免疫比浊法检测免疫球蛋白.pptx
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1、免疫比浊法检测免疫球蛋白免疫学系免疫学系 实验原理实验原理免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生一定大小的复合物,形成特异结合,产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后测定这种折射或吸收后的透射光或散射光的透射光或散射光作为计算单位。作为计算单位。免免疫疫比比浊浊法法分分类类当一束光当一束光线通过溶线通过溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收两个吸收两个因素的影因素的影响而使光响而使光的强度减的强度减弱弱透射比浊法透射比浊法透射比浊法透射比浊法:在光源的光路方向(在光源的光路方向(在光源的光路方向(在光源的光
2、路方向(0 0 0 00 0 0 0)测量透射光强度和被检测测量透射光强度和被检测测量透射光强度和被检测测量透射光强度和被检测溶液微粒浓度关系的方法。溶液微粒浓度关系的方法。溶液微粒浓度关系的方法。溶液微粒浓度关系的方法。散射比浊法散射比浊法散射比浊法散射比浊法:在光源的光路方向(在光源的光路方向(在光源的光路方向(在光源的光路方向(5 5 5 50-0-0-0-969696960 0 0 0)角的方向上测量透射光强度角的方向上测量透射光强度角的方向上测量透射光强度角的方向上测量透射光强度和被检测溶液中微粒浓度关和被检测溶液中微粒浓度关和被检测溶液中微粒浓度关和被检测溶液中微粒浓度关系的方法。
3、系的方法。系的方法。系的方法。透射比浊法和散射比浊法光路透射比浊法和散射比浊法光路检测器检测器A检测器检测器BICI0II 透射比浊法透射比浊法 散射比浊法散射比浊法(一)(一)基本原理基本原理v 是个极其简单的方法。在抗原过量情况下,与待测是个极其简单的方法。在抗原过量情况下,与待测样品中相应的样品中相应的IgIg发生抗原发生抗原-抗体反应,形成可溶性复合抗体反应,形成可溶性复合物,使反应介质的浊度发生改变。物,使反应介质的浊度发生改变。v 测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位(吸收单位(A A)或)或ODOD值表示,值表示,A A
4、值反映了入射光和透射光值反映了入射光和透射光的比率。待测物中的比率。待测物中IgIg含量可通过标准曲线计算得出。含量可通过标准曲线计算得出。v 待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比,而与透射待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比,而与透射光呈反比。光呈反比。v 反应在反应在PEGPEG的作用下,加速复合物的形成。的作用下,加速复合物的形成。免疫透射比浊法免疫透射比浊法透射比浊法测定原理光光源源诱诱导导剂剂样品光电计滤光片光源透射比浊法测定原理透射比浊法的缺陷:(1)溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大,分子太小则阻挡不了光线的通过。(2)溶液中的抗原抗体复合物的数量要足够多。如果数量太小,溶液浊度
5、变化太小,对光通量影响不大。(3)透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的,因此只能测定抗原抗体反应的第二阶段,检测仍需抗原抗体温育反应时间,检测时间较长。光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面光通量是每单位时间到达、离开或通过曲面的的光能数量光能数量 原理原理散射比浊法散射比浊法在入射光的在入射光的一定角度一定角度检测粒子发出的散检测粒子发出的散射光,射光,散射光的强度与散射光的强度与ICIC的含量呈正比的含量呈正比。散射比浊法测定原理增增增增加加加加散散散散透透透透率率率率:660nm:660nm测测测测定定定定散散散散射射射射光光光光聚集聚集形成形成诱导剂诱导剂散射光测定散射光测定检测器(
6、LED)光电计样品100%0%时间散射光强度 速率散射比浊法速率散射比浊法 (一)(一)基本原理基本原理 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。是测定抗原抗体结合反应的动态过程。所谓速率,是在所谓速率,是在单位时间内单位时间内抗原抗体结合形成抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起,即是动态速率及测定的散射信号连接在一起,即是动态 的速率比浊分析。的速率比浊分析。当仪器测定到某一时当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时,间内形成速率下降时,即出现即出现速率峰速率峰,该峰,该峰 值的高低,即代表所值的高低,即代
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