，细细胞胞形形状状以以及及内内含含物物，表表面面附附属属物物等等特特征征进进行行描描绘绘，对对于于单单凭凭外外观观性性状状难难以以识识别别、多多来来源源、破破碎碎、粉粉末药材和饮片等的鉴定应用价值较高。末药材和饮片等的鉴定应用价值较高。24o理理化化鉴鉴定定：利利用用物物理理或或化化学学方方法法,对对中中兽兽药药中中的的主主要要化化学学成成分分或或有有效效成成分分进进行行定定性性和和定定量量分分析析，是是鉴鉴定定中中兽兽药药真真伪伪及及品品质质优优劣的有效手段。劣的有效手段。25o定性分析定性分析nTLCTLCn电泳电泳o定量分析定量分析nHPLCHPLCnGCGCnTLC-ScTLC-ScnHPCEHPCEnLC-MS/MSLC-MS/MSl香薷药材的薄层色谱图香薷药材的薄层色谱图1.百里香酚百里香酚2.江西分宜江西分宜3.江西新祺洲江西新祺洲4.河北秦皇岛河北秦皇岛5.江西南昌江西南昌6.江西樟树江西樟树7.广西桂林广西桂林8.广西平南广西平南9.江苏徐州江苏徐州10.内蒙古林西内蒙古林西11.北京北京27黄芩药材的黄芩药材的TLCTLC（254nm254nm）图谱）图谱28oHPLCHPLCn色谱柱：正相、反相色谱柱：正相、反相n检测器：检测器：UVUV、ELSDELSD、MSMS、荧光、视差、荧光、视差n适适用用于于：黄黄酮酮类类、皂皂甙甙类类、生生物物碱碱类类、香香豆豆素类等中强极性成分分析素类等中强极性成分分析oGCGCn色谱柱：毛细管柱、石英柱色谱柱：毛细管柱、石英柱n检测器：火焰检测器、热导检测器检测器：火焰检测器、热导检测器n适用于：挥发性成分适用于：挥发性成分oTLC-ScTLC-Scn吸附剂：硅胶吸附剂：硅胶G G、硅胶、硅胶G G254254n检测器：检测器：UV-VISUV-VIS，可用多种显色剂，可用多种显色剂n适适用用于于：多多种种有有紫紫外外吸吸收收、有有荧荧光光、易易显显色色的成分的成分oHPCEHPCEn色谱柱：毛细管石英柱色谱柱：毛细管石英柱n检测器：检测器：UVUV、MSMSn适适用用于于：中中强强极极性性成成分分、水水溶溶性性、大大分分子子成成分分30oLC-MS/MSLC-MS/MSn适适用用于于：较较复复杂杂组组分分的的定定性性、定定量量、结结构构信息等。信息等。31o生生物物鉴鉴定定：是是利利用用中中兽兽药药对对生生物物整整体体或或离离体体组组织织所所起起的的药药理理作作用用，测测定定中中兽兽药药的的效效价或作用强度的一种方法。价或作用强度的一种方法。32中兽药标准的制定中兽药标准的制定33中兽药指纹图谱的质量控制模式中兽药指纹图谱的质量控制模式 o中中兽兽药药的的疗疗效效实实质质上上是是中中药药内内各各种种化化学学成成分分协同作用的结果。协同作用的结果。o仅仅以以中中兽兽药药中中一一，二二个个“有有效效成成分分”作作为为定定量量指指标标，不不能能从从整整体体上上反反映映中中药药的的内内在在质质量量，不符合中医的整体观念。不符合中医的整体观念。o建建立立从从整整体体上上综综合合评评价价中中兽兽药药质质量量的的方方法法很很有有必必要要，指指纹纹图图谱谱是是中中兽兽药药质质量量控控制制的的发发展展方向方向.34试管反应对照品TLC对照药材TLC色谱指纹图谱NMR指纹图谱光谱指纹图谱质谱指纹图谱X衍射指纹图谱人工检索识别中药指纹图谱无机微量元素指纹图谱分子生物技术指纹图谱计算模拟识别系统中药指纹图谱圆二色谱法电化学指纹图谱指纹图谱的类型指纹图谱的类型35化学指纹图谱的定义化学指纹图谱的定义o中中兽兽药药化化学学指指纹纹图图谱谱是是指指某某种种（或或某某产产地地）中中兽兽药药材材经经适适当当处处理理后后，采采用用一一定定的的分分析析手手段段得得到到的的能能够够标标示示该该中中兽兽药药特特性性的的色色谱谱或光谱的图谱。或光谱的图谱。36TLCTLCSHPTLC色谱指纹图谱HPLCMSGCMSHPLCCESFC色谱指纹图谱色谱指纹图谱37指纹图谱的特点指纹图谱的特点o具有良好的专属性、特征性具有良好的专属性、特征性n通通过过指指纹纹图图谱谱的的特特征征性性，能能够够有有效效鉴鉴别别样样品品的真伪或产地。的真伪或产地。n通通过过指指纹纹图图谱谱主主要要特特征征峰峰的的面面积积或或比比例例的的制制定定能能有有效效控控制制产产品品的的质质量量，确确保保产产品品质质量量的的相对稳定性。相对稳定性。o具有具有“共性共性”和和“个性个性”o具有整体性和模糊性具有整体性和模糊性38指纹图谱的构建程序指纹图谱的构建程序o研究构建指纹图谱五个过程：研究构建指纹图谱五个过程：n建立（建立（developmentdevelopment，或叫制备），或叫制备）n分析（分析（analysisanalysis）n比较（比较（comparisoncomparison）n评价（评价（evaluationevaluation）n校验（校验（verificationverification）39检测方法检测方法 o稳定性试验：主要考察供试品的稳定性。稳定性试验：主要考察供试品的稳定性。o精精密密度度试试验验：主主要要考考察察仪仪器器的的精精密密度度。取取同同一一供供试试品品，连连续续进进样样5 5次次以以上上，考考察察色色谱谱峰峰的的相相对对保保留留时时间间、峰峰面面积积比比值值的的一一致致性性。RSDRSD不不得得大大于于3 3。o重重现现性性试试验验：主主要要考考察察实实验验方方法法的的重重现现性性。取取同同一一批批号号的的供供试试品品5 5份份以以上上，按按照照供供试试品品的的制制备备和和检检测测方方法法制制备备供供试试品品并并进进行行检检测测，考考察察色色谱谱峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性。峰的相对保留时间、峰面积比值的一致性。40山楂指纹图谱的测定山楂指纹图谱的测定河北兴隆河北兴隆河北兴隆河北兴隆河南嵩县河南嵩县河南嵩县河南嵩县河南林县河南林县河南林县河南林县山西绛县山西绛县山西绛县山西绛县41几种中兽药的高效液相指纹图谱几种中兽药的高效液相指纹图谱防风防风黄芩黄芩香薷香薷42中兽药分子鉴定的质量控制模式中兽药分子鉴定的质量控制模式43许许多多中中兽兽药药品品种种存存在在鉴鉴定定困困难难的的问问题题，现现存存的的鉴鉴定定方方法法尚尚不不能能解解决决。DNADNA分分子子标标记记方方法法的的逐逐步步成成熟熟，使使得得中中兽兽药药材材以以客客观观指指标标为为依依托托的的现现代代质质量量评评价价方方法法得得到到了了有有益益的的补补充充。为为中中兽兽药药走走向向国国际际市市场场提提供供良良好好的的技技术术保保障障。并并以以此此为为突突破破口口来来解解决决中中药药品种鉴定中的一些难题。品种鉴定中的一些难题。44分子鉴定中已涉及的标记种类分子鉴定中已涉及的标记种类分子鉴定中已涉及的标记种类分子鉴定中已涉及的标记种类DNADNA测序技术测序技术 序列特异扩增区技术序列特异扩增区技术 （SCARSCAR）高特异性高特异性PCRPCR技术技术 复杂扩增受阻突变体系（复杂扩增受阻突变体系（MARMSMARMS）简单重复序列间区标记技术（简单重复序列间区标记技术（ISSRISSR）简单序列重复标记技术简单序列重复标记技术 （SSRSSR）基因芯片技术基因芯片技术 （Gene ChipGene Chip）DNADNA生物条形编码（生物条形编码（DNA BarcodingDNA Barcoding）45o白白芷芷：用用于于风风寒寒感感冒冒，疮疮疡疡肿肿毒毒。治治家家畜畜疥疥癣癣。农农圃圃便便览览中中便便有有“治治牛牛毛毛焦焦、不不食食水水草草方方：白白芷芷、大大黄黄、菜菜子子。共共为为细细末末、用用鸡鸡子子、水水酒酒调调匀匀灌灌之之”的记载。的记载。46Commercial Baizhi were usually be divided into four catagories:QiBaizhi,YuBaizhi,HangBaizhiandChuanBaizhiQiBaizhiHangBaizhi47Source?48 The botanical source of Baizhi was suspected to beo A.dahurica Benth.et Hook.f.ex Franch.et Sav.o A.formosana Boiss o A.porphyrocaulis Nakai et Kitagawa4950 The four commercial Baizhi fall into the same series,their original wild plant was identified as A.formosana.51推广性推广性将本项目所建立的一将本项目所建立的一整套分子生药学的理整套分子生药学的理论和方法应用于白芷论和方法应用于白芷种质资源的系统研究种质资源的系统研究中，该项研究成果已中，该项研究成果已获获20022002年中华医学科年中华医学科技奖二等奖。技奖二等奖。