HbAc基础知识培训.pptx
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1、HbA1c定义定义l HbA1c:葡萄糖与血红蛋白葡萄糖与血红蛋白链氨基酸末端的链氨基酸末端的6 6个氨基酸个氨基酸结结合产生的一种特定的糖化血红蛋白合产生的一种特定的糖化血红蛋白l血红蛋白被糖化后,氨基酸末端所带血红蛋白被糖化后,氨基酸末端所带负电荷负电荷会增加会增加l Hb HbA A0 0:没有结合葡萄糖的血红蛋白没有结合葡萄糖的血红蛋白链氨基酸末端的链氨基酸末端的6 6个氨个氨基酸基酸l HbAHbA1c1c以百分比表示,即以以百分比表示,即以和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例l正常参考范围:正常参考范围:4%-6%4%-6%(NGSP/DCCTNGSP/DCCT标化的方法)标
2、化的方法)糖化血红蛋白-血红蛋白的糖基化产物葡萄糖进入红细胞,在内部与血红蛋白发生反应葡萄糖进入红细胞,在内部与血红蛋白发生反应血红蛋白葡萄糖红细胞糖化血红蛋白的生物合成过程(两步)血红蛋白葡萄糖中间产物中间产物-LA1c Schiff碱碱HbA1c第一部:快速反应,生成不稳定A1c(LA1c)第二步:缓慢反应,生成稳定的A1c(HbA1c)糖化和非糖化的血红蛋白HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA()HbA2()HbF()95%2%1-3.5%成人血红蛋白分三种成人血红蛋白分三种HbA为主要成人为主要成人Hb非糖化非糖化Hb糖化糖化Hb6-8%87-89%血红蛋白血红蛋白
3、HbA1c是如何计算的?A1c%=A1c/A0+HbA1离子交换色谱所分离的组分解释(非糖尿病样本)HbHb的组成的组成%of Hb Hb%of Hb Hb与糖类的结合与糖类的结合HbA1a 1%HbA1a 1%HbA1与1,6-二磷酸果糖结合而成 HbA1b 1%HbA1b 1%丙酮酸与链氨基末端缬氨酸结合而成 HbF 1%HbF 1%胎儿血红蛋白胎儿血红蛋白LA1c 1%LA1c 1%血红蛋白形成血红蛋白形成HbA1cHbA1c之前的中间产物之前的中间产物HbA1c 46%HbA1c 46%链链氨基酸端与葡萄糖结合的产物氨基酸端与葡萄糖结合的产物HbA0 HbA0 90%90%非糖化血红蛋
4、白非糖化血红蛋白 胎儿血红蛋白在胎儿及出生6个月以内的新生儿体内为高浓度,6个月后基本降为成人水平妇产科 HbA1c主要用于糖尿病妊娠的筛查色谱图举例 HbA1a&HbA1b HbA的次要组分的次要组分LA1c(希夫碱希夫碱)和氨甲基乙和氨甲基乙酰化的酰化的 Hb HbA1c A0总面积为 100万万-500万万 A1c 结果结果小结什么是HbA1c和HbA0?A1c被糖化后什么电荷增加了?为什么糖化血红蛋白在A0峰之前被洗脱下来?测量糖化血红蛋白为什么要先对样本溶血?HbA1c是如何计算的?成人血红蛋白包括哪几种?HbF是什么?浓度高时是否会对A1c造成干扰?为什么?伯乐的糖化试剂能报告Hb
5、F吗?为什么?糖化的血红蛋白包括哪几种?HbA1c实验室检测方法常见的HbA1c检测方法 主要有三种检测方法:1.离子交换高压液相色谱(离子交换高压液相色谱(HPLCHPLC)直接分离直接分离HbA1cHbA1c2.硼酸亲和高压液相色谱 检测产物为总糖化血红蛋白3.免疫法 检测产物为检测产物为HbA1cHbA1c各检测方法的精密度 方法 精密度 电泳 +免疫法 +低压液相色谱(LPLC)+高压液相色谱(HPLC)+各检测方法的分析物HbA(a a2 2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成分非糖化成分糖化成分糖化成分离子交换色谱和免疫法检测物离子交换色谱和免疫法检测物硼酸亲和
6、色谱检测物硼酸亲和色谱检测物离子交换HPLC检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准方法 DCCT研究中唯一所采用的HbA1c检测方法 NGSP标准化的参考方法 检测原理:基于HbA1c 与其它血红蛋白组分所带电荷不同,在一定的缓冲液离子强度下可与分析柱树脂表面偶联的离子基团有不同程度的结合,从而将HbA1c与其它组分(HbA1b,HbA1a,HbF,HbA0)区分开而得到分离。离子交换HPLC检测原理色谱图的横坐标是时间,纵坐标是信号强度,反映Hb各分析峰浓度的高低被校准的峰被阴影化被校准的峰被阴影化离子交换HPLC的特点采用采用离子交换原理离子交换原理基于基于HPLCHPLC的平台的平台HPLC
7、方法的试剂组成包括:分析柱、缓冲液、校准品q采用分析柱内填充的离子交换树脂作为固定相,树脂上面偶采用分析柱内填充的离子交换树脂作为固定相,树脂上面偶联了带电荷基团联了带电荷基团q以可形成以可形成不同离子强度不同离子强度洗脱梯度的缓冲试剂作为流动相。洗脱梯度的缓冲试剂作为流动相。q溯源性由试剂盒配套的校准品保证溯源性由试剂盒配套的校准品保证分离效果的影响因素分离效果的影响因素分析柱内的填充物(颗粒越小,分离效果越好,速度越慢)分析柱内的填充物(颗粒越小,分离效果越好,速度越慢)分析柱柱长(越长,分离效果越好,速度越慢)分析柱柱长(越长,分离效果越好,速度越慢)离子交换HPLC的优缺点优点:优点:
8、1.全自动 2.结果准确,可靠 分析物为HbA1c。高分辨率方法可同时区分常见血红蛋白变异体,给临床医生已额外的医疗提示 3.精密度好 CV5%CV%5%)只报只报HbA1cHbA1c一个数值,不能检测血红蛋白变异体一个数值,不能检测血红蛋白变异体高血红蛋白高血红蛋白F F样本的样本的HbA1cHbA1c检测结果偏低检测结果偏低严重的黄疸和高脂血影响比色结果严重的黄疸和高脂血影响比色结果国产糖化试剂的国产糖化试剂的非标准化问题非标准化问题小结糖化血红蛋白的主要检测方法有什么?检测产物分别是什么?HPLC的中文全称是什么?HbA1c检测的金标准方法是?为什么?离子交换HPLC的检测原理是基于什么
9、的不同?检测试剂应该包括哪些主要的组分?分析柱中填充的是什么?上面偶联了什么?不同缓冲液的区别是什么?不同离子交换HPLC方法的分辨率一样吗?分辨率的关键影响因素是什么?糖化血红蛋白检测结果的溯源性由哪种试剂保证?伯乐糖化产品的色谱图横坐标是什么?纵坐标是什么?硼酸亲和色谱法的检测原理是基于什么?色谱图有几个峰?分别是什么?硼酸亲和色谱法是怎么检测HbA1c的?免疫法检测糖化血红蛋白的原理是基于什么反应?国产免疫法试剂的缺点有哪些?HbA1c实验室检测干扰因素常见检测干扰因素非方法学特异的干扰因素改变红细胞寿命的生理条件可影响 HbA1c结果导致检测结果假性偏低 镰刀细胞性贫血和溶血性贫血 维
10、他命 C和 E(抑制糖化作用)导致检测结果假性偏高 铁缺乏性贫血,脾切除术后 真性红细胞增多症(高原地区)妊娠期 Hb浓度偏低,HbA1c比正常人偏低 方法学特异的干扰因素血红蛋白变异体(如.HbS,HbC,HbD,HbE)血红蛋白衍生物(乙酰化、甲酰化衍生物等)长期服用阿斯匹林的病人,体内乙酰化Hb高,结果偏高 肾衰病人的氨甲酰基化,导致结果偏高Schiff碱(A1c中间产物)某些血糖浓度急剧变化的1型糖尿病人,Schiff碱升高,胎儿血红蛋白HbF严重的黄疸、高血脂血红蛋白变异体的发生率全世界已经发现了超过一千种血红蛋白变异体全世界已经发现了超过一千种血红蛋白变异体全球的血红蛋白变异体发生
11、率的最新数据是全球的血红蛋白变异体发生率的最新数据是7%*7%*非洲裔美国人:HbSHbS 7.8%;HbC 2.3%19881988年年,2.5,2.5,河南河南*20012001年年,3.2,3.2 ,丝绸之路丝绸之路*云南:云南:4%4%云南省的阿昌族HbE的发病率为41.2%*Kohne E.Hemoglobinopathies:clinical manifestations,diagnosis,and treatment.1.Dtsch Arztebl Int.2011;108(31-32):532-540.*河南省异常血红蛋白的调查与化学结构的分析研究,新乡医学院学报,1988,(
12、02)9-12*中国丝绸之路地区血红蛋白病的遗传流行病学的特点,人类学学报,2001,V20变异体对HbA1c准确性的影响Ross J.Molinaro,Targeting HbA1c:standardization and clinical laboratory measurement.MLO Jan,2008,血红蛋白变异体对HbA1c结果准确性的影响对部分方法的检测结果对部分方法的检测结果准确性有影响准确性有影响例:例:A0A0后有变异体的糖尿病后有变异体的糖尿病人样本,人样本,HbFHbF正常正常G8G8标准模式试剂的检测标准模式试剂的检测结果结果偏低偏低1%1%G8 Variant
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