细菌与酵母表面展示技术.pptx
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1、细菌表面展示技术酵母表面展示技术第七组定义:细菌表面展示技术是利用基因工程手段将某一蛋白或短肽段(靶蛋白)与微生物外膜蛋白(载体蛋白)以融合蛋白的形式呈现在细胞表面。外源蛋白与载体蛋白结合方式C C端融合端融合(N(N端端锚定在外膜定在外膜)N N端融合端融合(C(C端端锚定在外膜定在外膜)夹心融合心融合(有些蛋白本身具有信号有些蛋白本身具有信号肽序列序列及及锚定于外膜的序列,内部合适位点插定于外膜的序列,内部合适位点插入外源蛋白入外源蛋白)细菌表面展示系统传统:细菌的外膜蛋白、脂蛋白、表面菌的外膜蛋白、脂蛋白、表面附属附属结构构亚单位(如菌毛、鞭毛等)位(如菌毛、鞭毛等)近年:冰晶核蛋白、自
2、体运近年:冰晶核蛋白、自体运转蛋白、蛋白、S2S2层蛋白等蛋白等每种展示系每种展示系统都有自身的缺点(如展示都有自身的缺点(如展示蛋白大小的限制、蛋白大小的限制、错误定位、形成包涵定位、形成包涵体、外膜不体、外膜不稳定等),因此需要开定等),因此需要开发新新的系的系统,以,以进一步一步优化表面展示系化表面展示系统。早期研究多集中在革兰氏阴性菌。原因是遗传背景清楚,便于控制蛋白展示。但是从但是从应用上来看,革用上来看,革兰氏阳性菌的某氏阳性菌的某些特性更适合于表面展示。些特性更适合于表面展示。如下表:如下表:缺点:转化率低,限制构建较大容量的肽库;一些革兰氏阳性菌分泌大量蛋白酶,这会给应用带来麻
3、烦。表面锚定表面锚定机制机制外源蛋白外源蛋白插入数插入数展示蛋白展示蛋白通过膜层通过膜层细胞壁细胞壁 革兰氏阴革兰氏阴性菌性菌 有有 较短的片较短的片段段质膜膜层,并与外膜并与外膜正确正确结合合较薄较薄革兰氏阳革兰氏阳性菌性菌 有有 多达几百多达几百个个只只需需通通过单个单个质膜膜层较厚,坚较厚,坚固易操作固易操作细菌表面展示技术,结合荧光激活细胞筛选仪或流式细胞筛选仪,是非常有效的高通量筛选方法。优点:点:11、能能够决定突决定突变体体库中每个克隆的功能特性。中每个克隆的功能特性。22、目前唯一能、目前唯一能够定量定量检验单细胞水平和大量突胞水平和大量突变体催化体催化活性的方法。活性的方法。
4、33、定量分析、定量分析酶活性活性44、同、同时检测多个参数并且多个参数并且对每个每个观察到的克隆察到的克隆进行行记录。与噬菌体相比:与噬菌体相比:细菌表面展示技菌表面展示技术在疫苗在疫苗应用上具有独特用上具有独特优势;进行更快速更高效行更快速更高效筛选与传统的生物陶选技术相比,荧光激活细胞筛选仪具有以下特色高富集比高阳性率避免“亲和效应”基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示冰核蛋白是丁香假单胞菌的外膜蛋白,可加速纯水的冰晶形成,它通过糖基磷脂酰肌醇锚定在细菌表面,利于大分子蛋白的表面呈现。狂犬病毒糖蛋白是病毒与宿主细胞结合的配体,介导病毒与靶细胞结合。而且是狂犬病毒的主要保护性抗原,能刺
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