高效液相色谱技术(HPLC) 影响因素的选择.pdf
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1、高效液相色谱技术(HPLC)影响因素的选择赵轶男(大连民族学院 生命科学学院,大连116600)摘 要:阐述了高效液相色谱技术的应用,介绍了高效液相色谱技术影响因素的选择,如流动相、固定相、柱温、监测器等等。关键词:高效液相色谱;影响因素;固定相;流动相;检测器1 高效液相色谱技术应用高效液相色谱法(HPLC),是具有分离分析效能高、速度快、检测灵敏度高等特点的分离技术。以其不受试样挥发性和相对分子质量的限制,可用于分离分析高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机化合物,还可用于各种离子的分离分析;HPLC还可利用组份分子尺寸大小的差别、离子交换能力的差别以及生物分子间亲和力的差别进行分离;可
2、用多种溶剂作为流动相,对于性质和结构类似的物质,分离的可能性比气相色谱法更大。因此高效液相色谱的应用领域不断扩大和深入,目前已成为化学化工、商品检验、食品卫生、环境保护、生命科学和药品分析等诸多领域中重要的分离分析技术。目前高效液相色谱仪与结构仪器的联用技术是一个重要的分析检测手段。液相色谱2质谱联用技术,使得液相色谱的高分析能力和质谱高鉴定能力相结合,对复杂样品体系,特别是生物医学领域的研究提供了更进一步的有效方法1;HPLC2NMR的分析方法已经被证明为生物化学和药物化学分析中重要的分子结构鉴定方法之一2,3。2 高效液相色谱技术影响因素的选择2.1 固定相的选择液相色谱的固定相可以是吸附
3、剂、化学键合固定相(或在惰性载体表面涂上一层液膜)、离子交换树脂或多孔性凝胶。固定相的选择应符合:颗粒细且均匀;传质快;机械强度高,能耐高压;化学稳定性好,不与流动相发生化学反应。固定相以承受高压能力来分类,可分为刚性固体和硬胶两类。刚性固体以二氧化硅为基质,可承受7.0108Pa1.0109Pa的高压,可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团,可扩大应用范围,它是目前最广泛使用的一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中,它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5108Pa。固定相按孔隙深度分类,可分为表面多孔型和全多孔型固定相。表面多孔型固定
4、相的多孔层厚度小、孔浅,相对死体积小,出峰迅速、柱效亦高;颗粒较大,渗透性好,装柱容易,梯度淋洗时能迅速达到平衡,适合进行常规分析,但由于多孔层厚度薄,最大允许量受到限制。全多孔型固定相由直径为10 nm的硅胶微粒凝聚而成。由于颗粒很细(510m),孔仍然较浅,传质速率快,易实现高效、高速。适合复杂混合物分离及痕量分析。2.2 流动相在液相色谱中,当固定相选定时,流动相的种类、配比能显著地影响分离效果,因此流动相的选择非常重要。2.2.1 流动相的性质要求 第一、在选择流动相时,一般采用色谱纯试剂,必要时需进一步纯化,以除去有干扰的杂质。因为在色谱柱整个试用期间,流过色谱柱的溶剂是大量的,如溶
5、剂不纯,则长期积累杂质而导致检测器噪声增加4。第二、流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩,从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动3 作者简介:赵轶男(1979-),女,硕士,助教043第26卷增刊2007年12月分析试验室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol.26.Suppl.2007-12相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。第三、流动相必须与检测器匹配。使用UV检测器时,所用流动相在检测波长下应没有吸收,或吸收很小。当使用示差折光检测器时,应选择折光系数与
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