安捷伦液相色谱柱介绍与选择.pdf
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1、1提高分离速度,节约分析成本提高分离速度,节约分析成本安捷伦液相色谱柱介绍与选择安捷伦液相色谱柱介绍与选择OUTLINE安捷伦液相色谱柱介绍及选择建议安捷伦液相色谱柱介绍及选择建议如何提高液相色谱分离效率如何提高液相色谱分离效率23常规分析柱常规分析柱常规分析柱常规分析柱Zorbax Eclipse Plus柱柱Zorbax Eclipse XDBZorbax Stable Bond 柱柱Zorbax Extend C18柱柱Zorbax Bonus-RP 柱柱Zorbax SB-Aq 柱柱Zorbax RX HPLC 柱原先的柱原先的Zorbax ODS柱柱Zorbax 正相柱其他正相柱其他
2、Zorbax 柱柱生化分析柱生化分析柱生化分析柱生化分析柱Zorbax 300 SB 柱柱Zorbax 300Extend柱柱Zorbax Poroshell柱柱Zorbax Eclipse AAA柱柱Zorbax GF-250/450 凝胶柱凝胶柱Zorbax Oligo HPLC柱柱Zorbax SAX和和SCX柱柱MARSmRP column高通量和高通量和高通量和高通量和LC/MSLC/MS柱柱柱柱Zorbax 高通量柱,高通量柱,LC/MS 色谱柱色谱柱Zorbax 快速分离柱快速分离柱Zorbax 快速分离高通量柱快速分离高通量柱Zorbax 溶剂节省色谱柱溶剂节省色谱柱Zorba
3、x 微径色谱柱微径色谱柱Zorbax 毛细管柱和纳流柱毛细管柱和纳流柱制备柱制备柱制备柱制备柱Zorbax PrepHT制备柱制备柱Zorbax 液相色谱柱液相色谱柱常规分析柱常规分析柱常规分析柱常规分析柱Agilent TC/HCAgilent TC/HC(2)Agilent 液相色谱柱液相色谱柱制备柱制备柱制备柱制备柱Agilent prep 制备柱4安捷伦安捷伦Zorbax HPLC色谱柱色谱柱严格的质量控制严格的质量控制严格的质量控制严格的质量控制产品研究与开发硅胶生产键合柱装填产品研究与开发硅胶生产键合柱装填 具可追溯性具可追溯性 可定购生产批号不同的色谱柱可定购生产批号不同的色谱柱
4、 特殊规格定制特殊规格定制StableBondEclipseBonus RPExtend5二氧化硅二氧化硅NaKMgAlCaTiFeZrCuCrZnZorbax Rx-SIL10 341.52nd3ndndnd1Zorbax SIL17ndnd579322188 1nd88Nucleosil56N/A N/And1305776nd N/A N/A ndHypersil2900 N/A 403003865230 N/A N/A N/A N/And=未检出金属浓度(未检出金属浓度(ppm)A类硅胶类硅胶Original ZORBAX SIL(1970s)由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量
5、高由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的硅羟基的pKa低低),导致碱性化合物发生拖尾导致碱性化合物发生拖尾B类硅胶类硅胶(高纯高纯)ZORBAX Rx-Sil(1987)由于金属含量低由于金属含量低,硅羟基硅羟基pKa高高,碱性化合物不发生拖尾碱性化合物不发生拖尾Zorbax Rx-SIL:11种金属种金属 35 ppm(未检出其他杂质未检出其他杂质,1ppm);99.995%纯度的二氧化纯度的二氧化硅硅ZORBAX硅胶类型硅胶类型6选择适用于选择适用于pH7.5流动相的色谱柱流动相的色谱柱流动相流动相:乙腈乙腈:50 mMK2HPO4:55:45,pH 7.5UV:224
6、nm23C进样量进样量:20 L(0.5 g/L)Zorbax Eclipse XDB-C18(B类硅胶类硅胶)ZORBAX SB-C18(B类硅胶类硅胶)ODS(A类硅胶类硅胶)封端封端ODS(A类硅胶类硅胶)不封端不封端普通硅胶(普通硅胶(A类)类)由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的硅羟基的pKa低低),导致碱性化合物发生拖尾导致碱性化合物发生拖尾高纯硅胶高纯硅胶(B类类)由于金属含量低由于金属含量低,硅羟基硅羟基pKa高高,碱性化合物不发生拖尾碱性化合物不发生拖尾7硅胶填料液相色谱柱的基础硅胶填料液相色谱柱的基础Zorb
7、ax液相色谱柱硅胶特点液相色谱柱硅胶特点Zorbax硅胶的制备方法由液相色谱柱著名创始人硅胶的制备方法由液相色谱柱著名创始人J.J.Kirkland发明,属于安捷伦公司的专利技术。发明,属于安捷伦公司的专利技术。高纯度硅胶游离硅羟基活性降低提供更好的峰形专利的硅珠堆砌法更好的重现性填料颗粒更好的强度提供不同粒径的颗粒8硅胶硅胶+脲脲(pH=2)+甲醛甲醛CH2O孔径孔径80A&300A O2250oC粒径粒径1.8 m3.5 m5.0 m7.0 m安捷伦拥有此项填料专利技术安捷伦拥有此项填料专利技术ZORBAX Rx多孔硅胶微球多孔硅胶微球或:三聚氰氨甲醛树脂纯度,强度,对孔径与粒度严格控制优
8、级纯度,强度,对孔径与粒度严格控制优级ZORBAX键合相基础键合相基础Zorbax专利的硅珠堆砌技术专利的硅珠堆砌技术9Zorbax硅胶颗粒硅胶颗粒Bonus-RP酰胺嵌入三封端酰胺嵌入三封端Bonus-RP酰胺嵌入三封端酰胺嵌入三封端EclipsePlus/XDB二甲基键合双封端二甲基键合双封端EclipsePlus/XDB二甲基键合双封端二甲基键合双封端Extend-C18双齿键合双封端双齿键合双封端Extend-C18双齿键合双封端双齿键合双封端SB-C18二异丁基二异丁基-C18Eclipse XDB-C18Eclipse XDB-C8Eclipse XDB-苯基苯基StableBon
9、d二异丙基二异丁基键合二异丙基二异丁基键合StableBond二异丙基二异丁基键合二异丙基二异丁基键合Rx/SB-C8二异丙基二异丙基-C8SB-苯基二异丙基苯基二异丙基-苯基苯基SB-AQ二异丙基二异丙基SB-CN二异丙基二异丙基-CNSB-C3三异丙基三异丙基Rx-C18/Sil二甲基十八烷基硅烷二甲基十八烷基硅烷Rx-C18/Sil二甲基十八烷基硅烷二甲基十八烷基硅烷Zorbax主要的键合相主要的键合相Eclipse Plus-C18Eclipse Plus-C8Eclipse Plus-PAHEclipse XDB-CNEclipse Plus-苯基己基苯基己基10Zorbax主要键合
10、相技术介绍主要键合相技术介绍?Zorbax Eclipse XDB/PlusZorbax StableBond Zorbax Extend Zorbax Bonus RP 11Zorbax EclipseEclipse PlusEclipse XDB致密键合致密键合双封端双封端超纯坚固的超纯坚固的ZORBAX硅胶硅胶宽的宽的 pH使用范围使用范围2-9对于所有样品都有较好的峰形对于所有样品都有较好的峰形专利技术专利技术完整的质控过程完整的质控过程 方法开发的首要选择方法开发的首要选择?行业领先的峰形行业领先的峰形?更好的专利技术更好的专利技术处理硅胶基质处理硅胶基质?改进的双封端技术改进的双封
11、端技术:改进的键合试剂及键合过程:改进的键合试剂及键合过程?更加严格的质控标准,批与批之间更加好的重现性更加严格的质控标准,批与批之间更加好的重现性?不同粒径不同粒径 1.8,3.5,5um?最高的分离效率最高的分离效率?C18,C8,PAH,苯基苯基-己基己基?C18,C8,苯基苯基,CN?不同粒径不同粒径 1.8,3.5,5,7um?对于快速方法开发有很广泛的应用谱图库对于快速方法开发有很广泛的应用谱图库?多种色谱柱规格,从毛细柱到制备柱多种色谱柱规格,从毛细柱到制备柱?使用使用1.8um 颗粒实现快速有效的方法转化颗粒实现快速有效的方法转化Eclispe系列的色谱柱所适合的pH范围为2-
12、9,是液相中最为常见的流动相范围。而且在中等pH时,由于其对碱性化合物的峰形分离优异(尤其是Eclipse Plus),因此一般做为方法开发的首选色谱柱。12ZORBAX Eclipse Plus 解决了解决了“峰形峰形”问题问题由于硅胶上残留的硅羟基,碱性化合物通常会出现拖尾的现像由于硅胶上残留的硅羟基,碱性化合物通常会出现拖尾的现像 低的灵敏度低的灵敏度 很差的分离度很差的分离度 在指定时间内分离的峰数少在指定时间内分离的峰数少 很难定量很难定量ZORBAX Eclipse Plus C18ZORBAX Eclipse XDB-C183.5 min10 min需要改进的峰形需要改进的峰形E
13、clipse Plus可以做到可以做到!阿米替林阿米替林 0.1ug,60%乙腈乙腈 8mM 磷酸钾缓冲盐磷酸钾缓冲盐 pH 7.0,215nm,1.0mL/min,4.6x100mm 5 色谱柱色谱柱PLUS-针对碱性化合物而特别研制的色谱柱针对碱性化合物而特别研制的色谱柱13ZORBAX Eclipse Plus在甲醇流动相中分离阿米替林时峰形出色在甲醇流动相中分离阿米替林时峰形出色Eclipse Plus C18Phenomenex Gemini C18Phenomenex Luna C18(2)Waters SunFire C18Ace C18(2)Inertsil ODS(3)Tf=
14、1.00Tf=1.25Tf=1.26Tf=1.20Tf=1.92Tf=1.11阿米替林阿米替林 0.1g 80%甲醇甲醇 8mM 磷酸钾缓冲盐磷酸钾缓冲盐 pH 7.0,检测器检测器:UV 215 nm,流速流速:1.0 mL/min 色谱柱色谱柱:4.6x100mm 5m在甲醇中峰形通常会比较好,在甲醇中峰形通常会比较好,Eclipse Plus 在这个条件下非常出色。在这个条件下非常出色。14Eclipse Plus C18 对于酸碱混合物的分离峰形都是最好对于酸碱混合物的分离峰形都是最好min01234567Eclipse Plus C18Phenomenex Gemini C181.水
15、杨酸 2.乙酰水杨酸 3.右美沙芬1233Tf=1.01Tf=1.21Tf=1.12Tf=1.37Eclipse Plus色谱柱对各种类型的化合物酸、碱和中性化合物也可以得到优秀的结果色谱柱对各种类型的化合物酸、碱和中性化合物也可以得到优秀的结果15Eclipse Plus 分析样品的峰形最好分析样品的峰形最好色谱柱:4.6 x150 mm,5um 流动相:60:40 水:甲醇 流速:1 ml/min 柱温:40 C UV 254 nm样品:皮质类固醇:1.曲安西龙 2.泼尼松 3.氢化可的松 4.可的松Eclipse Plus C18N=10747Tf=1.03N=10968TF=1.040
16、5101520253035Waters XBridge C18N=8598TF=1.14N=8737TF=1.15min05101520253035Phenomenex Luna C18(2)N=9307TF=1.09N=9377TF=1.0805101520253035类固醇不是碱性化合物类固醇不是碱性化合物Eclipse Plus 同样有最好的峰形和柱效同样有最好的峰形和柱效!16苯基苯基-己基柱提供与己基柱提供与C18/C8不同的选择性不同的选择性17Zorbax Eclipse PLUS 苯基苯基-己基柱己基柱-提供不同选择性提供不同选择性3种不同Zorbax苯基柱提供了更丰富的选择性
17、18Mobile Phase:A-20mM NaPhos(pH 2.5)/B-ACN Gradient:20%B-45%B in 15 min.column:4.6 x 100mm1.8um3.5um5.0umcarbadoxthiamphenicolfurazolidoneOxolinic acidsulfamethoxineSulfaquinoxalineNalidixic acidZorbax Eclipse Plus苯基苯基-己基柱可提供三种规格的填料。粒径越小,柱效越高,分离度越好。己基柱可提供三种规格的填料。粒径越小,柱效越高,分离度越好。Zorbax Eclipse Plus 苯
18、基苯基-己基柱己基柱-不同粒径的色谱柱分析抗生素不同粒径的色谱柱分析抗生素19Zorbax主要键合相技术介绍主要键合相技术介绍?Zorbax Eclipse XDB/Plus?Zorbax StableBond Zorbax Extend Zorbax Bonus RP 20专利的键合技术,为键合相提供了空间保护作用。具有行业领先的低pH流动相稳定性。pH可以低至 1,且允许在高温(80专利的键合技术,为键合相提供了空间保护作用。具有行业领先的低pH流动相稳定性。pH可以低至 1,且允许在高温(80o oC)下操作。C)下操作。ZORBAX StableBondZORBAX StableBon
19、d色谱柱特点色谱柱特点色谱柱特点色谱柱特点键合相流失键合相流失,保留减弱保留减弱另一个裸露的硅羟基另一个裸露的硅羟基,潜在的拖尾因素潜在的拖尾因素Zorbax StableBond 空间位阻保护空间位阻保护-抗水解能力抗水解能力普通硅胶柱低普通硅胶柱低 pH 2不稳定不稳定,发生水解发生水解21在低pH和高温(pH 0.8,90C时)卓越的稳定性1.00.80.60.40.20.00 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000冲洗用流动相柱体积冲洗用流动相柱体积相对保留相对保留StableBond SB-C18(二异丁基二异丁基-C18)ZORBAX Rx
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