免疫金技术.pptx
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1、主要内容一、免疫金技术的原理二、什么是胶体金三、胶体金的特点四、胶体金的制备五、胶体金的标记六、胶体金的应用七、胶体金在电镜水平的应用一、免疫金技术的原理免疫金技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术。本质:蛋白质等高分子物质被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。免疫金技术主要是利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法,这一反应也可通过银颗粒的沉积放大,成为免疫金银染色。二、什么是胶体金胶体金是氯金酸在还原剂如:白磷、抗坏血酸、柠檬酸钠和鞣酸等作用下,聚集成
2、特定大小的金颗粒,由于静电作用成为一种稳定胶体状态的水溶胶,具有高电子密度,在碱性环境中带负电,能与蛋白质分子的正电荷基团借静电吸引而形成牢固结合。胶体金颗粒由一个基础金核(原子金Au)及包围在外的双离子层构成,紧连在金属表面的是内层负离子,外层离子层则分散在胶体间溶液中,以维持胶体金游离于溶胶间的悬浮状态。三、胶体金特点三、胶体金特点胶体金是一种带负电荷的疏水胶体溶液,在溶液中金颗粒呈圆形,边缘平滑,完整,界线清楚,因而有确定性。另一方面,胶体金的颗粒表面带较多电荷,能对蛋白质等高分子物质进行吸附结合,得到胶体金蛋白,在免疫化学或组织学中,吸附在胶体金表面的抗原或抗体能定向将胶体金颗粒载运到
3、组织或细胞内的相应抗原位置或固相载体上抗原、抗体的相应位置,由于金颗粒具高电子密度的特性,且这些标记物在固相载体上抗原抗体反应处聚集达到一定密度时(107/mm),出现肉眼可见的粉红色斑点。所以其即可用于免疫电镜、光镜的抗原定位、定量和定性研究,也可作为指示物,用于体外免疫层析分析中检测抗原或抗体存在。四、胶体金的制备根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体金颗粒。常用来制备胶体金颗粒的方法如下。白磷还原法抗坏血酸还原法柠檬酸三钠还原法硼氢化钠还原法鞣酸-柠檬酸钠还原法(参考书上第146-147页)五、胶体金标记 1、概念 抗原、抗体蛋白等生物大分子被吸附到胶体金表面的包被过程,称胶体金标记。2
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